简介：目的:建立无线粒体DNA(mtDNA)的人肺腺癌ρ^0A549细胞系。方法:在含50ng/mL溴化乙锭(EB)、100μg/mL丙酮酸钠和50μg/mL尿嘧啶核苷的RPMI1640细胞培养基中传代培养A549细胞;用低剂量EB连续诱导培养35d后,采用光镜观察、TaqMan探针法实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹鉴定无mtDNA的ρ^0A549细胞系;采用MTT法测定ρ^0A549细胞增殖曲线。结果:倒置显微镜下野生型ρ^+A549细胞为多角形,ρ^0A549细胞形态呈拉长枝状;qPCR结果显示,低剂量EB诱导35d的ρ^0A549细胞中无mtDNA的存在。Western印迹结果显示,ρ^+A549细胞中能表达核基因编码的线粒体蛋白SDHA和ATP5A,也能表达线粒体基因组编码的蛋白MT-COXI和MT-ATP6;ρ^0A549细胞中无MT-COXI和MT-ATP6蛋白表达,但核基因编码的SDHA和ATP5A蛋白能够正常表达。MTT结果显示,与ρ^+A549细胞相比,ρ^0A549细胞生长速度明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建和鉴定了无mtDNA的人肺腺癌ρ^0A549细胞系,为后续探讨mtDNA缺失或突变与人肺腺癌发生之间的关系奠定了实验基础。

简介：目的：丹参酮Ⅱ-A是丹参的一种重要成分。研究丹参酮Ⅱ-A的抗炎症机制。方法：以小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7作为药物刺激靶细胞，使用不同浓度的分析纯丹参酮Ⅱ-A对RAW264.7细胞系进行刺激，在细胞被刺激24、48h后，使用MTT比色法和半定量RT-PCR法对刺激后的细胞进行检测。结果：通过MTT比色法检测，发现丹参酮Ⅱ-A抑制炎症细胞的增殖，初步计算出丹参酮Ⅱ-A的半抑制浓度（IC50）为43.2μmol/L；在半定量RT-PCR实验中发现，在发生炎症后，丹参酮Ⅱ-A通过抑制磷脂酶A2来减轻炎症。结论：在炎症发生后，丹参酮Ⅱ-A通过抑制磷脂酶A2来达到其抗炎症的作用。