摘要
目的探讨将胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA转染树突细胞（DCs）最优化的方法。方法以rhGM—CSF、rhIL-4和TNF-α联合诱导外周血单核细胞以获得DCs，观察DCs的形态变化，流式细胞术检测DCs表面标志CD40、HLA—DR、CD83和CD86表达，混合淋巴细胞反应（MLR）测定DCs刺激异体T细胞增殖的能力。采用脂质体转染、电穿孔及被动转染三种方法将MiaPaCa-2总RNA转染DCs，应用实时定量PCR法检测MUC1mRNA表达，MTF法测定DCs存活率。结果所获细胞具有典型的成熟DCs形态特征，CD40、HLA—DR、CD83和CD86阳性表达率分别为34．3％、50．2％、89．2％和73．6％，对同种异体T淋巴细胞具有极强的刺激增殖作用。电穿孔法DCs转染48h后，DCs的MUC1mRNA表达量为45．39±9．33，明显高于脂质体法的31．68±7．25和被动转染法的18．53±3．26；DCs存活率为（80．36±2．43）％，较被动转染法的（91．48±5．42）％略低，但高于脂质体法的（67．44±2．51）％，且基本稳定在80％左右。结论采用电穿法将胰腺癌MiaPaCa－2细胞总RNA体外转染DCs的效率较高，且较安全。
出版日期
2011年01月11日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
