简介:目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9?MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果将Cas9?MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228bpMAD2L1PCR产物,可被酶切成166bp和62bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。
简介:摘要CRISPR/Cas9是近年来发展起来的一种非常高效的基因组定点编辑技术。然而,很多研究表明设计的单一向导RNA(SingleguideRNA,sgRNA)通常会与基因组DNA发生一定概率的序列错配,从而引起非预期的基因组编辑,即所谓的脱靶效应(Off-targeteffects)。脱靶效应是制约CRISPR/Cas9基因编辑技术得以迅速发展的重要掣肘,CRISPR/Cas9脱靶检测则成为降低脱靶率的重要前提,引起了很多科学工作者的关注。本文将重点介绍现行的几种脱靶检测方法,并对其原理进行分析与对比研究。
简介:初为人师是在动乱年月,上任的第一天便碰了钉子.我所要教的班——初一(1)班原任课教师去当“政治学徒”,已经好多天没有人上课了。刚打过预备铃.我就来到教室门口,教室里乱哄哄的.还有一群学生在外面追逐嬉闹,见此情景,我的心凉了半截。费了九牛二虎之力.总算把这一群乱羊圈进了教室。刚要开口讲话,下面又吱吱喳喳地嚷开了。我拿起教鞭.拍着讲台.大声呵斥,然而收效甚微.不少学生仍继续说话,就是不能安静下来。我看准一个说得最起劲的学生,气势汹汹地走到他面前.劈手揪住他的前胸,把他提起来.责问他为什么老是要说话。谁料他一言不发.只瞪着眼睛看我,我气得把他拉出座位.撵出室外。
简介:大型的瀑布,类似于尼亚加拉瀑布,山泉或者是一些小型的瀑布,都是以一种自然力量来渲染一种感觉,纯洁与宁静。或许这就是为什么她们成为一种一成不变的灵感,在当今家庭内部装饰中,无论是新型的用于浴缸中的水龙头或是淋浴头,其实都带来了史无前例的在水中自然演绎的特征。这个理念的目标就是把用户更贴近到“源泉”,传递出一种超越水疗按摩,又能给人们带来自然喻悦的陕感。个性而舒适的理念,从而使人们寻求到一种真实并且又一贯透明的水。结论是:用一种非常强烈的,充满诗意并富有想象力个性方式来构思作品,使得控制流动的水能够以一种难以置信的舒适度以及温和滋润的方式冲洗我们。以一种经典而又现代的卫生间做构思,这些产品毫无疑问为我们带来了耳目一新的体验。
简介:摘要:“性格决定命运,气度决定成就,思路决定出路,细节决定成败”。虽然我们很难改变自己的性格,但是我们可以做一个有心人,勤于思考,善于总结,从平凡的事情里总结不平凡的道理,丰富自己的大脑。