简介:摘要目的观察IGF2蛋白对小鼠早胚体外发育的影响。方法①体外培养:取野生型和IMP2基因敲除组小鼠受精卵,分别在含或不含IGF2的M16培养基中进行体外连续培养,观察各组发育至囊胚的数目和囊胚发育率;②胚胎移植:分别将4组早胚移植回代孕雌鼠,观察4组代孕雌鼠的产仔率和妊娠率。结果在体外培养实验中,对比无IGF2的囊胚形成率(29.4%),野生型添加IGF2组的胚胎发育到囊胚率明显提高(65.8%),差异具有统计学意义(P=0.002)。IMP2基因敲除鼠无IGF2组和IGF2组几乎都不能发育到囊胚,差异无统计学意义(P=0.060)。胚胎移植实验中,接受IGF2处理过的野生型胚胎的代孕母鼠平均每个雌性产下更多的幼崽,并且怀孕率也明显高于接受未处理过的对照胚胎的雌性,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论IGF2可显著提高野生型小鼠囊胚形成率和胚胎发育能力,但对IMP2基因敲除小鼠胚胎无影响。
简介:为改进类胚体制备过程中分化不同步等问题,探讨采用小鼠胚胎干细胞建立贴璧制备类胚体的新方法。当小鼠胚胎干细胞R1生长至70%-80%亚融合时,将其消化成单细胞,以1×10^6的细胞数接种到100mm组织培养皿中,用含低浓度白血病抑制因子(1ng/ml)的胚胎干细胞培养液连续贴壁培养3天后,收集贴壁细胞团继续悬浮培养。对悬浮培养的类胚体及其冷冻切片行形态学观察。结果发现该类胚体大小均一,分化同步。能展示从简单类胚体到成熟囊性类胚体的典型发育过程。免疫荧光染色观察到悬浮及贴壁分化的类胚体甲胎蛋白(AFP)、血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM—1)及神经丝蛋白68kD(NF-68)三种标志物表达均为阳性。结论:与目前常用的类胚体制备方法相比,本法操作简便,类胚体形成率高、分化阶段同步、结构典型,具有分化为三个胚层来源细胞的能力。