简介:以痢疾志贺氏菌为抗原免疫产蛋母鸡.从鸡卵黄中提取免疫球蛋白.建立抗痢疾志贺氏菌的特异性IgY的效价检测方法.并研究母鸡的免疫应答性以及抗体的提取方法和体外抑菌效果。研究结果表明:用10^8cfu/mL和1^9cfu/mL剂量的抗原分别免疫的鸡的卵黄中.于初洗免疫后的第12天出现抗痢疾志贺氏菌IgY,两组效价均为1:3600。经加强免疫后效价迅速上升,至第48天低剂量免疫组达到最高效价1:28800;第60天高剂量免疫组达到最高效价1:57600。低剂量免疫组的效价维持了210d,高剂量免疫组的效价在免疫后360d时仍维持在1:7200水平。用水稀释法、硫酸铵溶液分级盐析、SephadexG-25凝胶过滤CA提取IgY,提纯后IgY的效价翻倍。SDS—PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带。体外抑茼实验表明,IgY能抑制痢疾志贺氏菌的生长.
简介:目的:探讨菲律宾蛤仔酶解多肽的制备方法以及体外抗前列腺癌PC-3、DU-145细胞的活性。方法:以胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶4种蛋白酶为供选酶种,以酶解液中游离ANN含量和腥味值为测量指标,对酶种进行筛选,以获得最佳酶解工艺。选择分子质量3ku以下的酶解液分离纯化,所得多肽通过MTT法、AO/EB染色,做体外抗前列腺癌细胞试验。结果:胰蛋白酶酶解效果最佳,最佳酶解条件组合是pH8.0,温度50℃,酶解时间8h,加酶量1200u/g。分子质量3ku以下的酶解液能抑制PC-3、DU-145细胞生长,出现细胞凋亡的形态学改变。结论:由胰蛋白酶酶解所得多肽,在体外能抑制前列腺癌PC-3和DU-145细胞生长,诱导细胞凋亡。
简介:目的:对虾夷扇贝生殖腺酶解液的凝胶特性进行研究,为虾夷扇贝的综合利用提供研究基础。方法:以雄性生殖腺为原料,采用中性蛋白酶进行酶解,用质构仪和流变仪测定酶解液的凝胶特性,并通过分析氨基酸组成,分子质量变化和脱氧核糖核酸酶(DNase)的作用探讨凝胶形成机理。结果:虾夷扇贝雄性生殖腺经中性蛋白酶(3000U/g蛋白)酶解,随着水解时间的延长,酶解液的硬度、凝聚性和黏附力均显著提高,在3h时可分别达到(80.86±6.87)g,(600.98±91.05)g·s和(28.85±6.17)g。该酶解液在质量浓度50-100mg/mL范围,储能模量G′占主导,显示出弹性特性。随着酶解液质量浓度的增大,G′、损耗模量G″和复数黏度η*均增大。酶解液具有明显的剪切稀化现象,为非牛顿流体中的塑料流体。虾夷扇贝雄性生殖腺中含有脯氨酸、亮氨酸、丙氨酸等疏水性氨基酸,酶解后高于14.3ku的条带明显降解,通过DNase处理可明显降低酶解液的凝胶性。结论:虾夷扇贝雄性生殖腺酶解液的凝胶特性可能与疏水性氨基酸和脱氧核糖核酸有关。
简介:根据转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9外源基因的旁侧序列,采用ABIPrimerExpress3.0设计引物和TaqMan探针,建立转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9品系特异实时荧光定量PCR检测方法。采用该检测方法对DAS-40278-9玉米含量为1%(质量分数)的标准样品进行检测,结果显示,采用建立的方法获得的标准曲线,通过斜率、相关系数、扩增效率判断是可靠的,待测样品的定量检测结果为1.024%,非常接近真实值。本试验表明建立的转基因抗除草剂玉米DAS-40278-9品系特异定量PCR检测方法的特异性好,灵敏度和准确度高,值得推广应用。