简介:摘要目的制备超活化富血小板裂解液(super-activated platelet lysate,sPL),研究其对雄激素性脱发(androgenetic alopecia,AGA)小鼠模型的毛囊再生的影响,为sPL治疗AGA的临床研究提供基础。方法使用超滤离心从全血中分离富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP),用冻融方式将血小板裂解制备血小板裂解液(platelet lysate,PL)。用CaCl2结合肝素激活PRP中的血小板,冻融裂解血小板的同时用温度浮动控制方法去除纤维蛋白原,获得sPL。通过ELISA分析PRP、PL及sPL中毛囊再生相关因子含量。用丙酸睾酮注射建立C57bl/6小鼠AGA模型后,用sPL进行治疗,取小鼠背部皮肤,苏木素伊红染色判断sPL对毛囊再生的作用。结果经超滤离心及激活获得的sPL中,数种毛囊再生相关因子较PRP及PL均显著增加。AGA小鼠经sPL治疗后毛发再生明显,同时毛囊密度恢复至对照组水平(t=1.149,P=0.269 9)。结论相对于PRP与PL,sPL制备方法可获得更高的生长因子含量,且sPL对AGA小鼠具有显著的毛囊再生作用。
简介:摘要目的研究脐带间充质干细胞上清液对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的保护作用及机制。方法选择6周龄C57BL/6雄性小鼠共40只,随机数字法分为假手术(sham)组,LPS模型组,LPS+人脐带间充质干细胞上清液(HucMSC-cm)(LPS+cm)治疗组,LPS+HucMSC-cm+Compound C(LPS+cm+cc)干预组,每组10只。通过气管内注射LPS 5 mg/kg构建ALI模型,4 h后予以气管内注射HucMSC-cm 50 μL/只构建治疗组;干预组在LPS及HucMSC-cm前30 min予腹腔注射Compound C 15 mg/kg;72 h后留取小鼠外周血检测中性粒细胞比例,并处死小鼠留取肺组织。通过苏木精-伊红染色检测小鼠肺组织病理学改变,Western Blot及免疫组化法分析肺组织中IL-6、ICAM-1、VCAM-1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphate AMP-activated protein kinase, p-AMPK)的表达。体外培养人肺微血管内皮细胞(HuLEC-5a),将细胞分为三组:control组、LPS组(10 μg/mL)、LPS+HucMSC-cm组。处理24 h后,Western Blot检测p-AMPK及AMPK蛋白表达水平,RT-PCR检测IL-6及IL-8的mRNA表达。多组间比较采用单因素方差分析,两组比较采用Tukey法检验。结果与sham组相比,LPS组小鼠肺组织充血水肿加重,肺间隔增厚和炎性细胞浸润增多,肺组织IL-6(P=0.003)、ICAM-1(P<0.001)及VCAM-1(P=0.001)蛋白水平明显上升,p-AMPK蛋白水平表达下降(P=0.013),外周血中性粒细胞比例上升(P<0.001),LPS+HucMSC-cm组肺组织充血水肿及病理学损伤较LPS组得到改善,肺组织中IL-6(P=0.003)、ICAM-1(P=0.001)及VCAM-1(P=0.006)蛋白水平下降,p-AMPK蛋白水平表达上升(P=0.002),外周血中性粒细胞比例下降(P<0.001),而LPS+cm+cc组肺组织病理学损伤较LPS+HucMSC-cm组再次加重,肺组织IL-6、ICAM-1及VCAM-1蛋白水平明显上升,p-AMPK蛋白水平表达下降,免疫组化法得到与蛋白相一致的结果。体外实验中,LPS处理后,IL-6(P<0.001)及IL-8(P=0.027)的mRNA表达较control组上升,且p-AMPK蛋白水平下降(P=0.005);LPS+HucMSC-cm组较LPS组IL-6(P=0.003)及IL-8(P=0.002)的mRNA表达下降,p-AMPK蛋白水平上升(P=0.003)。结论人脐带间充质干细胞上清液通过激活AMPK活性改善LPS诱导的ALI。
简介:摘要目的探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象,其中男3例、女3例,年龄26~49岁、中位年龄33岁,受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本,先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP);再加入0.08 mmol/L CaCl2, 37 ℃孵育激活血小板;然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原,获得sPL。培养RA-FLS,分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组,分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度;细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性;流式细胞术测定各组细胞的凋亡率;体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。结果(1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL,TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL,IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL,组间比较差异均有统计学意义(F=12.186、11.934、10.709,P值均<0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%,细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%,小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个,迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个,侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个,组间比较差异均有统计学意义(F=8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组,细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P值均<0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组,而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用,对RA-FLS凋亡具有促进作用,且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。
简介:摘要目的比较DX保存液与甘油保存液对人角膜基质透镜的保存效果。方法收集2019年2—5月于山东第一医科大学附属青岛眼科医院在飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术中取出的中高度近视患者30例60眼的完整角膜基质透镜标本,采用随机数表法将标本分为正常对照组、DX保存液保存1 d组、DX保存液保存1周组、甘油保存1 d组、甘油保存1周组和甘油保存2周组,每组10个标本。采用锥虫蓝染色法检测不同保存方法角膜基质透镜细胞死亡数;光学显微镜下观察角膜基质透镜形态结构的完整性;透射电子显微镜下观察保存的角膜基质透镜超微结构。结果DX保存液保存1 d组、DX保存液保存1周组、甘油保存1 d组、甘油保存1周组和甘油保存2周组细胞死亡数分别为(53.1±14.2)、(50.8±9.8)、(70.4±13.6)、(172.8±31.7)和(182.8±14.2)个/视野,总体比较差异有统计学意义(F=16.37,P<0.05);DX保存液保存1 d组与DX保存液保存1周组角膜基质透镜死亡细胞数量差异无统计学意义(P>0.05);甘油保存1 d组细胞死亡数明显少于甘油保存1周组和甘油保存2周组,甘油保存1周组死亡细胞数明显多于DX保存液保存1周组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组角膜基质透镜胶原纤维排列规则;DX保存液保存1 d组和DX保存液保存1周组角膜基质组织胶原纤维排列较整齐,细胞较完整,甘油保存1 d组角膜基质组织水肿,细胞核裸露,随着甘油保存时间的延长,组织内胶原纤维逐渐变疏松。透射电子显微镜下可见DX保存液保存1 d组和DX保存液保存1周组角膜基质组织紧密,胶原纤维致密,细胞核完整;甘油保存1周组细胞分布稀疏,细胞结构不完整,甘油保存2周组细胞分布明显稀疏,细胞结构破坏。结论人角膜基质透镜用DX保存液保存1周可有效保存角膜基质组织和维持细胞结构。DX保存液对角膜基质透镜的保存效果优于甘油保存液。
简介:摘要随着微量标本和高通量检测技术的发展,极少量眼内液标本可同时提供多种重要的眼内微环境信息,为多种疾病的诊断、监测和随访提供重要的定性和定量依据。为规范眼内液标本的采集过程,明确各种眼内液检测手段的实用价值及眼内液检测本身在眼科临床实践中的地位,本文介绍了房水和玻璃体标本的采集方法和要点以及多种常用检测方法的特点和适用条件,讨论了眼内液检测的总体原则,以期为眼科临床开展相关工作提供参考。(中华眼科杂志,2020,56:313-317)
简介:摘要目的比较糖尿病肾病患者采用血塞通注射液、丹参注射液辅助治疗的临床效果。方法回顾性分析2018年6月至2020年10月运城市中医医院收治的76例糖尿病肾病患者的临床资料,所有患者均接受常规治疗,依据辅助治疗方式将接受血塞通注射液与丹参注射液治疗患者分别纳入血塞通组(42例)、丹参组(34例)。比较两组治疗效果,治疗前后肾功能、血液流变学指标变化及不良反应发生率。结果血塞通组治疗总有效率(95.24%,40/42)高于丹参组(73.53%,25/34),P<0.05。治疗后,两组肌酐、尿白蛋白排泄率、尿微量蛋白、尿素氮以及尿微量白蛋白与尿肌酐比值等肾功能指标较治疗前改善(P<0.05),且血塞通组上述肾功能指标低于丹参组(P<0.05)。治疗后两组血浆黏度、全血低切黏度、全血中切黏度、血流方程K值、全血高切黏度、红细胞聚集指数以及血细胞比容等指标较治疗前下降(P<0.05),且血塞通组上述血液流变学指标低于丹参组(P<0.05)。血塞通组不良反应发生率(14.29%,6/42)与丹参组(26.47%,9/34)比较差异未见统计学意义(P>0.05)。结论糖尿病肾病采用血塞通注射液治疗疗效优于丹参注射液,可明显改善患者肾功能、血液流变学状态。
简介:摘要目的建立乙二醇单甲醚的代谢产物尿中甲氧基乙酸的柱前衍生-液液微萃取-气相色谱测定法。方法向尿样中加入磷酸盐缓冲液、叔丁氧基乙酸(内标物)、五氟苄基溴(衍生剂),随后置于90 ℃水浴锅中衍生40 min,冷却后过滤,二氯甲烷萃取,振荡离心后吸取下层有机相注入气相色谱仪,DB-5毛细管色谱柱分离,ECD检测器检测。结果尿中甲氧基乙酸浓度在0.6~60.0 mg/L时线性关系良好,相关系数>0.999,平均回收率为76.6%~110.7%,日间精密度为8.00%~8.82%,检出限为0.13 mg/L。结论该方法灵敏度高,有机试剂用量少,适用于职业接触乙二醇单甲醚人群尿中甲氧基乙酸的检测。
简介:摘要1例25岁女性因便秘自行服用苁蓉通便口服液20 ml、1次/d。间断服药3个月后患者逐渐出现尿黄、皮肤及巩膜黄染,伴恶心、呕吐、食欲下降等症状。4个月后实验室检查示:丙氨酸转氨酶(ALT)1 359 U/L,天冬氨酸转氨酶(AST)859 U/L,碱性磷酸酶(ALP)160 U/L,总胆红素(TBil)131.5 μmol/L,直接胆红素(DBil)99.3 μmol/L。考虑为苁蓉通便口服液所致肝损伤,遂停用该药,给予异甘草酸镁注射液200 mg溶于5%葡萄糖注射液250 ml静脉滴注、1次/d,多烯磷脂酰胆碱注射液20 ml溶于5%葡萄糖注射液250 ml静脉滴注、1次/d。治疗后,患者症状逐渐好转。2周后,患者尿色基本正常,消化道症状消失,复查肝功能:ALT 137 U/L,AST 87 U/L,ALP 126 U/L,TBil 34.9 μmol/L。2个月后随访,患者的肝功能恢复正常。患者的肝损伤很可能与苁蓉通便口服液中的何首乌成分有关。
简介:摘要目的建立HPLC波长切换法同时测定参芪益气口服液中绿原酸、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的方法。方法采用反相高效液相法,色谱柱为Agilent HC-C18(250 nm×4.6 nm,5 µm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,采用波长转换法,绿原酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷检测波长为260 nm,阿魏酸为327 nm。结果绿原酸、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷线性范围分别为70.40~704.00 μg(r=0.999 8)、1.36~13.60 μg(r=0.999 8)、1.28~12.80 μg(r=0.999 7),平均加样回收率分别为99.44%(RSD=2.54%)、101.06%(RSD=1.57%)、98.00%(RSD=2.09%)。结论所建立的HPLC法方便、简便、准确,适用于同时对参芪益气口服液中绿原酸、阿魏酸及毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定。
简介:摘要近年来,诺卡菌的病例报道逐渐增多,目前脓液诺卡菌导致肺部感染的病例报道罕见。本文报道1例脓液诺卡菌肺部感染病例,通过分析诺卡菌的临床感染特征、影像学变化、检验结果以及药物治疗过程,为该病的诊治提供帮助,加强临床、药学及检验等多学科的协助诊疗。
简介:小儿腹泻是每位家长最常见且最担心的儿童疾病,特别是夏末初秋时节,是小儿腹泻的高发季,一旦发生腹泻且持续反复发作,必须要提高警惕,以免腹泻严重造成小儿脱水,导致小儿虚脱,威胁其生命安全。小儿腹泻怎么办?发生腹泻的危害以及紧急补救措施有哪些?下面将详细介绍。