简介:摘要目的观察灯盏细辛(EBHM)调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对大鼠急性高眼压的影响及视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法雄性Sprague-Dawley大鼠60只,采用随机数字表法分为对照组、模型组、EBHM低剂量组(A组)、EBHM中剂量组(B组)、EBHM高剂量组(C组),每组均为12只;以左眼为实验眼。模型组、A组、B组、C组大鼠通过前房加压灌注生理盐水构建急性高眼压模型;对照组仅给予全身麻醉。建模后2~ 30 d,对照组、模型组大鼠灌胃生理盐水3 ml,1次/d;A组、B组、C组大鼠分别给予0.30、0.45、0.60 g/100 g EBHM灌胃,1次/d。建模前以及建模后1、14、30 d测量大鼠眼压,并统计高眼压模型比例。建模后30 d,苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜组织病理变化;免疫荧光染色检测RGC数量变化;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组大鼠视网膜中p38MAPK、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)mRNA相对表达量;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠视网膜中p38MAPK、磷酸化p38MAPK (p-p38MAPK)、Caspase-3蛋白相对表达量。多样本间比较采用单因素方差分析;两两样本间比较采用SNK-q检验。结果建模后1 d,对照组大鼠均未出现急性高眼压,其余各组均建模成功。与模型组比较,B组、C组建模后14 d急性高眼压率较低,差异有统计学意义(χ2=98.701,P<0.05);A组、B组、C组建模后30 d急性高眼压率均为0。A组、B组、C组建模后14、30 d之间急性高眼压率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,对照组大鼠视网膜结构完整,各层清晰可见;RGC计数未见异常,形态饱满圆润。模型组大鼠视网膜明显变薄;RGC数量大量减少,形态空泡化,排列稀疏。A组、B组、C组大鼠视网膜变厚,RGC数量增多,其中C组视网膜结构恢复程度更好。免疫荧光染色结果显示,A组、B组、C组大鼠RGC计数较模型组升高,差异有统计学意义(F=297.514,P<0.05 );组间两两比较,A组低于B组、C组(q=2.842、5.263),B组低于C组(q=2.457 ),差异均有统计学意义(P<0.05 )。RT-qPCR、Western blot检测结果显示,与模型组比较,A组、B组、C组大鼠视网膜中Caspase-3 mRNA (F=267.912)、蛋白(F=692.279)相对表达量及p-p38MAPK蛋白相对表达量(F=150.061)均降低,差异均有统计学意义(P<0.05 )。组间两两比较,C组大鼠视网膜中Caspase-3 mRNA (q=6.977、15.642 )、蛋白(q=6.997、15.642)相对表达量及p-p38MAPK蛋白(q=12.443、24.358)相对表达量低于A组、B组,B组低于A组(q=11.678、12.471、10.204),差异均有统计学意义(P<0.05 )。结论EBHM可以显著降低急性高眼压模型大鼠眼压,提高RGC计数,减轻视网膜损伤;其调控机制可能与MAPK通路有关。