简介:摘要:肉和乳制品中的物种鉴定在食品可追溯性和掺假控制中非常重要。本研究建立了一种基于线粒体12S核糖体基因的三重实时荧光PCR技术,用于同步鉴定肉中的牛、牦牛和水牛的源性成分。首先对牛肉、牦牛肉、水牛肉、牛奶、牦牛奶、水牛奶和其它6种源性鲜肉进行了特异性鉴定,同时通过稀释梯度方法验证牦牛奶和水牛奶的绝对检出限。结果显示,该方法的特异性强,只能检测到牛、水牛和牦牛肉的DNA,并没有显示出与从其他肉类提取的DNA交叉反应。牛肉和牦牛肉的检出限为0.001 ng,水牛奶的检出限为0.01 ng。综上所述,建立的三重实时PCR方法特异性强,灵敏度高,可以用来同步鉴定肉中牛、牦牛和水牛的DNA,有助于食品加工的品质。
简介:目的建立基于TaqMan探针三重荧光PCR检测沙门菌(salmonella,Sa)、肠炎沙门菌(salmonellaenteritidis,SE)和鼠伤寒沙门菌(salmonellatyphimurium,ST)的方法。方法根据沙门菌aceA基因、肠炎沙门菌特异序列(GenBank:AF370707.1)、鼠伤寒沙门菌的STM4599序列(GenBank:AERV01000023.1),分别设计引物和TaqMan探针,在探针的5′端分别标记FAM、VIC、cy5,建立基于TaqMan探针三重实时荧光PCR检测沙门菌的方法。结果29种不同血清型沙门菌均扩增出aceA基因,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的引物和探针分别特异性地扩增出15株肠炎沙门菌和11株鼠伤寒沙门菌,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性。aceA、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的三重荧光PCR扩增效率分别为89%、87%、90%,最低检测浓度分别达到280cfu/ml、260cfu/ml、300cfu/ml。结论本研究建立的方法特异性好、灵敏度高,可用于食品中沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的特异性检测。
简介:[摘要 ] 目的:探讨长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)干扰后,在人支气管上皮细胞( the human bronchial epithelial cells, 16HBE)中的表达情况。方法 :应用 real-timePCR方法检验 lncRNA- ENST00000414355干扰效果。结果 : 正常 16HBE细胞中 ENST00000414355干扰 48h后,三条阳性序列的实验组 ENST00000414355表达均下降,都具有统计学意义 P值均 <0.0001;在氯化镉转化 16HBE成瘤细胞中 ENST00000414355干扰后,第一条阳性序列转染下达到沉默效果,且具有统计学意义 P<0.0001;在氯化镉转化 16HBE第 35代细胞在 ENST00000414355三条阳性序列转染下没有出现沉默效果所示。结论: ENST00000414355在正常 16HBE细胞中干扰效果最明显,在氯化镉转化 16HBE成瘤细胞中只有一条序列有干扰效果。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)干扰后,在人支气管上皮细胞(thehumanbronchialepithelialcells,16HBE)中的表达情况。方法应用real-timePCR方法检验lncRNA-ENST00000414355干扰效果。结果正常16HBE细胞中ENST00000414355干扰48h后,三条阳性序列的实验组ENST00000414355表达均下降,都具有统计学意义P值均<0.0001;在氯化镉转化16HBE成瘤细胞中ENST00000414355干扰后,第一条阳性序列转染下达到沉默效果,且具有统计学意义P<0.0001;在氯化镉转化16HBE第35代细胞在ENST00000414355三条阳性序列转染下没有出现沉默效果所示。结论ENST00000414355在正常16HBE细胞中干扰效果最明显,在氯化镉转化16HBE成瘤细胞中只有一条序列有干扰效果。
简介:摘要新冠肺炎爆发,战“疫”是全世界面临的重要任务,而快速确诊是疫情防控的基础。根据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》以及《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南(第四版)》记载,利用实时荧光 PCR进行核酸检验是主要诊断手段。作为当下新冠肺炎确诊的“金标准”,实时荧光 PCR功不可没。但通过新闻报道,我们不难发现当前诊断依然存在确诊慢、假阴性等问题。何为实时荧光 PCR?为何还不能完全快速准确地诊断新冠?如何改进?今天我们就从专利的视角,聚焦实时荧光 PCR,为大家揭开其神秘面纱。
简介:摘要目的探讨分析实时荧光定量PCR检测诊断结核病的应用价值。方法回顾性分析本院收治的80例结核病患者作为本次研究对象。对患者行实时荧光定量检查以及涂片抗酸染色法检查,对比分析两种不同检验诊断方法的结果。结果通过对患者行涂片抗酸染色法检测,发现最终的阳性检测共计为33例41.25%,对患者行实时荧光定量检验,发现最终的阳性检测共计为69例86.25%,实时荧光定量检验诊断方法检出率,相较涂片抗酸染色法检测明显较高,差异显著(P<0.05)。结论通过对结核病患者行实时荧光定量检验方法诊断,可以取得较高的诊断率,且具有较高的灵敏性和特异度,可以及早为结核病患者的早期治疗提供临床依据,在一定程度上对患者的治疗预后起到直接影响,可以在临床中推广应用。
简介:【摘要】:实时荧光定量 PCR 技术是普通聚合酶链式反应技术基础上演变起来,一种灵敏度较高的核算定量技术。与常规 PCR 相比,它的不同之处在于其根据 PCR 产物中莹光信号的强度定量 , 不仅提高了反应的特异性和自动化程度,而且有效解决 PCR 污染等问题,实现了检测质量的飞跃 . 当前已经被广泛应用于医学诊断和环境监测多种领域的研究,本文对实时荧光定量 PCR 的原理,分类以及应用做一系统性综述。
简介:摘要:本文探究了实时荧光定量PCR法在人乳头瘤病毒(HPV)检测中的临床应用,总结了实时荧光定量PCR法的技术特点,并阐述了实时荧光定量PCR法的未来发展趋势以及新技术的潜在应用,希望能够进一步提升HPV检测结果的准确性,从而为HPV的预防、筛查与治疗提供有力支持。
简介:摘要目的探讨和研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应在流感病毒检测中的应用效果。方法采用实时荧光PCR对617例流感样病例患者的咽拭子标本进行流感病毒核酸的测定,对检测出的阳性标本采用MDCK进行培养并分离,对两种方法的检测结果进行分析,对比特异性及灵敏度。结果本组617例标本中实时荧光PCR共检测出阳性标本152例,阳性率24.6%;细胞培养法在此152例阳性标本中共分离出流感病毒79例,阳性率12.8%,实时荧光PCR检测阳性率显著高于细胞培养法,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论实时荧光PCR能够快速有效的检测出流感病毒核酸,是实验室快速诊断的有效手段。