简介:摘要目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-155对人胚胎干细胞(hESCs)诱导分化的心房肌细胞L-型钙通道α1c(Cav1.2)钙电流(ICa-L)、基因及蛋白表达的影响。方法诱导并鉴定H7hESCs(购自中国科学院)分化获得的人心房肌细胞(分化第8~10天可获得),向心肌细胞转染含有miR-155前体序列或反义序列的慢病毒,分为对照组、miR-155模拟物(Mimics)组、miR-155抑制子(Inhibitors)组。于72 h后,运用膜片钳、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)以及蛋白质印迹法(Western blot)检测ICa-L、mRNA及蛋白的变化。组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果成功获得心房肌细胞,转染miR-155模拟物后,miR-155表达高于对照组(25.52±3.63比1.00±0.00,t=11.713,P<0.05),差异有统计学意义。转染miR-155抑制子后,miR-155表达低于对照组(0.59±0.07比1.00±0.00,t=10.933,P<0.05),差异有统计学意义。膜片钳结果发现miR-155上调组ICa-L明显低于对照组(-9.79±3.70比-14.27±3.95,t=2.611,P<0.05),差异有统计学意义,RT-qPCR及Western blot证实,miR-155上调组Cav1.2的mRNA表达量(0.45±0.06比1.00±0.00,t=17.226,P<0.05)及蛋白表达量(0.71±0.07比1.00±0.00,t=7.708,P<0.05)均低于对照组,差异均有统计学意义。结论对于hESCs诱导的心房肌细胞,上调miR-155可导致Cav1.2蛋白表达水平下降,ICa-L电流减小,可能参与心房肌细胞的电重构。