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  • 简介:目的探索真菌DNA提取方法,该方法操作简便,提取效率高,耗时较短,应用范围广.方法将酶消化Chelex-100提取DNA方法联合起来,配制DNA提取试剂.通过真菌ITS4ITS5通用引物进行PCR,对新DNA提取试剂同市售Takaralysisbuffer在DNA提取方面的效能进行评价,同时对DNA浓度纯度进行测定.结果实验所用34株真菌,自配试剂成功提取出32株真菌DNA;Takaralysisbuffer成功提出27株真菌DNA.对于两种方法都没能提出DNA2株真菌,经液氮研磨破壁后,自制试剂均成功提取;而Takaralysisbuffer仅成功提取DNA1株.结论同市售试剂Takaralysisbuffer比较,自配DNA提取液提取DNA质量相对较高,可用于临床常见感染真菌PCR诊断.对于某些真菌,提取DNA之前先进行菌体破壁必要.

  • 标签: 蛋白酶K 蜗牛酶 Chelex-100 DNA提取
  • 简介:目的:观察比较不同融合术式PLIF(posteriorlumbarinterbodyfusion)PLF(postero1ateralfusion)在下腰椎单节腰椎滑脱治疗疗效。方法:我们采用回顾性分析方法,对于2013年1月到2016年1月在我院诊断为腰椎滑脱症并行腰椎融合外科手术患者进行观察分析。经纳入及排除标准筛选后,共有142名患者纳入本研究。根据融合手术术式不同,分为PLIF组(82人)PLF组(60人)。对于两组患者在术前与术后3月、12月疼痛评分,功能障碍程度指数(JOA),出血量、手术时间、并发症等指标进行记录比较。结果:纳入本课题患者均接受了至少1年连续全面的随访。两组患者在术后(1月及12月)VAS疼痛评分均显著优于术前。但PLIF组在术后12月时VAS评分及融合率显著优于PLF组。在手术时间,出血量,花费、并发症等指标,PLF优于PLIF组。两组在住院时间,卧床时间,JOA评分等指标的比较并无显著性差异。结论:对于单节下腰椎滑脱患者来讲,使用PLIF能够取得较好症状改善,融合率较高。但PLF同样具有其独特优势。在临床工作应该个性化进行手术术式选择。

  • 标签: 椎间融合术 后外侧融合术 融合率 临床疗效
  • 简介:目的观察豚鼠频闪光诱导性近视形觉剥夺近视模型中短波视蛋白(S-opsin)表达差异,并初步探讨原因。方法36只普通级2周龄豚鼠随机分成三组:频闪组(FLM组,n=13),形觉剥夺组(FDM组,n=12),对照组(n=11)。FLM组,饲养笼具安装有频闪仪(频率0.5Hz),笼具内装有发光二极管;FDM组豚鼠右眼用半透明眼罩遮盖,并确保豚鼠眼睑能正常活动;对照组豚鼠不予特殊处理。在造模第1天(0周)第6周测量豚鼠右眼屈光度、眼轴长度和角膜曲率半径,并通过免疫荧光法观察S-opsin表达。结果第0周,FLM、FDM组与对照组屈光度、眼轴长度、角膜曲率半径差异均无显著性(P〉0.05)。造模6周后,与对照组相比,FLM组、FDM组屈光度变化值、眼轴长度变化值差异均有显著性(P〈0.05),而角膜曲率半径变化值差异无显著性(P=0.358),提示成功建立近视模型。FLM组与FDM组相比,屈光度变化值、眼轴长度变化值、角膜曲率半径变化值差异均无显著性(P〉0.05)。免疫荧光结果显示:FLM组视蛋白灰度值〉对照组视蛋白灰度值〉FDM组视蛋白灰度值,任意两组进行比较,差异均有显著性(P〈0.001)。结论频闪光和形觉剥夺均能建立近视模型,频闪光诱导性近视模型S-opsin产生增加,而形觉剥夺性近视模型S-opsin产生减少,说明两近视模型发生机制可能不同

  • 标签: 近视 短波视蛋白 频闪光诱导 形觉剥夺 豚鼠
  • 简介:利用SSR分子标记结合荧光毛细管电泳检测技术,研究了野生杏栽培杏遗传多样性遗传结构,结果显示:27SSR位点,平均每个位点检测到17.82等位基因(Na)7.44有效等位基因(Ne),平均Shannon's信息指数(I)为2.23,平均期望杂合度(He)观察杂合度(Ho)分别为0.700.52。基于SSR位点,群体水平上平均等位基因数、有效等位基因数、期望杂合度、观察杂合度Shannon's信息指数分别为6.59、4.15、0.70、0.531.50,说明我国杏种质资源遗传多样性丰富,其中野生杏资源遗传多样性明显高于栽培杏资源,野生杏中西伯利亚杏种质遗传多样性最高且具有较多特异等位基因,而栽培杏仁用杏遗传多样性最低,特有等位基因较少。聚类分析将供试159份种质分为4组。群体遗传结构分析将159份种质划分为5类群,分类情况与传统形态指标划分基本致。通过本研究可知,我国杏资源遗传多样性丰富,遗传结构较为复杂;西伯利亚杏与栽培杏亲缘关系较远;野生普通杏与栽培杏具有类似的遗传结构,推测野生普通杏为栽培杏原始;仁用杏遗传多样性较低,遗传背景狭窄。本研究结果可为杏资源新品种选育及持续利用提供重要理论依据。

  • 标签: 遗传结构 遗传多样性 SSR
  • 简介:我国土壤盐碱化日益严重,对我国粮食安全造成了严重威胁,因此耐盐基因挖掘对作物耐盐育种非常重要。许多研究表明胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA)在植物应对非生物胁迫中发挥积极作用。本研究以小麦TaLEA1基因为研究对象,分析了其表达蛋白理化性质及基因表达模式,并通过在拟南芥表达,分析TaLEA1基因抗逆功能。结果表明,TaLEA1基因表达蛋白属于第3组LEA蛋白,稳定亲水蛋白,富含α-螺旋、β-转角等结构。TaLEA1基因在小麦根、茎、叶、花、种子等不同组织均有表达,盐胁迫条件诱导其高表达。在拟南芥表达TaLEA1基因,显著提高了盐胁迫下转基因拟南芥种子萌发率、根长及盐旱胁迫下叶绿素含量。本研究结果为LEA基因抗逆机理研究耐盐基因挖掘提供了重要信息。

  • 标签: 小麦 TaLEA1 表达分析 耐盐 功能分析
  • 简介:【目的】黄顶菊、三叶鬼针草豚草我国危害较严重3菊科人侵植物.了解3菊科植物生长过程中土壤养分酶活性变化,可以为研究其人侵机制提供依据.【方法】在中国农业科学院植物保护研究所廊坊中试基地开展同质园实验,比较分析了黄顶菊、三叶鬼针草豚草3菊科人侵植物在幼苗期、旺盛生长期生殖生长期根际土壤养分酶活性变化.【结果】3外来菊科植物生长时期对土壤养分酶活性存在显著影响.3外来植物人侵域土壤速效磷、硝态氮含量以及磷酸酶活性随生长时期变化都表现出先升高后降低趋势,均在旺盛生长期达到最大值.人侵域土壤速效磷硝态氮含量变化趋势与狗尾草明显不同.3外来植物人侵降低了土壤速效钾含量,提高了土壤脲酶、磷酸酶活性.【结论】3外来菊科植物的人侵改变了土壤养分酶活性,创造出更有利于自身生长繁殖条件,以利于其进步扩张.

  • 标签: 黄顶菊 三叶鬼针草 豚草 土壤酶活性 土壤养分
  • 简介:目的:构建汉滩病毒包膜糖蛋白基因真核表达载体,并加入可增强免疫应答效应细胞因子CD40L基因,检测其可否在真核细胞中表达。方法与结果:参照GenBank汉滩病毒M基因小鼠CD40L全基因序列设计引物,通过聚合酶链反应(PCR)获得MCD40L基因片段,将其与pCI—neo载体相连,测序证实该载体构建成功后,将此真核表达载体以脂质体转染法转染至哺乳动物细胞CHO—K1,利用间接免疫荧光法(IFA)检测发现M基因CD40L基因可以同时表达于CHO-K1细胞。结论:构建了带有CD40L基因汉滩病毒包膜糖蛋白重组质粒并获得表达,为深入研究汉滩病毒感染后包膜糖蛋白引起特异性免疫应答规律奠定了实验基础。

  • 标签: 汉滩病毒 包膜糖蛋白 CD40L
  • 简介:目的高脂诱导建立五指山小型猪动脉粥硬化(AS)模型,观察脂蛋白相关磷脂酶A_2(Lp-PLA_2)在AS模型血浆斑块表达变化。方法将10只五指山小型猪随机分为正常对照(Ctr)组4只饲喂普通饲料、AS模型(ASmodel)组6只饲喂高脂饲料,连续造模24周。造模24周时,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、甘油三酯(TG)、C-反应蛋白(CRP)、Lp-PLA_2活性成分变化,并取主动脉进行油红O染色以及取腹主动脉血管行HE染色IL-6免疫组化染色,观察血管脂质沉积斑块病理以及IL-6蛋白表达变化。采用RT-PCRWesternBlot法观察腹主动脉组织Lp-PLA_2mRNA蛋白表达情况。结果与正常对照组比,AS模型组体重、体质量指数(BMI)、TC、LDL-C、HDL-C、CRP、Lp-PLA_2活性成分均显著升高(P〈0.05,P〈0.01),同时主动脉脂质沉积明显(P〈0.01)AS斑块形成,腹主动脉组织Lp-PLA_2mRNA蛋白表达以及IL-6蛋白表达均显著升高(P〈0.05)。结论长期高脂饮食24周能诱发五指山小型猪AS,且Lp-PLA_2在参与血管炎症AS斑块形成中发挥了关键作用。

  • 标签: 五指山小型猪 动脉粥样硬化 脂蛋白相关磷脂酶A2 炎症
  • 简介:匍柄霉属(Stemphylium)重要无性丝孢真菌类群,多数种菌难以诱导产生适宜形态学分类研究分生孢子。以新西兰匍柄霉(Stemphyliumeturmiunum)为材料,经适宜培养后(PDA培养基,25℃培养3—4d),将双玻片斜插入生长适量菌丝平板,延续培养3—4周后,进行玻片制作和显微描述,结果发现双玻片插片诱导培养处理后,匍柄霉菌易产生充分发育产孢细胞、产孢梗及适量无性分生孢子。该技术方法简便易行,避免了选择性培养基诱导产生缺陷,适宜于匍柄霉及其近似属若干难以产生无性分类特征分类研究,为系统开展该类真菌系统分类研究提供技术借鉴。

  • 标签: 双玻片插片法 新西兰匍柄霉 分生孢子 菌丝挑取制片法
  • 简介:目的:构建蜱传脑炎病毒(TBEV)结构蛋白E原核表达载体,表达重组蛋白。方法:PCR扩增E蛋白全长基因片段,插入原核表达载体pET-32a并转化大肠杆菌进行诱导表达,镍柱纯化、复性。结果:E蛋白在大肠杆菌获得表达表达量达60mg/L;重组E蛋白能与人抗TBEV多克隆抗体产生特异反应;用重组E抗原免疫家兔后,能检测到较高抗体水平。结论:原核表达E抗原蛋白具有抗体结合活性,可用于制备ELISA诊断试剂。

  • 标签: 蜱传脑炎病毒 E蛋白 原核表达
  • 简介:本研究选用了来自国外及国内68份分蘖型谷子进行了表型及遗传多样性分析。表型分析表明,质量性状以绿鞘、白谷黄米、圆锥穗、松散穗码居多,数量性状变异系数除出谷率较小外,其他性状表现了丰富遗传变异,来自山西小软谷单株穗重、单株穗粒重、千粒重均为最高,而来自黑龙江大青谷单株穗粒重、出谷率、千粒重均为最低。遗传多样性分析结果表明,77对引物共检测出202等位位点,每对引物可检测到1~6位点不等,平均为2.62;77对引物多态性信息含量(PIC)在0.0283~0.6974之间,平均多态性信息量(PIC)为0.4169,68份材料间遗传相似系数变化范围为0.59~0.96,平均值为0.68。利用软件NTSYSpc2.10UPGMA聚类方法对68份谷子分蘖材料进行了聚类,这些材料被划分为4类群,即Ⅰ、Ⅱ、ⅢⅣ。Ⅰ类群主要来自西北地区谷子分蘖种质,Ⅱ类群主要来自国外谷子分蘖种质,Ⅲ类群包括华北、华东东北谷子分蘖种质,Ⅳ类群仅包括种质。结合表型鉴定出10份优势谷子分蘖种质。这些结果揭示68份谷子分蘖种质遗传多样性较好,研究结果为挖掘谷子分蘖优良基因及谷子分蘖育种提供理论依据。

  • 标签: 谷子分蘖种质 表型 遗传多样性 聚类分析
  • 简介:目的:探究涎腺腺样囊性癌(SACC)组织COX-2、Survivin及livin表达及临床意义.方法:收集2013年1月~2016年11月我院肿瘤外科收治63例SACC患者癌变病理组织标本与30例SACC患者癌旁正常组织标本为研究对象;应用免疫组化法(SP法)检测COX-2、Survivin及livin蛋白在SACC组织正常组织表达情况,分析SACC组织COX-2、Survivin及livin表达与临床病理特征关系,采用Spearman秩相关分析COX-2、Survivin及livin之间关系.结果:Survivin、livin及COX-2在SACC组织阳性率依次为66.67%(42/63)、57.14%(36/63)及73.02%(46/63),其阳性主要表达于肿瘤细胞胞浆或胞膜上,而正常组织细胞未发现阳性表达;Survivin、livin及COX-2在不同性别、年龄、肿瘤部位阳性率无统计学差异(P>0.05);实体型、淋巴转移、中低分化及Ⅲ+Ⅳ期患者Survivin、livin及COX-2阳性率高于筛孔型+管状型、淋巴未转移、高分化、Ⅰ+Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman秩相关显示,Survivin与COX-2呈正相关(r=0.632,P<0.05);livin与COX-2呈正相关(r=0.453,P<0.05);Survivin与livin无相关(r=0.143,P>0.05).结论:Survivin、livin及COX-2在SACC患者呈高表达,可能对SACC发生、发展具有促进作用;Survivin、livin及COX-2可作为临床早期筛查SACC并预测疾病转归指标.

  • 标签: 涎腺腺样囊性癌 COX-2 SURVIVIN LIVIN 相关性
  • 简介:目的:研究羟苯磺酸钙对小鼠肾间质纤维化、Ⅰ型胶原表达影响。方法:将C57小鼠随机分为假手术组(Sham组,n=4)、肾间质纤维化模型组(UUO组,n=5)及羟苯磺酸钙治疗组(CDT组,n=4);采用单侧输尿管梗阻制备肾间质纤维化模型,CDT组给予羟苯磺酸钙灌胃、Sham组UUO组给予双蒸水灌胃;采用HE染色、Masson染色、免疫组化、实时定量PCR以及蛋白免疫印迹观察单侧输尿管梗阻术后14d小鼠术侧肾脏肾间质纤维化程度Ⅰ型胶原表达情况。结果:与Sham组比较,UUO组小鼠术后14d术侧肾脏肾发生显著肾间质纤维化,Ⅰ型胶原表达显著增强(Ⅰ型胶原基因相对表达量:Sham组:1.00000,UUO组:114.92289,P〈0.0001)。与UUO组比较,CDT组小鼠术后14d术侧肾间质纤维化程度显著减轻,Ⅰ型胶原表达显著减弱(Ⅰ型胶原基因相对表达量:UUO组:114.92289,CDT组:45.33516,P〈0.005)。结论:羟苯磺酸钙通过抑制小鼠肾间质Ⅰ型胶原表达从而减轻单侧输尿管结扎小鼠肾间质纤维化。

  • 标签: 羟苯磺酸钙 肾间质纤维化 Ⅰ型胶原
  • 简介:【目的】松材线虫作为林业重大外来入侵,扩散型幼虫形成对其传播扩散起着非常重要作用,但扩散虫态形成与维持机制尚未阐明.【方法】通过构建松材线虫数字基因表达谱(DGE),从滞育状态维持、化学感受、代谢途径等方面分析松材线虫不同虫态基因表达差异.【结果】参考松材线虫基因组数据,鉴定出2扩散型幼虫(LⅢ,LⅣ)繁殖型幼虫(Ln)各有11184、853310781基因.相对于繁殖型虫态,大多数基因在LⅣ中下调表达,该虫态特异上调表达基因化感受体基因、核受体基因以及些代谢相关基因.推测这可能与扩散型线虫滞育状态维持相关,并在其生理功能如化学感受媒介/寄主互作中发挥作用.GOPathway富集分析显示,多数代谢相关通路在L,中下调表达,而在LⅢ表达均活跃.【结论】以上结果与LⅣ处于不进食、总体代谢水平较低等生理状态表型相致.

  • 标签: 松材线虫 扩散型虫态 数字基因表达谱 差异表达基因
  • 简介:目的了解SRB1在白念珠菌氟康唑耐药株敏感株表达差异,探讨与白念珠菌耐药性关系。方法使用同亲本来源白念珠菌氟康唑耐药株CA-16敏感株CA-3为研究对象,采用实时荧光定量RT-PCR方法扩增各菌株目的基因SRB1、CDR1、ERG11,观察各菌株目的基因表达情况。结果与白念珠菌氟康唑敏感株CA-3相比,在mRNA水平氟康唑耐药株CA-16SRB1耐药基因CDR1、ERG11表达升高,SRB1、CDR1、ERG11表达水平差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论白念珠菌SRB1表达增高白念珠菌对氟康唑耐药密切相关,SRB1可能耐药候选基因。

  • 标签: 白念珠菌 耐药 基因 PCR SRB1
  • 简介:水稻白叶枯病世界性水稻病害,严重威胁水稻高产稳产。为了挖掘水稻抗白叶枯病新基因,本研究对野生稻基因导入系W6023进行了白叶枯病多菌系接种鉴定及抗谱分析,发现W6023具广谱抗病性。用强致病菌PXO99诱导W6023及其感病轮回亲本IR24后进行转录组测序,分别获得10564496291022599条序列,通过GO注释及KEGG富集分析,发现差异表达基因主要富集在次生代谢产物生物合成、植物激素信号转导及糖代谢途径等方面。在这些差异表达基因,发现203基因表达显著差异,其中在W6023上调表达基因114(56.2%),下调表达89(43.8%),而且35.9%分布在第11染色体上。生物信息学分析发现在203差异表达基因中有16属于类抗病基因,如NBS-LRR等;14直接或间接与水稻体内过氧化物代谢相关,如编码过氧化物酶和金属硫蛋白等;6编码抗病相关转录因子,如WRKYNAC等;18为信号传导相关基因,编码钙调素结合蛋白萜类合成酶等。随机选择6W6023上调表达3IR24上调表达基因进行RT-PCR及qRT-PCR分析,结果与转录组测序结果致,表明本研究获得转录组测序数据结果可靠,为以后更深入挖掘W6023抗病基因及分子机理研究提供了基础。

  • 标签: 水稻 抗病基因 白叶枯病 转录组测序 差异表达基因
  • 简介:目的研究PCOS易感基因Hmga2在子宫内膜容受性蜕膜化表达与调节。方法通过早期妊娠、延期着床与激活、人工蜕膜化、卵巢类固醇激素处理等实验,利用qPCR、Westernblot技术,阐述Hmga2在子宫内膜容受性作用。结果Hmga2随着妊娠表达量逐渐增加,着床点与非着床点相比表达量显著升高,胚胎激活组比延迟着床表达量显著增高,人工诱导蜕膜化与非蜕膜化比较表达显著升高,Hmga2表达与雌激素孕激素呈正相关,体内受雌孕激素调节。结论表明Hmga2表达与小鼠早期妊娠胚胎着床过程密切相关,参与子宫内膜蜕膜化过程,受活化胚泡类固醇激素影响。

  • 标签: 多囊卵巢综合征 高迁移率族蛋白A2 蜕膜化 胚胎 小鼠
  • 简介:目的:从真核细胞获得骨形态发生蛋白2(BMP2)编码基因,构建其真核表达载体并进行鉴定。方法:提取人HeLa细胞总RNA,经反转录后用特异性引物扩增BMP2编码区,连接至pcDNA3.1载体,筛选阳性克隆并进行功能学鉴定。结果:反转录PCR获得1100bp片段,经分子克隆后鉴定序列与BMP2致,并且在真核细胞能够诱导Smad1/5/8磷酸化。结论:构建了真核表达载体pcDNA3.1-BMP2并验证了其体内功能,为后续探讨BMP2在骨发育作用机制打下基础。

  • 标签: 骨形态发生蛋白2 真核表达载体 Smad1/5/8
  • 简介:[目的]随着杀虫剂阿维菌素广泛应用,靶标生物对其抗性问题日益严重。以往研究显示,细胞膜转运蛋白P糖蛋白可能与抗药性有关。但在昆虫对阿维菌素抗性研究,由于目前市场上缺少专门针对昆虫商业化抗体,使得这研究受限。为此,本研究尝试应用其他物种抗体开展P糖蛋白检测。[方法]以果蝇为测试昆虫,以阿维菌素作为测试药物,采用免疫印迹方法用鼠抗人P糖蛋白单克隆抗体检测阿维菌素敏感品系与阿维菌素抗性品系果蝇P糖蛋白表达水平。[结果]检测出果蝇体内P糖蛋白特异性表达,且无明显非特异性条带;与敏感品系果蝇相比,阿维菌素抗性品系果蝇P糖蛋白表达水平明显升高。[结论]用针对人及其他脊椎动物P糖蛋白单克隆抗体检测果蝇P糖蛋白表达可行,且果蝇对阿维菌素抗性可能与P糖蛋白表达升高有关。

  • 标签: P糖蛋白 蛋白质印迹 果蝇 抗药性
  • 简介:目的:探讨N-myc下游调节基因1(N-mycdownstream-regulatedgene1,NDRG1)在乳腺癌中表达。方法:收集乳腺癌病例及相应临床资料包括随访资料,应用免疫组织化学技术检测良性病变(BBD)47例,无淋巴结转移乳腺癌(NMBC)83例,淋巴结转移乳腺癌(MBC)107例及配对淋巴结转移灶(PLNM)107例NDRG1表达,分析NDRG1表达与乳腺癌临床病理指标间(患者年龄、肿块大小、临床分期、组织学类型分级、淋巴结转移、雌孕激素受体c-erbB2水平、绝经史)及生存状态关系。结果:通过免疫组化技术检测乳腺癌NDRG1表达,结果显示阳性表达率分别为BBD(95.7%,45/47),NMBC(96.4%,80/83),MBC(98.1%,105/107),PMLN(90.7%,97/107),MBC组织NDRG1阳性表达率显著高于PMLN中阳性表达率(P=0.021)。NDRG1与组织学分级相关(P=0.041),即分化越差表达NDRG1越强。NDRG1表达状态与乳腺癌患者生存预后无显著性相关(P=0.196)。结论:NDRG1表达与乳腺癌淋巴结转移分化定关系。

  • 标签: N-myc下游调节基因1 乳腺癌 临床病理