简介：摘要目的本研究旨在探讨微小RNA(miR)-376b-3p和miR-654-5p在大肠癌中的表达水平及其临床意义。方法荧光定量PCR检测34组来自2018年6月至2019年1月淮安市肿瘤医院大肠癌及癌旁组织中miR-376b-3p和miR-654-5p的表达。利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析miR-376b-3p和miR-654-5p的表达与大肠癌患者临床病理因素以及生存预后的关系。应用SPSS 17.0软件对所有结果进行统计分析。结果相对于癌旁组织，大肠癌组织中miR-376b-3p表达下调，miR-654-5p表达上调，差异有统计学意义(P<0.001)。miR-376b-3p表达的降低和miR-654-5p表达的升高与肿瘤的转移和临床分期密切相关。此外，单因素分析结果显示miR-376b-3p的低表达或miR-654-5p的高表达的大肠癌患者总体生存率较低，差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析发现miR-376b-3p低表达和miR-654-5p高表达是大肠癌患者预后差的独立预测因子。结论miR-376b-3p的低表达和miR-654-5p的高表达可能与大肠癌的发生、发展明显相关。

简介：摘要目的探讨血清微小RNA-206(miR-206)、微小RNA-590-3p(miR-590-3p)水平与室性心律失常患者预后的关系。方法选取2016年7月至2019年2月于河北燕达医院住院治疗的117例室性心律失常患者(室性心律失常组)，同期选取104例健康体健者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清中miR-206和miR-590-3p水平；分析室性心律失常患者血压、血脂水平与血清miR-206、miR-590-3p水平的相关性；比较室性心律失常患者不同预后组血清miR-206和miR-590-3p水平；分析室性心律失常患者预后不良的影响因素。结果室性心律失常组与对照组的性别、年龄、体质指数、肌酐、高血压、高脂血症和吸烟比例比较，差异均无统计学意义(均为P>0.05)。室性心律失常组的miR-206、miR-590-3p、收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于对照组，而高密度脂蛋白胆固醇水平低于对照组(均为P<0.05)。室性心律失常患者miR-206与miR-590-3p水平呈正相关，且与收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平呈正相关，与高密度脂蛋白胆固醇水平呈负相关(均为P<0.05)。预后不良组患者的血清miR-206和miR-590-3p水平均显著高于预后良好组(均为P<0.05)；miR-206升高(OR＝6.98，95%CI：2.96～16.45，P＝0.001)、miR-590-3p升高(OR＝7.07，95%CI：4.33～11.54，P＝0.002)和总胆固醇升高(OR＝6.27，95%CI：4.38～8.97，P＝0.008)是室性心律失常患者预后不良的危险因素，高密度脂蛋白胆固醇升高(OR＝0.42，95%CI：0.21～0.84，P＝0.004)是室性心律失常患者预后不良的保护因素。结论室性心律失常患者血清miR-206和miR- 590-3p水平升高与预后不良密切相关，可作为评估预后的参考指标。

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简介：目的观察微小RNA(microRNA,miR)-142-3p对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌肥厚中线粒体功能的影响。方法我们使用Sprague-Dawley(SD)大鼠的乳鼠心肌细胞,细胞培养后分成4组:空白组;AngII组;miRnc+AngII组;miR-142-3pmimic+AngII组。分别往细胞中转染相同浓度的miR-142-3p和miRnc质粒6h,实时定量聚合酶链反应(real-timepolymerasechainreaction,rt-PCR)检测实验组miR-142-3pmRNA表达增多,提示细胞质粒转染成功,再用10-6mol/L浓度的AngII诱导细胞48h,使用线粒体Mito-RedTracker处理细胞30min,共聚焦显微镜观察细胞中线粒体密度的变化;使用流式细胞仪检测线粒体膜电位变化。结果与空白组相比,AngII组的线粒体膜电位减低(n=3,P<0.01);与AngⅡ+miRnc组相比,AngⅡ+miR-142-3p组的线粒体膜电位增加(n=3,P<0.01)。与空白组相比,AngⅡ组的线粒体荧光数量减低(n=3,P<0.01);与AngⅡ+miRnc组相比,AngⅡ+miR-142-3p组的线粒体荧光数量增加(n=3,P<0.01)。结论在AngⅡ诱导心肌肥大过程中miR-142-3p对心肌线粒体具有保护作用。

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简介：摘要目的观察微小RNA(miR)-1-3p在胃癌(GC)细胞和组织中的表达，探讨miR-1-3p对GC细胞增殖侵袭能力的影响及可能的分子调控机制。方法收集2014年1月至2015年6月在兰州大学第一医院行手术治疗的82例GC患者组织标本和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-1-3p在GC组织及癌旁组织、人GC细胞系(MKN-45、BGC823、AGS、MGC803、SGC7901)和人胃黏膜上皮细胞(GES-1)中的表达水平。分析miR-1-3p表达水平与GC患者临床病理特征参数及预后的相关性，用克隆形成实验和Transwell侵袭实验分别检测miR-1-3p的表达水平对GC细胞增殖侵袭能力的影响。采用生物信息学和荧光素酶报告基因实验验证miR-1-3p与B细胞淋巴瘤/白血病-2相关永生基因4(BAG4)的靶向调控关系。结果miR-1-3p在GC组织中的相对表达量 (0.815±0.060)低于癌旁组织 (1.604±0.140，t＝5.922，P<0.01)，其表达水平与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(均P<0.05)。miR-1-3p低表达组患者的总生存率低于高表达组[风险比(HR)＝0.519，95%可信区间(CI)：0.259~0.953，P<0.05)。过表达miR-1-3p组GC细胞的增殖和侵袭能力显著低于对照组(t＝9.089，P<0.01)，敲低miR-1-3p后得到了与之相反的结果(t＝8.783，P<0.01)。BAG4是miR-1-3p潜在的靶基因。下调miR-1-3p可逆转si-BAG4对GC细胞增殖和侵袭能力的作用。结论miR-1-3p通过靶向BAG4的表达调控GC细胞的增殖侵袭。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-330-3p对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的影响，并分析可能的机制。方法雄性C57BL/6小鼠80只，鼠龄7～8周，体重23～25 g，无特殊病原体，采用随机数字表法分为8组，再灌注2 h组、6 h组、12 h组、24 h组以及假手术组，miR-330-3p agomir组(术前注射miR-330-3p激动剂)、miR-330-3p antagomir组(术前注射miR-330-3p抑制剂)和阴性对照组(术前注射miRNA阴性对照)，每组10只。除假手术组外均制备肝脏IRI模型，聚合酶链反应、Western印迹、免疫组化检测miR-330-3p、磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cleave caspase-1)及gasdermin D(GSDMD)等的表达。双荧光素酶报告验证miR-330-3p的靶基因。采用miR-330-3p模拟物或抑制序列、miRNA阴性对照、PGAM5干扰RNA(siRNA)和干扰序列的阴性对照转染AML12细胞，然后检测PGAM5、Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)、cleave caspase-1、GSDMD的表达。结果小鼠肝脏缺血再灌注过程中，miR-330-3p相对表达量降低，而PGAM5相对表达量增高。miR-330-3p agomir组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)均低于阴性对照组，而miR-330-3p antagomir组ALT、AST高于阴性对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与阴性对照组比较，miR-330-3p agomir组小鼠肝组织中cleave caspase-1表达降低，而miR-330-3p antagomir组表达增加。双荧光素酶报告证实PGAM5是miR-330-3p靶基因。AML12细胞转染PGAM5 siRNA后PGAM5、NLRP3、cleave caspase-1、GSDMD蛋白相对表达为(0.24±0.09)、(0.12±0.07)、(0.15±0.07)、(1.08±0.08)，均低于干扰序列阴性对照组(1.17±0.14)、(0.36±0.09)、(0.68±0.09)、(1.36±0.08)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-330-3p可减轻小鼠肝脏IRI，其机制可能与miR-330-3p靶向抑制PGAM5介导的细胞焦亡有关。

简介：摘要目的建立小鼠神经源性膀胱动物模型，探讨纤维连接蛋白1(FN1)的变化及微小RNA(miRNA，miR)-1a-3p的作用机制。方法C57BL/6J雌性7周龄小鼠40只(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，分为模型组和对照组，模型组皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白及结核分支杆菌，并48 h腹腔注射百日咳毒素；对照组皮下注射生理盐水。观察小鼠排尿频次、排尿量等变化。处死小鼠并取膀胱组织，模型组和对照组各选取3只膀胱进行高通量测序。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白印迹法(Western blot)检测小鼠膀胱组织中FN1和miR-1a-3p的变化。多组计量资料采用One-way ANOVA。结果对测序结果进行分析，随着泌尿系统症状加重，FN1增加(4.569±0.426，t＝－5.142，P<0.01)，而miR-1a-3p减少(1.623±0.312，t＝－3.945，P<0.05)，差异有统计学意义。与对照组比较，模型组膀胱组织中FN1的mRNA[2.501(1.301，4.251)，F＝99.183，P<0.01]和蛋白[2.937(1.174，4.262)，F＝63.834，P<0.01]表达均上调，差异有统计学意义，而miR-1a-3p[2.401(1.250，3.001), F＝35.951，P<0.01]表达下调，差异有统计学意义；双荧光素酶基因报告表明FN1为miR-1a-3p的直接靶基因(0.514±0.027，t＝13.355，P<0.01)，差异有统计学意义。结论神经源性膀胱动物模型出现尿频、尿急、尿潴留等症状，且FN1表达明显上调，而miR-1a-3p表达下调，因此miR-1a-3p可能通过对FN1调控参与神经源性膀胱发生发展。

简介：摘要目的观察微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对胰腺癌的增殖、迁移、侵袭、凋亡的调控作用。方法选取AsPC-1和SW1990胰腺癌细胞株[均购自美国标准生物品收藏中心(ATCC)细胞库]作为研究对象。将miR-490-3p模拟物(75 pmol)转染至胰腺癌细胞株AsPC-1和SW1990中，分别构建miR-490-3p过表达组，空载体作为阴性对照组，48 h后，利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-490-3p的表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测miR-490-3p对细胞增殖的作用，细胞划痕实验检测细胞的迁移能力，Transwell实验检测细胞的侵袭能力，原位缺口末端标记法(TUNEL)实验检测细胞的凋亡能力。此研究时限为4个月。组间数据比较采用独立样本t检验。结果miR-490-3p在胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞中相对表达低于正常胰腺细胞(0.58±0.06、0.40±0.20比1.00±0.11，t＝5.886、4.656，P<0.01)；转染miR-490-3p模拟物后，胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞内miR-490-3p相对表达量明显升高(2 173 099.24±385 195.63、1 842 351.45±498 269.21，t＝9.771、6.404，P<0.01)，差异有统计学意义。过表达miR-490-3p后，CCK-8实验结果显示，明显降低AsPC-1和SW1990细胞的增殖(1.63±0.06比2.13±0.02，t＝3.333，P<0.05；1.09±0.04比1.63±0.03，t＝3.119，P<0.05)，差异有统计学意义；划痕实验结果显示，明显抑制AsPC-1和SW1990细胞迁移对照组[(48.16±6.17) μm比(18.34±3.26) μm，t＝9.564，P<0.01；(48.49±6.98) μm比(23.02±3.26) μm，t＝7.390，P<0.01]，差异有统计学意义；Transwell细胞侵袭实验显示，明显抑制AsPC-1和SW1990细胞侵袭[(36.00±2.45)个比(15.33±2.94)个，t＝13.220，P<0.01；(99.00±15.67)个比(46.17±11.07)个，t＝6.745，P<0.01]，差异有统计学意义；TUNEL细胞凋亡实验结果显示，(17.75±1.71比6.75±4.03，t＝5.025，P<0.01；23.25±3.40比10.25±2.63，t＝6.045，P<0.01)，差异有统计学意义。结论过表达miR-490-3p后抑制AsPC-1和SW1990细胞株的增殖、迁移、侵袭能力，促进细胞凋亡的作用。

简介：摘要目的观察叶青素对缺氧和复氧的人肾皮质近曲小管上皮细胞凋亡的影响并确定其下游靶点。方法将人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2分为7组，分别为对照组、缺氧和复氧模组(HR)组、HR+5 mg/L组、HR+10 mg/L组、HR+20 mg/L组、HR+NC组、HR+Mimics组。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验、流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)实验检测HK-2细胞增殖和凋亡。通过数据库预测微小RNA(miR)-22-3p转录因子，然后通过蛋白质印迹法(Western blot)实验和qRT-PCR实验分别检测CCCTC结合因子(CTCF)和miR-22-3p水平。通过单因素方差分析对相关结果进行统计分析。结果与HR组比较，叶青素显著提高缺氧和复氧处理的HK-2细胞的细胞活力(叶青素5 mg/L：61.72±4.93比43.94±4.42，P<0.01；叶青素10 mg/L：76.14±4.48比43.94±4.42，P<0.01；叶青素20 mg/L：85.62±4.97比43.94±4.42，F＝53.794，P<0.01)。此外，和HR组比较，叶青素显著抑制缺氧和复氧处理的HK-2细胞的凋亡率(叶青素5 mg/L：30.62±2.41比40.08±4.41，F＝63.998，P<0.05；叶青素10 mg/L：22.32±2.85比40.08±4.41，P<0.01；叶青素20 mg/L：13.88±2.09比40.08±4.41，P<0.01)以及TUNEL阳性细胞比(叶青素5 mg/L：21.19±1.86比27.62±3.10，P<0.05；叶青素10 mg/L：14.78±1.89比27.62±3.10，P<0.01；叶青素20 mg/L：10.11±2.19比27.62±3.10，F＝53.112，P<0.01)。进一步检测发现叶青素减轻缺氧和复氧导致的miR-22-3p(对照组：1±0.05，H/R组：0.27±0.06，叶青素5 mg/L：0.46±0.05，叶青素10 mg/L：0.63±0.05，叶青素20 mg/L：0.80±0.06，均P<0.01)和CTCF降低(对照组：1.00±0.04，H/R组：0.19±0.05，叶青素5 mg/L：0.39±0.07，叶青素10 mg/L：0.56±0.04，叶青素20 mg/L：0.72±0.06，F＝102.400，均P<0.01)。HR+Mimics组HK-2细胞细胞活力显著高于HR组(79±3.85比42.78±4.45，F＝117.224，P<0.01)，同时细胞凋亡率显著低于HR组(18.2±2.28比41.26±3.59，F＝104.770，P<0.01)，TUNEL阳性细胞比显著低于HR组(16.38±2.46比29.28±3.14，F＝54.042，P<0.01)。结论叶青素通过CTCF介导的miR-22-3p上调减轻缺氧和复氧诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-628-3p调控的DNA解螺旋酶对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法首先收集2013年1月至2017年12月郑州大学第二附属医院骨科收治的股骨骨肉瘤患者60例，同期收集股骨创伤性骨折患者60例作为对照组，采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测和比较外周血循环miR-628-3p的表达水平差异，并根据随访结果进行生存分析。以人骨肉瘤细胞U2OS和HOS为研究对象，过表达miR-628-3p，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测其增殖活性，采用流式细胞术检测其凋亡率。根据Starbase预测miR-628-3p可与Bloom综合征解螺旋酶(BLM)结合，故进一步采用蛋白质印迹法(Western blot)、qPCR和荧光素酶报告基因实验进行检测。两组间计量资料比较采用独立样本t检验，计数资料比较采用χ2检验。结果骨肉瘤患者外周血和肿瘤组织中miR-628-3p的表达水平(相对表达量分别为0.203±0.047、0.217±0.054)均明显低于正常对照组(相对表达量分别为0.951±0.106、1.013±0.072，P<0.01)，差异有统计学意义，受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-628-3p在骨肉瘤患者中的表达，曲线下面积(AUC)＝0.707(P<0.01)，K-M生存分析显示miR-628-3p低表达患者生存时间明显短于高表达患者。CCK-8和集落形成实验检测显示miR-628-3p过表达后可抑制骨肉瘤细胞U2OS和NOS的增殖；流式细胞术检测显示miR-628-3p过表达后可促进骨肉瘤细胞的凋亡；qPCR和Western blot检测显示miR-628-3p过表达后，BLM的表达水平明显低于miR-628-3p nc组(P<0.01)，差异有统计学意义。荧光素酶报告基因实验显示miR-628-3p mimc与BLM-mt共转染骨肉瘤细胞U2OS和NOS后，其荧光值明显低于其他转染组(U2OS：0.208±0.017比1.082±0.046，t＝4.698，P<0.01；HOS：0.224±0.047比0.966±0.053，t＝5.548，P<0.01)，差异有统计学意义。裸鼠成瘤证实miR-628-3p过表达后肿瘤大小和重量明显低于miR-628-3p nc组[(1.419±0.274) g比(2.825±0.148) g，t＝3.717，P<0.01]，差异有统计学意义。结论miR-628-3p在骨肉瘤患者中存在低表达现象，与患者的不良预后和生存时间相关，miR-628-3p过表达可下调DNA解螺旋酶BLM，抑制骨肉瘤细胞的增殖。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胸腺生成素反义RNA 1(TMPO-AS1)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法2016年6月至2019年12月，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测20例食管癌组织和癌旁组织中lncRNA TMPO-AS1和微小RNA(miR)-501-3p的水平，食管癌Eca109细胞分为lncRNA TMPO-AS1干扰组(转染si-NC和si-TMPO-AS1)；miR-501-3p过表达组(转染miR-NC和miR-501-3p)；lncRNA TMPO-AS1过表达组(转染pcDNA和pcDNA-TMPO-AS1)；lncRNA TMPO-AS1和miR-501-3p共抑制组(转染si-TMPO-AS1＋anti-miR-NC和si-TMPO-AS1＋anti-miR-501-3p)。噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和Transwell实验分别检测食管癌Eca109细胞增殖、凋亡率、细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白水平，双荧光素酶报告系统验证lncRNA TMPO-AS1与miR-501-3p的调控关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差进行分析。结果食管癌组织组中的lncRNA TMPO-AS1水平(2.64±0.26)高于癌旁组织(1.00±0.09，t＝26.657，P<0.05)，miR-501-3p水平(0.44±0.04)低于癌旁组织(1.00±0.07，t＝31.063，P<0.05)；干扰lncRNA TMPO-AS1的Eca109细胞24 h增殖(0.36±0.03)低于si-NC组(0.39±0.03，t＝2.121，P<0.05)，48 h增殖(0.45±0.04)低于si-NC组(0.75±0.07，t＝11.163，P<0.05)，72 h增殖(0.57±0.05)低于si-NC组(1.16±0.09，t＝17.191，P<0.05)，迁移细胞数[(54.14±5.65)个]低于si-NC组[(113.02±9.87)个，t＝15.531，P<0.05]，侵袭细胞数[(47.69±5.01)个]低于si-NC组[(96.32±9.88)个，t＝13.169，P<0.05]，细胞凋亡率[(22.15±2.22)%高于si-NC组[(6.98±0.69)%，t＝19.576，P<0.05]；过表达miR-501-3p的Eca109细胞48 h增殖(0.51±0.05)低于miR-NC组(0.77±0.07，t＝9.067，P<0.05)，72 h增殖(0.65±0.06)低于miR-NC组(1.15±0.09，t＝13.867，P<0.05)，迁移细胞数[(61.23±6.33)个]低于miR-NC组[(115.25±9.25)个，t＝14.458，P<0.05]，侵袭细胞数[(53.14±5.33)]低于miR-NC组[(98.32±8.47)个，t＝13.543，P<0.05]，细胞凋亡[(19.58±1.74)%]高于miR-NC组[(7.23±0.77)%，t＝19.471，P<0.05]，差异均有统计学意义。结论lncRNA TMPO-AS1通过靶向miR-501-3p促进食管癌细胞的恶性生物学行为，可被视为食管癌患者的潜在治疗靶标。

简介：摘要目的观察心肌梗死(MI)大鼠心肌微小RNA(miR)-130a-3p的表达及其对心肌炎症的影响。方法使用随机数字法将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、MI组、miR-130a-3p组(心肌注射miR-130a-3p mimics)和阴性对照组(心肌注射miR-130a-3p mimics阴性对照)，每组15只。心脏彩超测定左心室收缩末期内径(LVDs)、左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室长轴缩短分数(FS)、左心室射血分数(LVEF)；原位缺口末端标记法(TUNEL)法测定心肌凋亡指数；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β水平；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌组织miR-130a-3p、NOD样受体家族3炎症小体(NLRP3)的表达；蛋白质印迹法(Western blot)测定心肌组织B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和NLRP3的表达水平。各组间比较采用方差分析。结果MI组miR-130a-3p水平明显低于Sham组(t＝4.365，P<0.05)。miR-130a-3p组大鼠LVDs和LVDd低于MI组(t＝4.475、5.172、P<0.05)，FS和LVEF高于MI组(t＝3.679、5.442，P<0.05)。miR-130a-3p组血清TnT、TnI、CK-MB、NT-proBNP、TNF-α、IL-1β水平明显低于MI组(t＝4.265、5.382、3.976、4.436、7.246、4.854，P<0.05)。Sham、MI、阴性对照组和miR-130a-3p组凋亡指数依次为(5.14±0.62)%、(34.54±4.37)%、(35.27±4.55)%和(18.76±2.48)%，miR-130a-3p组凋亡指数低于MI组(t＝4.356，P<0.05)。miR-130a-3p组NLRP3 mRNA和bax蛋白、NLRP3蛋白相对表达量均低于MI组(t＝6.296、11.356、8.235，P<0.05)，bcl-2蛋白水平相对表达量高于MI组(t＝8.876，P<0.05)。结论miR-130a-3p在MI大鼠心肌组织中呈低表达，上调miR-130a-3p表达可以减轻MI大鼠心肌炎症和细胞凋亡。

简介：无

简介：目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9(MAP3K9)的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物(mimics组)和阴性对照(NC组),以未转染的MGC-803细胞为对照组;采用实时定量PCR(QPCR)检测各组miR-148a-3p水平以评价转染效率,MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,分别采用QPCR和Westernblotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3及MAP3K9mRNA和蛋白水平,同时采用双荧光素酶报告实验验证miR-148a-3p与MAP3K9的靶向作用关系。结果QPCR结果显示,对照组、NC组和mimics组的miR-148a-3p水平分别为1.021±0.123、1.087±0.196和2.854±0.368,与对照组和NC组比较,mimics组的miR-148a-3p水平升高(P<0.05)。mimics组MGC-803细胞的增殖活力较其余两组减弱(P<0.05)。mimics组MGC-803细胞凋亡率为(15.2±1.6)%,高于对照组的(3.5±0.9%)%和NC组的(4.5±1.1)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组和NC组比较,mimics组的MAP3K9和Bcl-2的mRNA和蛋白水平均下调,而Bax和caspase-3的mRNA和蛋白水平均上调(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实MAP3K9是miR-148a-3p的直接作用靶点。结论MiR-148a-3p可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡,可能通过靶向MAP3K9来发挥抑癌作用,调控miR-148a-3p/MAP3K9轴在胃癌防治中有一定应用前景。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA同源异形盒转录反义RNA(lncRNA HOTAIR)通过靶向微小RNA-520g-3p(miR-520g-3p)对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞中miR-520g-3p、HOTAIR表达水平；转染HOTAIR小干扰RNA至SW1990胰腺癌细胞中，并分为NC组、siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力，划痕愈合实验检测细胞迁移能力；双荧光素酶报告基因实验验证miR-520g-3p与HOTAIR靶向调控关系，两组之间的定量资料比较采用t检验。结果qRT-PCR结果表明SW1990中HOTAIR mRNA水平明显高于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE，3.08±0.33比1.57±0.17，t＝29.830, P<0.01)；miR-520g-3p在SW1990中的表达水平明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE，0.93±0.11比2.63±0.24，t＝22.410, P<0.01)；HOTAIR小干扰RNA转染至SW1990中，72 h后NC组细胞吸光度(A)值明显高于siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组(3.52±0.99比1.92±0.23、2.36±0.58，t＝6.340、5.150，P<0.01)；降低HOTAIR表达48 h后，NC组细胞划痕愈合面积百分比为显著高于siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组[(85.37±9.82)%比(50.56±5.82)%、(35.28±6.86)%，t＝7.760, 14.750，P<0.01]，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因表明miR-520g-3p可明显降低野生型HOTAIR载体荧光素酶活性。下调miR-520g-3p表达水平后，SW1990细胞增殖及迁移能力高于对照组(t＝13.190、12.480，P<0.01)，差异有统计学意义。结论HOTAIR可通过靶向负调控miR-520g-3p影响胰腺癌细胞增殖、迁移能力。

简介：摘要目的观察肝细胞癌患者血清中微小RNA(miRNA，miR)-432、微小RNA-432(miR-30b)及微小RNA-432(miR-764)水平。方法选取安徽医科大学第三附属医院2015年1月30日至2018年1月30日收治的150例肝细胞癌患者，同时选取150例年龄匹配的体检结果健康者作为对照组，采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测研究对象外周血中miR-432、miR-30b及miR-764表达水平。观察miR-432、miR-30b及miR-764与肝细胞癌患者临床病理因素的相关性，并对肝细胞癌患者进行随访，观察miR-432、miR-30b及miR-764与患者总生存期(OS)的相关性。采用独立样本t检验及Log-rank检验。结果肝细胞癌患者外周血中miR-432(2.11±0.71)、miR-30b(1.88±0.68)及miR-764(1.90±0.65)水平均较对照组高(1.12±0.40、1.01±0.38、0.99±0.35，t＝4.879、13.679、15.097，P<0.01)。miR-432、miR-764表达量与肝细胞癌TNM分期有相关(P<0.05)，miR-30b与肝细胞癌TNM分期及分化程度有相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法及Log-rank检验显示，miR-432、miR-30b及miR-764表达量升高组OS短于降低组(Log-rank χ2＝16.433、10.575、7.998，P<0.05)。Cox多因素分析均显示，TNM分期、miR-432、miR-30b、miR-764、肿瘤分化程度是肝细胞癌OS的独立影响因素[比值比(OR)＝2.904、2.135、1.651、1.496、1.205，P<0.05]。结论肝细胞癌患者循环中miR-432、miR-30b及miR-764表达上调，且与患者总生存率降低密切相关。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-29b-3p对大鼠膝骨关节炎模型的保护作用及其机制。方法30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和miR-29b-3p KD组，miR-29b-3p KD组大鼠经膝关节腔注射过表达miR-29b-3p沉默腺相关病毒，对照组和模型组经膝关节腔给予对照腺相关病毒。3组大鼠表达30 d后，模型组和miR-29b-3p KD组大鼠采用木瓜蛋白酶局部注射复制膝骨关节炎动物模型。建模4周后，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析膝关节miR-29b-3p表达水平；Mankin组织学评分和Pelletier评分分析关节炎病变程度；分析3组大鼠膝关节最大活动度；采用酶联免疫吸附实验分析白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平；采用免疫组织化学分析基质金属蛋白酶(MMP)-13和Ⅱ型胶原的表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果miR-29b-3p KD组大鼠膝关节组织miR-29b-3p表达水平(0.76±0.11)明显低于模型组(2.09±0.15)，差异有统计学意义(t＝22.240，P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节最大屈伸角度[(126.51±6.50)°]明显大于模型组[(102.53±5.33)°]，差异有统计学意义(t＝9.017，P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节Pelletier评分[(2.36±0.24)分]明显低于模型组[(3.40±0.84)分]，差异有统计学意义(t＝5.196，P<0.05)，miR-29b-3p KD组大鼠膝关节Mankin评分[(2.50±0.85)分]明显低于模型组[(3.70±0.0.82)分]，差异有统计学意义(t＝3.207，P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节滑膜液IL-1β和TNF-α水平[(82.62±8.76)、(51.43±5.61) ng/mg]明显低于模型组[(163.02±11.87)、(122.07±13.21) ng/mg]，差异有统计学意义(t＝17.250，P<0.05；t＝15.560，P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节滑膜液TGF-β1水平[(55.44±5.91) ng/mg]明显高于模型组[(25.40±4.09) ng/mg]，差异有统计学意义(t＝13.230，P<0.05)。miR-29b-3pKD组大鼠膝关节胶原酶Ⅱ水平(50.12±4.17)明显高于模型组(33.43±3.61)，差异有统计学意义(t＝9.579，P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节MMP-13水平(82.62±8.76)明显低于模型组(163.02±11.87)，差异有统计学意义(t＝17.250，P<0.05)。结论miR-29b-3p沉默可显著上调TGF-β1表达水平，进而对大鼠膝关节软骨具有修复与保护作用。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-188-3p在肝癌发生发展中的作用及其机制。方法收集2018年2月至2019年10月武汉市中心医院肝胆胰外科经手术切除并病理证实的21例原发性肝癌组织标本及对应的13例癌旁组织标本，细胞培养肝癌细胞，用生物信息学预测miR-188-3p和N-myc下游调节基因1(NDRG1)的靶向匹配关系，并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。Lipo3000转染miR-188-3p摸拟物后，实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time qPCR)检测miR-188-3p和NDRG1 mRNA表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测NDRG1蛋白表达；细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖。组间比较采用t检验。结果miR-188-3p和NDRG1匹配良好，miR-188-3p能够结合NDRG1 mRNA 3’端非编码区(3’UTR)，并有效抑制其mRNA及蛋白表达水平(0.56±0.04比1.12±0.13，t＝10.777，P<0.01；0.43±0.07比0.88±0.15，t＝9.123，P<0.05)。miR-188-3p能够负向调控NDRG1表达和肝癌细胞增殖(0.76±0.07比1.26±0.19，t＝7.509，P<0.05)。结论miR-188-3p可以通过下调靶向癌基因NDRG1的表达来抑制肝癌细胞的增殖。