简介：腺病毒基因组约为35kb，分为7个血清型，采用其中较为安全的血清型2和5可作为载体。腺病毒做为载体有很多优点：它能感染广泛的细胞类型；能感染分裂细胞或不分裂细胞；腺病毒的疫苗已为人们使用．

简介：病毒式营销是营销理念的重大变革，是一种低成本高效益的营销传播方式，本文就其常用传播载体进行简要的分析，并提出自己的建议，希望能起到抛砖引玉的作用。

简介：本文简要综述腺病毒载体的研究现状，包括各型载体的构成、优势与缺陷，及其相应的优化策略，并指出在我国人群中腺病毒载体作为疫苗和基因治疗的工具所应采取的优化措施。

简介：摘要：目的：本论文旨在综述腺相关病毒载体在基因治疗和免疫治疗领域的研究进展，探讨其在治疗和潜在应用方面的最新发展。方法：通过查阅相关文献，收集和整理了与腺相关病毒载体有关的研究成果，并结合国内外相关研究进行分析。结果：在基因治疗方面，腺相关病毒载体已被广泛应用于遗传性疾病、癌症和神经系统疾病等的治疗。不仅可以有效传递修复基因，还可以调节基因表达，并显示出良好的生物安全性和耐受性特性。另外，在免疫治疗方面，腺相关病毒载体可用于疫苗开发和免疫调节，提供了一种新的治疗策略。腺相关病毒载体的研究工作也包括载体优化、体内外评价和治疗效果验证等方面。结论：腺相关病毒载体在基因治疗和免疫治疗方面展现出了巨大的前景和潜力。通过持续的研究和优化，它们有望成为治疗遗传性疾病、肿瘤和其他复杂疾病的有效工具。然而，仍然需要进一步的研究来解决其在临床应用中可能存在的问题，并确保其安全性和有效性。

简介：目的:利用Adeasy-1系统,构建并鉴定CARP基因重组腺病毒载体.方法:PCR扩增含有CARP全长cDNA的片段,经测序验证无误后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒.经过抗性筛选以及酶切鉴定得到阳性的重组质粒,再在293细胞中进行包装扩增,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:测序证实PCR产物为CARP全长cDNA;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;转染293细胞3天后可见绿色荧光,回收病毒可以重复感染293细胞,证明病毒包装成功.

简介：摘要重组病毒载体疫苗的原理是将外源基因插入病毒基因组以构建重组病毒，免疫机体后在体内表达相应蛋白并诱导特异性免疫应答。该类疫苗具有载体种类多、插入片段长、能同时诱导体液免疫和细胞免疫等优势，能克服灭活疫苗的效力维持时间短和减毒活疫苗回复突变的弊端。此文综述了重组病毒载体疫苗的最新研究进展，为将来的研究提供参考。

简介：摘要2019年底的新冠疫情加速了全球各研究机构对新冠疫苗的研发。正在进行临床试验的多种技术平台的新冠疫苗中，重组病毒载体类疫苗表现出较好的免疫原性优势和效力，但同时出现的疫苗安全性和载体预存抗体等问题也不容忽视。本文将概述重组载体疫苗的设计理念和发展历程，梳理当前不同重组病毒载体新冠疫苗的临床研究进展，并阐述其面临的主要挑战和未来的发展方向，以期为重组载体类疫苗的研究提供借鉴。

简介：目的探讨腺相关病毒（AAV）载体转导碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因对肌腱愈合的影响，并观察腺病毒、AAV以及脂质体-质粒三种基因治疗载体应用于肌腱所产生的组织反应。方法取13只成年白色来亨鸡的双侧中趾趾深屈肌腱（26根），随机分为实验组和对照组，每组13根，实验组肌腱完全切断后注射AAV2-bFGF并以改良Kessler法修复，对照组不注射AAV2-bFGF，仪以改良Kessler法修复。第4周末行免疫组织化学染色，第8周末测定趾屈曲功。将6只成年新西兰白兔的趾深屈肌腱（36根）分成三组，每组12根，分别注射10μL的腺病毒、AAV2和脂质体-质粒载体，术后第3、7、14天分别取肌腱，进行石蜡切片、HE染色。结果AAV2-bFGF可以在术后4周显著地提高肌腱bFGF的表达，而且不增加趾屈曲阻力（粘连形成）。所测屈曲功第8周末实验组为（0．052±0．031）J，对照组为（0．049±0．035）J，两组间差异无统计学意义（t=0．1266，P=0．8984）。脂质体-质粒载体组肌腱组织反应重于腺病毒载体组，AAV2载体组肌腱组织反应最轻，在腱外膜处有组织反应，而腱内膜区域几乎无组织反应。结论用AAV2载体转bFGF基因至肌腱能有效增加愈合肌腱的bFGF。在三种所研究的载体中，腺病毒和AAV2载体引起的组织反应比脂质体-质粒载体轻。AAV2引起的组织反应最轻。AAV2可能会成为肌腱的转基因良好载体。

简介：慢病毒载体是近年来受到广泛关注的一种逆转录病毒载体,能稳定且高效地转染分裂细胞和非分裂细胞,已成功应用于临床,并逐渐应用于其他生物医学领域。本文从慢病毒载体的分子构造、遗传毒性、细胞工程应用及转基因动物模型应用方面就慢病毒载体的研究作一综述。

简介：在目前的疫苗研究中，对新疫苗免疫效果的要求越来越高。减毒或无毒的病毒疫苗载体能够激发高效持久的系统和黏膜免疫，并且具有较高的安全性，为研究新疫苗提供了一条途径。RNA病毒作为疫苗载体，在可操作性和免疫效果方面有着显著的优势，近年来已成为疫苗研究领域的热点。综述了几种RNA病毒载体目前的研究状况及其在疫苗载体方面的应用。

简介：摘要目的构建人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)转录的长链非编码RNA4.9(long non-coding RNA4.9, lncRNA4.9)干扰慢病毒载体。方法设计并合成3条以lncRNA4.9为靶点的干扰序列，构建穿梭质粒GV248和目的干扰序列的重组质粒，测序验证序列，将重组质粒与骨架质粒pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞，收集病毒颗粒并检测拷贝数。将干扰慢病毒载体转染THP-1细胞，观察荧光表达量，通过real-time RT-PCR法检测干扰效率。结果构建的3组慢病毒干扰载体(LV1、LV2、LV3)，LV2和LV3具有干扰效率，LV2组干扰效率最高。结论成功构建lncRNA4.9干扰慢病毒载体，为后续进一步研究lncRNA4.9的功能奠定了基础。

简介：目的：构建并制备能够有效表达EB病毒BHRF1基因的重组慢病毒载体,观察BHRF1表达对人胚肺成纤维细胞（KMB17）凋亡的影响。方法：采用RT-PCR法,从B95-8细胞扩增EBVBHRF1基因,克隆至pWPIGW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒。将纯化后的重组慢病毒直接感染293T和KMB17细胞,荧光显微镜、实时定量RT-PCR、免疫印迹等方法检测BHRF1在细胞中的表达水平。流式细胞仪检测BHRF1表达对凋亡诱导剂或无血清培养诱发KMB17细胞凋亡的影响。结果：重组慢病毒介导BHRF1在293T和KMB17细胞内获得表达,能有效地抑制KMB17细胞的凋亡。结论：成功构建了表达BHRF1基因的重组慢病毒载体。

简介：腺病毒（Adeno）基因组为线状双链DNA，长度大约36kb．适合于容纳较大片段外源基因。与逆转录病毒载体相比，腺病毒载体能有效地将外源基因转染到各种靶细胞中。其宿主范围广，感染性强，尤其能感染分化后的非分裂期细胞。在Adeno生活周期中，其基因不整合到宿主细胞DNA中，故无插入突变激活癌基因的危险，外源基因能游离地表达。商品化的腺病毒载体一般剔除了其基因组的E1区，经体外重组后，产生可复制缺陷型腺病毒。

简介：摘要目的构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体。方法应用RT-PCR方法从小鼠脑组织中扩增分离CXCR3基因，经双酶切位点插入腺病毒载体pacAd5中，经氨苄青霉素抗性筛选、酶切及DNA测序方法验证目的基因。采用Lipofectamine?2000将重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞，包装、扩增后测定病毒滴度。结果RT-PCR方法获得1.1Kb目的基因CXCR3，经氨苄青霉素抗性筛选的重组克隆经酶切及DNA测序证实为目的基因。重组CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞后获得包装及扩增，病毒滴度达1.8×108PFU/ml。结论本研究成功构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5，可用于进一步研究CXCR3参与多种疾病转归的分子免疫机制。

简介：昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclearpolyhedrosisvirus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外源基因表达载体的设想最初是由Miller1981年提出。1983年

简介：目的构建hTERT基因RNAi慢病毒载体,为大肠癌RNAi介导的基因治疗打下基础。方法化学合成3条靶向hTERT基因的siRNA,转染大肠癌细胞SW480,48h后采用RT-PCR方法筛选出一条对hTERTmRNA有明显抑制作用的siRNA。针对已经筛选确定的hTERT基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ酶切后的GP-SupersilencingVector载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白（GFP）]连接产生LV-shhTERT慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-shhTERT、pGag/Pol、pRev和pVSV-G4质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功构建hTERTshRNA的慢病毒载体LV-shhTERT。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108UT/ml。结论成功构建了hTERT基因RNAi慢病毒载体。

简介：目的构建CathepsinK(CTSK)基因慢病毒表达质粒,为进一步研究CathepsinK在人软骨细胞体外老化过程中的作用奠定基础。方法采用RT-PCR技术扩增CathepsinK基因的蛋白翻译区,通过连接、转化等分子生物学技术,将该基因克隆至慢病毒pLenti6-V5载体上,经BamHI、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序。结果从软骨细胞中成功地克隆出990bp的CathepsinK基因,并经酶切分析得到6．964Kb和1．005Kb大小的两片断,测序结果显示接头两端序列正确。结论通过基因克隆方法成功构建了CathepsinK基因表达质粒,可用于进一步的病毒包装,为深入研究该基因对软骨细胞老化的影响奠定了基础。

简介：摘要目的构建大鼠RNAi-腺苷A2a受体(A2aR)慢病毒载体并进行鉴定。方法首先构建3对短发夹RNA(shRNA)-A2aR序列(shRNA-A2aR 1、shRNA-A2aR 2、shRNA-A2aR 3)，在shRNA慢病毒载体中分别插入3对双链shRNA oligo，shRNA慢病毒重组质粒构建成功后，将重组质粒、包装载体、穿梭载体共转染293T细胞，从而获得病毒液。实验Ⅰ　采用随机数字表法将大鼠原代心肌细胞分为3组(n＝6)：空载组(V组)、shRNA-A2aR 1组和shRNA-A2aR 3组，各组分别转染MOI为10的相应病毒液，转染48 h时，Western blot法检测A2aR表达水平，确定干扰效率，以筛选最佳慢病毒载体。实验Ⅱ　采用随机数字表法将大鼠原代心肌细胞分为5组(n＝36)：空载组(V组)、MOI5组、MOI10组、MOI15组和MOI20组，各组分别转染相应MOI的病毒液(最佳慢病毒载体)，于转染24、48和72 h时，采用CCK-8法测定细胞存活率，荧光显微镜下观察细胞活力和细胞死亡情况，Western blot法检测A2aR表达水平，确定干扰效率。结果实验Ⅰ　成功构建了2种shRNA-A2aR慢病毒载体(shRNA-A2aR 1、3)。shRNA-A2aR 3病毒液滴度为3.5×108 TU/ml。与V组和shRNA-A2aR 1组比较，shRNA-A2aR 3组心肌细胞A2aR表达下调(P<0.01)，shRNA-A2aR 3慢病毒载体干扰效率73%。实验Ⅱ　选择shRNA-A2aR 3慢病毒载体转染24 h时，各组细胞存活率均>85%；转染48 h时，MOI5组和MOI10组细胞存活率>80%；转染72 h各组细胞存活率<70%。倒置荧光显微镜下可见，MOI5组荧光密度稍低，MOI10组转染48 h及MOI20组转染24 h时，荧光密度较高且细胞状态较好；转染72 h时各组心肌细胞活力明显下降、死亡细胞增加。Western blot显示：MOI10组转染48 h、MOI15组转染48 h、MOI20组转染24和48 h时干扰效率均>70%。结论成功构建了大鼠shRNA-A2aR慢病毒载体，且MOI为10、转染48 h或MOI为20、转染24 h为最佳转染方案。

简介：目的探讨构建携带人pre—mir181a基因的重组腺病毒载体，为基因治疗研究提供一种新的方法，并观察其在神经胶质瘤细胞U251细胞中的表达。方法以从Genesil公司购买的含有mir181a的质粒为模板扩增pre—mir181a基因，将回收的PCR产物片段克隆入pGenesil载体，获得重组质粒pGenesil—pre—mir181a。从pGenesil—pre—mir181a上通过LR体外同源重组将mir181amicroRNA表达框转移至pGSadeno腺病毒表达载体上。在体外用不同感染复数（M·O·I）值rAd5-mir181ab分别转染神经胶质瘤细胞U251细胞。采用流式细胞仪、RT—PCR方法检测目的基因的转染效率和表达。结果PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明，重组腺病毒rAd5-mir181a构建正确。神经胶质瘤细胞U251细胞转染rAd5-mir181a的最高效率可达99％，转染后的神经胶质瘤细胞U251细胞表达相应的mir181a。结论本实验成功构建了含mir181a基因的重组腺病毒rAd5-mir181a载体，在体外能高效转染神经胶质瘤细胞U251细胞。

简介：