简介：摘要目的寻找脓毒症相关性急性肾损伤（AKI）的关键基因，为脓毒症相关性AKI的治疗提供理论和实验依据。方法①生物信息学分析：对基因表达数据库（GEO）中GSE30718和GSE53773数据集进行生物信息学分析，这两个数据集记录了肾移植手术前后对移植肾进行规律性肾活检的基因芯片数据，一部分患者在肾移植后发生了AKI。对两个数据集中AKI相关基因表达差异进行分析，找到在两个数据集中差异一致且受试者工作特征曲线下面积（AUC）较高的基因作为目的基因，进行后续细胞验证实验。②细胞验证实验：体外培养人近端肾小管上皮细胞株HK2，使用10 mg/L脂多糖（LPS）孵育6 h制备LPS-HK2细胞模型（LPS模型组），并设空白对照组；使用小干扰RNA（siRNA）技术对LPS-HK2细胞中通过生物信息学分析得出的目的基因进行敲减（基因敲减组），并设置基因阴性对照组。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测HK2细胞中目的基因的表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中炎症因子水平；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测细胞中凋亡关键蛋白的表达。结果①生物信息学分析结果：两个数据集间有325个基因呈现相同的表达趋势，其中144个显著下调，181个显著上调，而分泌性白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）在两个数据集中表达差异的统计学意义均较大；进一步受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析证实，GSE30718和GSE53773数据集中SLPI表达量对AKI的诊断效能均较大，AUC分别为0.83和0.92。故选择SLPI作为目的基因进行后续细胞验证实验。②细胞验证实验结果：RT-qPCR结果显示，LPS模型组细胞中SLPI表达较空白对照组显著升高（2-ΔΔCT：1.80±0.14比1.00±0.11，P<0.01），变化趋势与生物信息学分析结果相符。进一步敲减SLPI基因分析显示，基因敲减组LPS-HK2细胞培养液中炎症因子水平较阴性对照组显著上调〔白细胞介素-6（IL-6，ng/L）：509.58±27.08比253.87±75.83，IL-1β（ng/L）：490.99±49.52比239.67±26.97，肿瘤坏死因子-α（TNF-α，ng/L）：755.22±48.66比502.06±10.92，均P<0.01〕，说明SLPI可抑制LPS诱导的HK2细胞炎症反应；基因敲减组LPS-HK2细胞凋亡关键蛋白Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达均较阴性对照组显著升高〔Bax蛋白（Bax/GAPDH）：1.38±0.12比1.00±0.10，caspase-3蛋白（caspase-3/GAPDH）：1.44±0.15比1.00±0.11，均P<0.05〕，而Bcl-2表达显著降低（Bcl-2/GAPDH：0.83±0.08比1.00±0.05，P<0.05），说明SLPI可抑制细胞在炎症反应中的凋亡。结论SLPI能抑制LPS诱导的HK2细胞炎症反应和凋亡，可能参与肾小管细胞在脓毒症反应中的保护机制，成为脓毒症相关性AKI治疗的潜在靶点。

简介：摘要目的探讨术后C反应蛋白对达芬奇机器人手术系统胃癌根治术后严重并发症的预测价值。方法采用回顾性病例对照研究方法。收集2017年1月至2019年6月中国人民解放军联勤保障部队第940医院收治的298例进展期胃癌行达芬奇机器人手术系统胃癌根治术病人的临床病理资料；男253例，女45例；中位年龄为60岁，年龄范围为24~86岁。298例病人中，275例术后无严重并发症，23例术后发生严重并发症。观察指标：（1）术后严重并发症发生情况。（2）影响达芬奇机器人手术系统胃癌根治术后发生严重并发症的危险因素分析。（3）预测指标效能评价。偏态分布的计量资料以M（范围）表示。计数资料以绝对数表示，组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法。等级资料比较采用秩和检验。单因素分析采用χ2检验。多因素分析采用Logistic回归模型。绘制受试者工作曲线，以曲线下面积（AUC）判定和比较诊断标准的准确性，约登指数确定最佳截断值。结果（1）术后严重并发症发生情况。298例病人中，23例出现≥Ⅲa级并发症。其中Ⅲa级并发症10例，Ⅲb级7例，Ⅳa级4例，Ⅳb级1例，Ⅴ级1例。（2）影响达芬奇机器人手术系统胃癌根治术后发生严重并发症的危险因素分析。单因素分析结果显示：手术时间、术后第1天C反应蛋白、术后第1天中性粒细胞计数、术后第3天C反应蛋白、术后第3天白细胞计数、术后第3天中性粒细胞计数、术后第3天血小板计数、病理学分期是影响进展期胃癌病人达芬奇机器人手术系统胃癌根治术后发生严重并发症的相关因素（χ2=7.671，4.504，5.045，48.293，9.575，15.436，13.731，9.537，P<0.05）。多因素分析结果显示：手术时间≥250 min、术后第3天C反应蛋白≥16.65 mg/dL、术后第3天中性粒细胞计数≥8.167×109/L、术后第3天血小板计数≥218×109/L、病理学分期为Ⅱ期和Ⅲ期是影响进展期胃癌病人达芬奇机器人手术系统胃癌根治术后发生严重并发症的独立危险因素（比值比=3.721，16.084，6.056，6.893，12.455；95%可信区间为1.032~13.421，4.657~55.547，1.073~34.163，1.798~26.423，1.338~115.930，P<0.05）。（3）预测指标效能评价。术后第3天C反应蛋白AUC为0.851（95%可信区间为0.780~0.921，P<0.05），为高效能预测指标。术后第3天中性粒细胞计数和血小板计数AUC分别为0.659（95%可信区间为0.570~0.748，P<0.05）和0.666（95%可信区间为0.581~0.750，P<0.05），为低预测效能指标。结论达芬奇机器人手术系统胃癌根治术后第3天C反应蛋白≥16.65 mg/dL是预测术后发生严重并发症的高效能指标。