简介：摘要目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合常温机械灌注(NMP)对肝移植急性排斥反应大鼠肠道菌群的影响。方法2020年4月至10月，选取24只雄性Lewis大鼠为供体，24只雄性Brown Norway大鼠为受体，"二袖套"法建立大鼠肝移植急性排斥反应模型，根据以下处理肝脏方法将大鼠分为四组：假手术组(Sham组)、NMP组(NMP组)、NMP/BMSCs组(BMP组)和他克莫司组(FK506组)，在术后第7天处死各组大鼠，苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理学；生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量；酶联免疫吸附测定(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测血清和肠道组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量；对各组大鼠粪便标本进行高通量测序，获得16SrDNA数据。两组间数据比较采用独立样本t检验，多组数据比较采用单因素方差分析。结果BMP组肝窦内充血、炎性细胞浸润程度减轻；排斥活动指数(RAI)(4.17±0.75)低于NMP组(7.67±0.82，t＝7.720，P<0.05)，差异有统计学意义；血清ALT、AST和ALP[(254.02±35.55) U/L、(457.42±131.22) U/L、(169.60±65.61) U/L]水平低于NMP组[(362.22±57.73) U/L、(741.67±87.19) U/L、(269.93±43.51) U/L，t＝3.909、4.419、3.196P<0.05]，差异有统计学意义；肠道菌群丰度增加，变形菌门占比下降，阿克曼菌科占比上升，花生四烯酸代谢、上皮细胞的细菌侵袭通路丰度下降；血液中炎性因子TNF-α和IL-6[(66.01±12.46) pg/ml、(130.3±9.67) pg/ml]浓度低于NMP组[(127.1±17.85) pg/ml、(169.9±8.25) pg/ml，t＝6.276、6.975，P<0.05]，差异有统计学意义；肠组织中炎性因子TNF-α和IL-6[(1.85±0.17)、(3.47±0.22)]的mRNA水平低于NMP组[(2.71±0.34)、(9.45±1.34)，t＝3.955、7.604，P<0.05]，差异有统计学意义。结论BMSCs联合NMP可以减轻大鼠肝移植术后急性排斥反应，同时对大鼠肠道菌群紊乱具有调节作用。

简介：摘要目的分析血红素加氧酶-1(HO-1)修饰的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP)对肝移植急性排斥反应大鼠肠道屏障功能的影响。方法无特定病原体4~5周龄、40~60 g雄性Brown Norway(BN)大鼠2只提取BMMSCs，通过腺病毒转导HO-1；24只7~8周龄、200~220 g雄性Lewis大鼠为供体，30只8~9周龄、220~240 g雄性BN大鼠为受体，"二袖套"法建立原位肝移植急性排斥反应模型。BN大鼠随机分为5组：Sham组仅开腹关腹；NMP组供肝NMP 4 h；BMP组供肝NMP 4 h+门静脉灌注BMMSCs；HBP组供肝同BMP组，但灌注HO-1/BMMSCs；FK506组供肝NMP 4 h，肝移植术后灌胃他克莫司，每组6只。术后第14天取材检测并计算排斥活动指数(RAI)，HE染色及透射电镜分别观察肠道病理改变和超微结构，Western印迹检测肠道组织紧密连接蛋白表达，酶联免疫吸附法检测血清脂多糖、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)。结果HBP组、FK506组RAI为(2.80±0.84)分、(2.20±0.84)分，显著低于NMP组(7.60±1.14)分、BMP组(6.00±1.58)分，差异均有统计学意义(均P<0.05)。肠道HE染色NMP组肠绒毛明显稀疏、皱缩，排列杂乱，BMP组、HBP组、FK506组较NMP组肠道损伤程度减轻。电镜观察HBP组肠上皮细胞微绒毛丰富且排列整齐，细胞间紧密连接结构完整。Western印迹检测闭锁小带-1相对表达，HBP组(0.87±0.06)，高于NMP组(0.41±0.12)和FK506组(0.52±0.15)；闭合蛋白相对表达HBP组(1.28±0.26)，高于NMP组(0.27±0.18)和FK506组(0.63±0.22)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。HBP组血清脂多糖、D-乳酸和DAO浓度均低于NMP组、FK506组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论HO-1/BMMSCs联合NMP可以保护肝移植术后急性排斥反应BN大鼠的肠道屏障功能。

简介：摘要目的研究儿童肝移植术后停用免疫抑制的可行性，探究影响患儿免疫耐受的相关因素。方法收集2013年1月至2017年1月在天津市第一中心医院儿童器官移植科接受肝移植手术且术后进行免疫抑制剂撤除的14例患儿资料。其中，男8例，女6例；体质量指数（body mass index，BMI）为（20.32±4.65) kg/m2；受者移植时患儿年龄范围为0.58~0.71岁，中位年龄为0.58岁；纳入研究时患儿年龄范围为2.65~4.52岁，中位年龄为3.75岁；移植术后至纳入研究时间间隔为（3.08± 1.10）年。供者中，男6例，女8例，供者年龄为（22.84±13.93）岁。14例患儿的移植病因均为胆道闭锁，10例为活体肝移植，4例为尸体肝移植。参与撤除免疫抑制剂临床研究的患儿中，4例为移植后淋巴增殖性疾病（post transplant lymphoproliferative disorder，PTLD）而撤除免疫抑制剂。所有患儿移植术后进行免疫治疗，>6岁的患儿采用激素+他克莫司（tacrolimus，FK506 ）+吗替麦考酚酯三联用药方案，≤6岁的患儿采用激素+FK506二联用药方案。14例患儿中，10例按撤除方案撤除免疫抑制剂，4例PTLD患儿根据病理类型和临床症状单独进行免疫抑制减停治疗。所有患儿定期检测肝功能，并于纳入研究时、纳入研究1年和2年时进行程序性肝活检，采用苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色并通过Banff标准和Ishak评分系统评估患儿肝脏急性排斥反应和纤维化程度。结果14例患儿中5例成功停用免疫抑制剂，实现免疫耐受；9例患儿免疫不耐受，其中3例在随访过程中肝功能正常，程序性活检时肝脏病理结果考虑为排斥反应；其余6例在随访过程中出现肝功能异常，此6例患儿恢复免疫抑制治疗后，肝功能均恢复到正常水平。与免疫不耐受的患儿相比，免疫耐受的患儿在移植时年龄较小，移植时的中位年龄为0.58岁，范围为0.50~0.58岁，免疫不耐受的患儿移植时的中位年龄为0.67岁，范围为0.58~2.04岁，差异具有统计学意义（P=0.012，Z=-2.51）；免疫耐受的患儿直接胆红素（direct bilirubin, DBIL）水平较免疫不耐受患儿低，免疫耐受患儿移植时的DBIL中位值为2.47 μmol/L，范围为2.23~2.53 μmol/L，免疫不耐受患儿移植时的DBIL中位值为2.63 μmol/L，范围为2.52~2.99 μmol/L，差异具有统计学意义（P=0.004，Z=-2.87 ）。结论儿童肝移植术后出现免疫耐受的比例较高，患儿年龄、DBIL水平影响患儿免疫耐受。

简介：摘要目的观察巴利昔单抗联合减激素免疫抑制方案在供受者血型相容儿童肝移植中的疗效。方法前瞻性将2019年1月1日至2020年1月19日在天津市第一中心医院收治的150例供受者血型相容儿童肝移植受者按数字随机法分为实验组(75例)与对照组(75例)，实验组采用巴利昔单抗联合术中单次糖皮质激素诱导，术后单用他克莫司抗排斥方案，对照组采用常规剂量糖皮质激素诱导，术后联合应用他克莫司和糖皮质激素抗排斥方案。分析比较两组受者的临床特征、术后受者/移植肝存活率、排斥反应发生率和感染发生率的差异性。结果150例受者术后随访时间为9.2个月(0.7～15.5个月)。两组受者在肝移植3个月和1年累积存活率、急性排斥反应发生率、术后早期肺部感染发生率、巨细胞病毒及EB病毒发生率方面的差异均无统计学意义。进一步分层发现实验组中活体肝移植的56例受者中6例(10.7%)出现急性排斥反应，对照组中活体肝移植的47例受者中12例(25.5%)出现急性排斥反应，实验组中活体肝移植受者急性排斥反应发生率较低，差异有统计学意义(P＝0.043)。结论巴利昔单抗联合减量糖皮质激素免疫抑制方案可安全应用于供受者血型相容儿童肝移植受者，可降低活体肝移植儿童受者的急性排斥反应。