简介：摘要目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）/核因子κB（NF-κB）信号通路在人肾小管上皮细胞（human kideny-2，HK-2）-尿酸性肾病细胞模型中表达水平变化及其作用机制。方法体外培养HK-2细胞，随机分为对照组及实验组。实验组经高尿酸（720 μmol/L）浸泡48 h建立体外尿酸性肾病细胞模型，分为高尿酸处理组、过表达蛋白激酶活化受体2（protease activated receptor 2，PAR2）组和敲减PAR2组。实时定量PCR法检测HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA表达水平，Western印迹法检测HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB蛋白表达水平，酶联免疫吸附法检测上清液肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-1β前体（pro-interleukin-1β，pro-IL-1β）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）表达水平。结果（1）与对照组相比，高尿酸处理组HK-2细胞中PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达增加（均P<0.05），上清液中TNF-α、MCP-1、IL-6、pro-IL-1β、IL-1β、TGF-β1增加（均P<0.01）。（2）与高尿酸处理组相比，过表达PAR2组HK-2细胞中PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达明显增加（均P<0.05），上清液中TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-1β、TGF-β1明显增加（均P<0.05）。（3）与高尿酸处理组相比，敲减PAR2组HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达明显下降（均P<0.05），上清液中IL-6、pro-IL-1β、IL-1β、TGF-β1明显减少（均P<0.05）。结论尿酸致肾脏HK-2细胞损伤过程中，尿酸通过激活PAR2显著上调PI3K/AKT/NF-κB信号通路表达，导致HK-2细胞炎症损伤明显加重。敲减PAR2抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路，可有效减轻HK-2细胞炎症损伤。

简介：摘要目的观察HO-1/CO/PPAR-γ信号通路在小鼠动静脉内瘘内膜增生病理损害中的变化规律。方法选取雄性野生型小鼠随机分为模型组及对照组，每组18只。应用显微外科技术建立小鼠颈动静脉内瘘模型(模型组)，对照组仅做手术切口缝合。术后21天使用过量戊巴比妥钠处死小鼠，获取血液及病理标本。应用全自动生化分析仪检测血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、脂蛋白α、总胆红素水平；HE染色检测血管壁变化；应用分子染色方法对标记的活性氧(reactive oxygen species，ROS)进行检测；应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)测定目标基因血红素加氧酶-1(heme oxygenase，HO-1)、过氧化物酶增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferators-activated receptors-γ，PPAR-γ)及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9，MMP-9)的mRNA水平；应用Western blot法测定目标基因HO-1、PPAR-γ及MMP-9的蛋白表达；应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法测定HO-1/CO/PPAR-γ信号通路下游因子转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)、白细胞介素(interleukin，IL)-1β、IL-8表达水平。结果模型组小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和总胆红素较对照组明显降低，差异具有统计学意义[mmol/L：(3.45±0.32)比(4.03±0.16)，(1.62±0.42)比(2.06±0.35)，(3.87±0.30)比(5.11±0.26)，(0.45±0.04)比(0.65±0.09)，(11.28±1.73)比(13.47±0.87)，t值分别为－6.88、－3.41、－13.25、－8.62和－4.80，P值均<0.05]。HE染色提示，模型组小鼠静脉壁内膜厚度较对照组明显增厚，血管壁中活性氧ROS水平较对照组明显升高，差异具有统计学意义[EU/mg：(99.11±6.34)比(89.71±8.41)，t＝3.79，P<0.05]。与对照组相比，模型组小鼠HO-1/CO/PPAR-γ信号通路目标基因及蛋白HO-1、PPAR-γ 、MMP-9 mRNA表达明显升高，差异具有统计学意义[目标基因：(1.02±0.69)比(7.17±2.16) ，(0.96±0.04)比(6.75±0.24) ，(0.61±0.35)比(1.02±0.03) ，t值分别为11.51、100.96和4.95，P值均<0.05；目标蛋白：(0.07±0.02)比(0.41±0.01) ，(0.27±0.04)比(0.35±0.05) ，(0.12±0.02)比(0.45±0.08) ，t值分别为81.43、5.19和17.39，P值均<0.05]。与对照组相比，模型组小鼠HO-1/CO/PPAR-γ信号通路下游炎性因子TGF-β、IL-1β、IL-8分泌明显升高，差异有统计学意义[pg/mL：(3.52±2.92)比(27.46±2.70) ，(16.78±0.60)比(38.54±2.53) ，(35.20±1.95)比(101.71±7.75) ，t值分别为25.53、35.55和35.31，P值均<0.05]。结论HO-1/CO/PPAR信号通路参与了小鼠动静脉内瘘血管内膜增生发生发展过程，并通过提高目标基因、目标蛋白的表达水平，增强相关炎性因子的释放等途径保护内膜功能，减轻血管的损伤。