简介：【摘要】 目的 本研究回顾性分析我院收治的传染性单核细胞增多症（infectious mononucleosis IM）患者外周血异型淋巴细胞比率、CRP、中性/淋巴比值及EBV-DNA检测情况，分析其在传染性单核细胞增多症（IM）中的诊断价值。 方法 选取我院2020年1月至2021年7月诊断为传染性单核细胞增多症的患儿160例作为研究组，选取同期进行儿童保健的健康儿童150例作为对照组，对其进行血常规、CRP、异型淋巴细胞比率及EBV-DNA检测，计算中性粒细胞/淋巴细胞比值，比较研究组及对照组两者之间有无统计学意义。结果 本次研究结果显示，研究组异型淋巴细胞比率、中性/淋巴比值、CRP、EBV-DNA检测结果的阳性率均高于对照组，差异有统计学意义（P

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简介：摘要目的探究负压微环境对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）新生的影响及其机制。方法采用实验研究方法。取第3~5代对数生长期HUVEC进行后续实验。取3批细胞，各批次细胞均分为常规培养24 h的正常对照组和单纯负压处理组以及加入17-丙烯胺基-17-去甲氨基格尔德霉素（17-AAG）培养24 h的单纯17-AAG组与17-AAG+负压处理组，另采用自行设计研发的全自动三维细胞梯度负压加载装置对2个负压处理组细胞行持续8 h的间歇负压吸引（负压值为-5.33 kPa，吸引30 s、暂停10 s），第1个批次细胞处理完成后于培养0（即刻）、24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平，样本数为6；第2个批次细胞处理完成后进行划痕试验，于划痕后12 h，在倒置相差显微镜下观察细胞迁移情况后计算细胞迁移率，样本数为3；第3个批次细胞处理完成后进行小管形成实验，于培养6 h，在倒置相差显微镜下观察成管情况后计算细胞成管总长度与分支节点数，样本数为3。取细胞，分为正常对照组、单纯负压处理组、17-AAG+负压处理组，同前相应组别进行处理，处理完成后，采用蛋白质印迹法检测细胞中热休克蛋白90（HSP90）、窖蛋白1、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、eNOS磷酸化位点1177蛋白表达并计算eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值（样本数为3），采用免疫共沉淀（共沉淀HSP90与窖蛋白1、窖蛋白1与eNOS）与蛋白质印迹法检测各组细胞中窖蛋白1、eNOS的蛋白表达（样本数为3），采用免疫荧光双重染色法评估细胞中HSP90与窖蛋白1、窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位情况。通过HADDOCK 2.4蛋白质-蛋白质对接程序对窖蛋白1和eNOS进行分子对接预测。数据分析采用析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD法。结果与正常对照组相比，单纯17-AAG组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显降低（P<0.01），单纯负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显升高（P<0.01）；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养48、72 h均明显升高（P<0.05或P<0.01）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显降低（P<0.01）。划痕后12 h，与正常对照组的（39.9±2.7）%相比，单纯17-AAG组细胞迁移率明显降低［（10.7±2.7）%，P<0.01］，单纯负压处理组细胞迁移率明显升高［（61.9±2.4）%，P<0.01］；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞迁移率明显升高［（37.7±3.7）%，P<0.01］；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞迁移率明显降低（P<0.01）。处理完成后培养6 h，与正常对照组相比，单纯17-AAG组细胞成管总长度明显缩短（P<0.05）且分支节点数明显减少（P<0.05），单纯负压处理组细胞成管总长度明显延长（P<0.01）且分支节点数明显增加（P<0.01）；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞成管分支节点数明显增加（P<0.05）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞成管总长度明显缩短（P<0.01）且分支节点数明显减少（P<0.01）。蛋白质印迹法检测显示，处理完成后，3组细胞中eNOS、窖蛋白1蛋白表达总体比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；单纯负压处理组细胞中HSP90蛋白表达与eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值均明显高于正常对照组（P<0.01），17-AAG+负压处理组细胞中HSP90蛋白表达与eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值均明显低于单纯负压处理组（P<0.01）。处理完成后免疫共沉淀与蛋白质印迹法检测显示，与正常对照组相比，单纯负压处理组细胞中窖蛋白1蛋白表达明显升高（P<0.01），eNOS蛋白表达明显降低（P<0.05）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组处理完成后细胞中窖蛋白1蛋白表达明显降低（P<0.01），eNOS蛋白表达明显升高（P<0.01）。处理完成后，与正常对照组相比，单纯负压处理组细胞中HSP90与窖蛋白1的蛋白共定位明显增多，窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位明显减少；与单纯负压处理组比，17-AAG+负压处理组细胞中HSP90与窖蛋白1的蛋白共定位明显减少，窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位明显增多。分子对接预测提示，窖蛋白1与eNOS相互作用较强，抑制eNOS 1177位点的磷酸化。结论负压微环境可能通过促进HUVEC中HSP90结合窖蛋白1进而抑制窖蛋白1结合eNOS，以解除窖蛋白1对eNOS 1177位点磷酸化的抑制，从而促进HUVEC增殖、迁移和成管，最终促进HUVEC新生。

简介：摘要目的探讨负载大鼠表皮干细胞（ESC）的聚己内酯-乙酸纤维素（PCL-CA）纳米纤维支架对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制。方法采用实验研究方法。采用快速贴壁法从30只1~3 d龄SD大鼠（雌雄不明）中分离培养原代ESC，采用流式细胞仪、免疫荧光法分别鉴定原代细胞中整合素β1、细胞角蛋白19（CK19）为阳性表达后，采用第1代ESC进行后续实验。采用静电纺丝技术制备以聚己内酯和乙酸纤维素为组分的PCL-CA纳米纤维支架，采用扫描电子显微镜观察支架拓扑结构并测量其中25条纤维直径。采用构建的PCL-CA纳米纤维支架作为培养基底，使用角质形成细胞（KC）培养基培养ESC构建ESC-纳米纤维支架复合物（下称ESC支架），培养3 d，采用扫描电子显微镜观察支架中ESC的形态及其与支架的关系。将ESC支架中的ESC作为PCL-CA纳米纤维支架组，将在Ⅳ型胶原包被的培养皿中使用KC培养基培养的ESC作为Ⅳ型胶原组，培养3 d，采用蛋白质印迹法检测2组ESC中CK19的蛋白表达水平（样本数为3）；培养7 d，采用免疫荧光法检测2组ESC中CK19和增殖细胞核抗原（PCNA）的蛋白表达。在15只6～8周龄雄性SD大鼠背部左右两侧均制备1个直径约2 cm的圆形全层皮肤缺损创面后，将大鼠按随机数字表法等分为不行植入的空白对照组、植入PCL-CA纳米纤维支架的单纯支架组、植入培养3 d构建的ESC支架的ESC支架组，计算伤后3、7、14、21 d创面面积百分率（样本数为5）；取伤后21 d创缘新生皮肤组织，行Masson染色后评估创面愈合质量，采用蛋白质印迹法检测Notch信号通路关键蛋白Notch1、Jagged1、Hes1的蛋白表达水平（样本数为3）。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、独立样本t检验、Bonferroni校正。结果构建的PCL-CA纳米纤维支架具有疏松多孔的网格状多层立体结构，其中的纤维表面光滑无孔隙，纤维直径为（383±24）nm。培养3 d，ESC支架中的ESC具有完整的细胞结构且与支架紧密贴合，细胞间相互连接，细胞充分伸展在支架表面形成膜片。培养3 d，PCL-CA纳米纤维支架组ESC中CK19蛋白表达水平显著高于Ⅳ型胶原组（t=24.56，P<0.01）。培养7 d，与Ⅳ型胶原组相比，PCL-CA纳米纤维支架组ESC中PCNA表达阳性细胞比例无明显变化，CK19表达阳性细胞比例更高。伤后3、7、14、21 d，ESC支架组大鼠创面面积百分率分别为（78.0±1.8）%、（40.9±2.0）%、（17.9±1.1）%、（5.0±1.0）%，显著低于空白对照组的（84.2±1.9）%、（45.4±2.6）%、（21.8±1.7）%、（10.1±1.1）%（t=5.42、3.09、4.33、7.58，P<0.05或P<0.01）以及单纯支架组的（82.7±1.2）%、（44.8±2.0）%、（22.4±2.4）%、（10.3±2.4）%（t=4.98、3.11、3.84、4.57，P<0.05或P<0.01）；空白对照组与单纯支架组大鼠创面面积百分率相近（t=1.47、0.39、0.47、0.22，P>0.05）。伤后21 d，各组大鼠创缘新生皮肤层次完整；与空白对照组和单纯支架组相比，ESC支架组大鼠创缘新生皮肤组织中胶原排列更加整齐；ESC支架组与单纯支架组大鼠创缘新生皮肤组织中支架均完全降解。伤后21 d，单纯支架组大鼠创缘新生皮肤组织中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平与空白对照组相近（t=1.70、1.94、0.18，P>0.05），ESC支架组大鼠创缘新生皮肤组织中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平显著高于单纯支架组（t=13.31、22.07、20.71，P<0.01）。结论在体外培养条件下，PCL-CA纳米纤维支架能够抑制大鼠ESC的分化而不影响其增殖；利用PCL-CA纳米纤维支架作为载体培养大鼠ESC构建的ESC支架能够显著促进大鼠全层皮肤缺损创面的愈合，其机制可能与Notch信号通路的激活有关。