简介：为获得南瓜ISSR最优扩增体系,为后续南瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以‘密本’南瓜为筛选体系材料,采用单因素试验,对ISSR反应体系的Mg2＋、dNTP、Taq酶、引物和DNA浓度等5个因素进行优化。研究结果表明,南瓜ISSR25μL最佳反应体系为：2.5μL10×Buffer,2.0mmol/LMg2＋,0.3mmol/LdNTP,1UTaq酶,0.48mmol/L引物,75ng的DNA。在此基础上,对筛选出的12条引物进行退火温度的优化,最终确定每条引物的最佳退火温度。利用该反应体系,选用引物891对85个南瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强、重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于南瓜的ISSR分子标记。

简介：目的：建立党参的ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR标记技术进行党参鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序.方法：采用试剂盒法提取党参基因组DNA为模板,通过单因素实验分析了ISSR-PCR反应体系中MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、模板DNA用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响.结果：建立了重复性好,分辨率高的ISSR-PCR反应体系,即在25μL反应体系中,含有10×PCRBuffer缓冲液2.5μL,MgCl22.0mmol·L-1,dNTPs0.5mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,TaqDNA聚合酶1.0U,模板DNA为30ng;扩增程序为：94℃预变性5min,然后94℃变性30s,51.7℃退火1min,72℃延伸1.5min,共计35个循环,循环结束后在72℃延伸7min,4℃保存.结论：建立了适用于党参的ISSR-PCR反应体系,为应用ISSR技术鉴定党参种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础.

简介：以期建立可用于地龙ISSR－PCR分析的最佳反应体系和扩增程序,模板DNA的量、引物浓度、镁离子浓度和Taq酶的量、引物退火温度等都会影响ISSR扩增,将地龙ISSR-PCR扩增体系中的dNTPs浓度定为0.2mmol·L-1

简介：确定了引物809以柴胡基因组DNA为模板扩增的最佳退火温度为54.5℃（见图2a）,因此选择0.3μmol/L作为柴胡ISSR-PCR反应体系中最佳的引物浓度,本实验在25μlISSR-PCR反应体系中对TaqDNA聚合酶设置了0.5

简介：为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以暴马丁香基因组DNA为模板,首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验,对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg2＋、TaqDNA聚合酶和引物浓度等5种因素4个水平进行了优化试验。暴马丁香的ISSR-PCR最佳反应体系最终确定为：在25μL的反应体系中,DNA模板是40ng,Mg2＋浓度为2.0mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为1.5U,dNTPs浓度为0.2mmol/L。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的10条引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为以后利用ISSR分子标记技术进行暴马丁香的有关研究提供了科学依据。

简介：【背景】西花蓟马是近年来在我国局部地区暴发成灾的重要入侵害虫。【方法】本文通过改进的STE法提取西花蓟马的基因组DNA，对西花蓟马ISSR—PCR反应体系中的DNA、引物、Taq聚合酶、buffer缓冲液、dNTPs、Mg^2＋和去离子甲酰胺等7个影响因素进行了单因素试验，初步筛选出各因素的较优浓度；然后对影响较大的4个因素进行了正交设计试验L15（4^4），建立了适合西花蓟马ISSR分子标记的最佳反应体系。【结果】在20μL的反应体系中包含模板DNA30ng、10×Buffer2．0μL、引物1．05μmol·L^-1、Taq聚合酶2．0U、dNTPs212．5μmol·L^-1及MsS042．25mmol·L^-1。【结论与意义】利用采自云南昆明、玉溪、楚雄、红河、保山、昭通、丽江、大理和普洱9个地方的西花蓟马样本对所建立的反应体系进行检验，结果表明优化后的体系适用于西花蓟马的遗传多样性分析，本研究可为进一步研究西花蓟马的种群结构奠定基础。

简介：为通过ISSR分子标记研究桃儿七遗传多样性,建立并优化桃儿七的ISSR-PCR反应体系。使用正交设计辅以单因素试验,对桃儿七ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素（模板DNA,Mg-（2＋）,TaqDNA酶,dNTPs及ISSR引物）进行筛选优化,选取甘肃碌曲县西仓神山山顶桃儿七居群样本验证该反应体系。正交试验各因素显著性为引物〉TaqDNA酶〉DNA浓度〉dNTPs〉Mg-（2＋）,桃儿七ISSR-PCR反应的最佳体系为（25μL）：2.5mmol/LMg-（2＋）,0.2mol/LdNTP,0.4μmol/L引物,0.5UTaqDNA酶,40ngDNA,2.5μL10×Buffer。该体系具有高稳定性,多态性丰富的特点,为野生桃儿七遗传多样性及保护策略研究提供了技术支持。

简介：以番茄叶霉病菌（Passalorafulva）基因组DNA为模板,采用单因素试验和正交设计试验对该菌ISSR-PCR体系中的一些重要参数（Mg2＋、dNTPs、引物、模板DNA、TaqDNA聚合酶、缓冲液、循环次数）和引物进行筛选和优化,并对退火温度进行了梯度优化,建立了番茄叶霉病菌ISSR-PCR的最佳反应体系（20μL）：Mg^2＋1.5mmol/L,dNTPs0.4mmol/L,引物1.5μmol/L,模板DNA45ng,TaqDNA聚合酶1.0U,1倍的PCR缓冲液,循环40次,退火温度50℃。

简介：采用正交试验设计的方法,对黑木耳ISSR-PCR(简单重复序列区间-多聚酶链反应)反应体系中的5种主要因素(Taq聚合酶,Mg2+,模板DNA,dNTP及引物)4个水平进行优化筛选,确立了适合黑木耳ISSR分析的优化反应体系(20μL),通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度.

简介：在利用ISSR技术分析齿裂菌属和皮下盘菌属遗传多样性的研究中，为获得条带清晰、重复性好的ISSR扩增结果，对影响ISSR—PCR的条件进行了筛选，确定了此类菌物ISSR—PCR反应的最适宜条件：在15μLPCR反应体系中，10倍Taq酶缓冲液1．5μL，DNA模板8ng／μL，MgCl22．5mmol／L，dNTP0．15mmol／L，引物浓度0．4μmol／L，Taq酶1．00U，ddH2O9．0μL。最佳退火温度因不同的引物而定，最佳循环次数为35次。

简介：目的：探索ISSR分子标记技术对玉竹的主要栽培品种、野生种及易混淆品黄精进行鉴定的新方法。方法：采用优化的ISSR-PCR体系，筛选出能扩增明显多态性条带的引物对样品进行扩增和凝胶电泳分析，并依遗传距离构建分子聚类图。结果：10个引物共扩增出125个DNA片段，其中116个片段呈现多态性，多态带百分率为92．9％。玉竹品种间存在较大的遗传多样性，栽培品种与野生种及易混淆品黄精易于区分。结论：本实验所建立的ISSR分子标记方法可用于玉竹的品种鉴定和良种选育研究。

简介：在人教版高中《生物·选修3·现代生物科技专题》关于PCR的教学中，有几个问题会经常困扰教师和学生。下面就列举这些问题并作以解答。

简介：通过正交试验建立芦笋ISSR优化反应体系,并对其反应程序进行优化。实验结果表明,优化的扩增体系：25μL的反应体系中含150ng的模板DNA、0.3μmol/L引物、15μL2×Mastermix;优化的反应程序：94℃预变性5min;94℃变性45s,设定温度退火60s,72℃延伸45s,循环30次;然后72℃延伸10min,4℃保存;筛选到了21条引物并确定其最优退火温度。实验结果为芦笋资源遗传多样性评价的研究奠定基础。

简介：菜薹原产中国,是华南地区重要的特产蔬菜之一。目前,分子标记技术已广泛应用于多种作物研究,但在菜薹上的应用研究刚刚起步。ISSR主要是由单一引物且以重复序列为主要引物序列的PCR标记,其反应条件受模板DNA、TaqDNA聚合酶、Mg2+、dNTP和引物等因素的影响。正交试验设计能明确各因素间的互作效应,建立最优化的反应体系。本研究利用正交试验设计,从TaqDNA聚合酶、dNTP、引物、Mg2+4种因素3个水平对菜薹ISSR反应体系进行了优化,确立了适合菜薹的ISSR反应体系并在7个菜薹品种中进行了验证。在20μl反应体系中,含TaqDNA聚合酶1U、dNTP250μmol/L、引物0.25μmol/L、1×PCRbuffer、Mg2+2.5mmol/L、模板DNA30ng。通过梯度PCR测验,确定了适宜的退火温度。这一体系的建立为今后利用ISSR技术进行菜薹种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。

简介：对珍稀濒危物种都支杜鹃的ISSR扩增体系中的Mg^2＋浓度、dNTP浓度、Taq酶含量和底物含量进行优化，并在优化后的基础上筛选出8条效果较好的引物，在梯度PCR仪中设置温度梯度，找到这些引物的最佳退火温度。优化结果表明，至少在一定的范围内底物浓度和Taq酶含量对PCR反应结果影响不大，相对而言，dNTP浓度和Mg2＋浓度对反应结果的影响更加显著。优化后的15ulPCR反应体系中包括20ng模板DNA、0.3μM引物、1.5ulBuffer（Mg^2＋free），0.5UTaq酶、1.5mMMgCl2和0.1mMdNTP。

简介：节Strobus的12种类的基因关系与ISSRmarkers被分析。117loci与12份ISSR教材被检测。多态的乐队(PPB)的百分比从5.93%～19.92%变化了。P。pumila有基因区别和P的高水平。flexilishad最低。在节Strobus的12种类的全部的基因差异(H_T)是26.21%，基因差异(H_S)是的whichintraspecific7.66%，并且种间的基因差异(D_(圣))was18.55%，和遗传变异在内部种类说明了70.78%全部的基因差异。根据遗传距离的簇结果，12种类被分类进二个组。第一个组包括了P。griffithii，P。armandi，P。fenzeliana，P。kwangtungensis，P。strobus，P。monticola和P。wangii。第二个组包括了P。albicaulis，P。pumila，P.flexilis，P。sibirica和P。koraiensis。

简介：以CTAB法提取的马蹄金叶片DNA为模板，应用L16（4^5）正交表系统分析了DNA、Mg^2＋、dNTP、Taq酶、引物5种ISSR反应成分浓度变化对扩增结果的影响。量化分析结果表明：Taq酶、dNTP不同水平对PCR反应结果有显著影响，正交设计可以应用于ISSR-PCR反应体系的建立，用这种方法建立的马蹄金ISSR优化反应体系为：1×buffer，25ng模板DNA，1．75mmol／LMg^2＋，225μmol／LdNTP，0．91μmol／L引物，1．25U7TaqDNA聚合酶，总体积20μl。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术，研究马蹄金的地理变异提供一个标准化程序。

简介：采用ISSR分子标记方法对24份爱玉品种的遗传多样性进行分析。从100条ISSR引物中筛选出17条扩增清晰、重复性高、多态性好的引物,选取其中4条多态性强的引物进行聚类分析。结果表明：4条引物共检测到43个多态性位点,多态性百分率为89。6％。这4条引物可以将24份爱玉种质之间的遗传差异完全区分。利用聚类分析,可以将24份爱玉种质聚分为4大类,24份爱玉种质的遗传相似系数变化范围在0。69-0。92之间。

简介：菰是一种稻族野生资源,水生或沼生,在我国有着广泛的分布。野生菰群体不仅是一种重要的育种基因资源,同时还有着巨大的生态作用。为建立适宜于菰的ISSR反应体系,以菰DNA基因组为模板对ISSR反应体系中的主要影响因子进行优化。采用单因素变量法在12个不同梯度水平上设计正交试验针对体系中dNTPs浓度、Mg^2＋浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度及引物退火温度等6个因子进行优化,确定了在20μLISSR反应体系中各组分的最适因素水平分别为：3.0mmolMg^2＋（10×Buffer）,0.5mmoldNTPs、1.0μmol引物浓度、0.24U/μLTaq聚合酶、1.5ng/μLDNA模板以及55℃退火温度。应用该优化体系对80个菰材料进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性,为菰遗传资源的鉴定、评价与利用提供了技术支撑。

简介：