简介：目的：建立SYBRGreenⅠ实时荧光PCR定量检测人POT1基因的方法。方法：依据人POT1基因及参照基因TBP基因序列设计引物，以人类乳腺癌细胞系MCF-7总RNA逆转录合成的cDNA为模版，以TBP基因为参照基因，应用SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测POT1基因的表达。结果：POT1和TBP基因熔解曲线为单峰，无杂峰及二聚体。POT1基因及参照基因TBP基因扩增效率相同（直线斜率0．0171〈0．1）。POT1基因批内变异与批间变异分别为1.3％和2.1％；TBP基因批内变异与批间变异分别为1．2％和2．6％。结论：建立了SYBRGreenⅠ实时定量检测人类POT1基因的方法，该方法简单快速，经济，灵敏度高，特异性和重复性好，可用于人类POT1基因的定量分析。

简介：目的：探讨甲氧基聚乙二醇（mPEG）遮蔽修饰的红细胞RhD血型抗原的有效性和稳定性以及被修饰红细胞结构和功能的变化。方法：用mPEG-SPA修饰RhD血型阳性人红细胞，观测修饰和未修饰红细胞的抗-D凝集反应性、mPEG结合产物稳定性、电镜下细胞形态、变形指数、渗透脆性、自身溶血率、2，3-二磷酸甘油酸含量、膜Na^＋,K^＋ATP酶、乙酰胆碱酯酶活性和胆固醇含量。结果：0．5mmol／L、1．0mmol／L、2．Ommol／L、2．5mmol／L和5．0mmol／L的mPEG-SPA修饰红细胞与抗D的凝集反应情况依次为50％凝集、可见凝集、无凝集、无凝集、无凝集，在4℃保存14d和在37℃保存2d的修饰红细胞与抗D均无凝集反应，而末修饰红细胞则全凝集。电镜下修饰和未修饰红细胞均为双凹圆盘状形态．细胞大小均一。修饰和未修饰红细胞的各观测指标分别为：2，3-二磷酸甘油酸含量（71．00±12．88）mmol／L和（65．13±13．98）mmol／L，红细胞沉降率（2．75±2．05）mmjh和（8．00±3．82）mm／h，细胞变形指数（0．98土0．18）和（0．98士0．29），自身溶血率（2．27±0．28）％和（1．32±0．32）％，渗透脆性（0．44±0．06）％和（0．44±0．03）％，膜胆同醇含量（0．10±0．03）g／i．和（0．10±0．06）g／L，Na^-，K^-ATP酶活性（4．834±1．27）U／mg和（5．41±1．32）U／mg，乙酰胆碱酯酶活性（27．88±5．09）U／mg和（29．68±4．165U／mg。修饰红细胞的沉降速率低于未修饰红细胞，自身溶血率高于未修饰红细胞（P＜0．05），但是修饰红细胞沉降速率和自身溶血率都在参考值范围。结论：2．0mmol／L的mPEG-SPA能够有效并且稳定地遮蔽红细胞RhD血型抗原。修饰红细胞具有未修饰红细胞的双凹圆盘状形态、细胞膜结构、变形性和运送氧气能力．

简介：目的:探讨微柱凝胶抗人球蛋白法(MGT-AGT)替代Coombs试验检测IgG抗体的敏感性和对临床患者血液标本直接抗人球蛋白试验(DAT)阳性检出率。方法:采用MGT-AGT法对不同浓度的DAT阳性标本或IgG抗D致敏红细胞及IgG游离抗D抗体进行实验比较,并用MGT-AGT法、凝聚胺试验(MPT)和Coombs试验,对81例临床患者的血液标本DAT阳性检出率进行了比较。结果:对于DAT阳性标本或IgG抗D致敏的红细胞的检测,MGT-AGT法在1:128稀释时可以检出,MPT法在1:32稀释时可以检出,Coombs试验在1:32稀释时可以检出。对于IgG游离抗D抗体的检测,MGT-AGT法在1:32稀释时可以检出,MPT法在1:16稀释时可以检出,Coombs试验在1:16稀释时可以检出。对于81例临床患者血液标本DAT阳性的检出率,MGT-AGT法为:免疫性溶血性贫血患者87.8%,新生儿溶血病患者68.2%,系统性红斑狼疮患者55.5%;MPT法分别为75.6%、54.5%和33.3%;Coombs试验分别为78.1%、54.5%和11.1%,MGT-AGT法的敏感性高于MPT法和Coombs试验(P<0.01)。结论:MGT-AGT法检测DAT阳性标本、IgG抗D致敏的红细胞、IgG游离抗D抗体的敏感性和对临床患者血液标本DAT阳性的检出率均高于MPT法和传统的Coombs试验。

简介：目的：比较高效价抗人球（效价≥1：512）蛋白、抗人球蛋白试剂（效价≥1：4）（低效价）与微柱凝胶法在自身免疫性溶血性贫血（AIHA）实验室检测中的优势。方法：首先以微柱凝胶法直抗试验筛选阳性血液标本，然后对上述标本分别用高效价抗人球蛋白（效价≥1：512）、抗人球蛋白试剂（效价≥1：4）做直抗半定量试验，γ中和试验。结果：微柱凝胶法易出现假阳性，抗人球蛋白试剂（效价≥1：4）易出现假阴性。高效价抗人球（效价≥1：512）未发现假阳性，而且凝集梯度明显，易于结果判断分析。结论：高效价抗人球（效价≥1：512）在AIHA直抗试验中，较抗人球蛋白试剂（效价≥1：4）与微柱凝胶法具有结果更加准确的明显优势。