简介：摘要目的建立稳定的KIR2DS4基因测序分型法并研究KIR2DS4在中国汉族人群中等位基因多态性。方法采用PCR序列特异性引物(sequence specific primer，SSP)分析法对222名随机中国汉族个体基因组中的KIR2DS4基因进行阴阳性初筛鉴定，对KIR2DS4阳性的标本采用高保真、长片段PCR测序分型技术(PCR-sequence based typing, PCR，PCR-SBT)对KIR2DS4基因的第4、5外显子的片段进行扩增、测序及分型。结果建立的PCR-SBT方法成功扩增出KIR2DS4基因的第4、5外显子序列，长度达3.2 kb。探究中国汉族人群中KIR2DS4等位基因型及频率。检出KIR2DS4阳性个体为209个，阳性率为94.1%。测序分型共发现12种基因型和7种等位基因，6种已知的等位基因及其检出频率为：KIR2DS4*00101/011(180次，81.1%), KIR2DS4*010(53次，23.9%)，KIR2DS4*004(34次，15.3%), KIR2DS4*003(15次和6.8%), KIR2DS4*006(2次，0.9%)以及KIR2DS4*015(1次，0.5%)。发现并鉴定一个新等位基因KIR2DS4*016，与其最相近的等位基因KIR2DS4*010区别在第5外显子，KIR2DS4*010的第5外显子是22 bp缺失型，而KIR2DS4*016的第5外显子为完整型。该新等位基因在受检人群中被发现3次，频率为1.4%，并非罕见等位基因，该等位基因序列已向GenBank(登录号：KC414890)及IPD-KIR数据库(提交号：IWS40001804)提交，并获得世界卫生组织HLA系统命名因子委员会的命名。结论本文中我们成功建立了KIR2DS4基因4、5外显子测序分型方法，并对其等位基因多态性进行了探究，发现了新的KIR2DS4等位基因型，丰富了中国汉族人群KIR2DS4基因多态性数据。

简介：目的探讨缺血再灌注损伤大鼠心肌中,Kir6.1与Kir6.2通道亚基基因及蛋白水平表达的改变.方法雄性SD大鼠14只,体重250～300g,随机分为:假手术组、缺血再灌注损伤(IRI)组,每组各7只.RT-PCR方法检测Kir6.1、Kir6.2mRNA的表达;WesternBlot方法检测细胞膜Kir6.1与Kir6.2蛋白的表达;同时应用放免法检测血浆AngⅡ与缺血区、非缺血区的心肌AngⅡ含量.结果(1)IRI引发缺血区及非缺血区Kir6.1mRNA水平明显升高,而Kir6.2mRNA水平没有明显改变;(2)IRI引发缺血区及非缺血区心肌细胞膜Kir6.1蛋白水平明显升高,而Kir6.2蛋白水平没有明显改变.结论IRI导致心肌KATP通道亚基构成发生了改变,可能与局部RAS的激活有一定的关系.

简介：

简介：目的调查河北地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）的基因频率分布情况。方法收集河北地区无血缘关系汉族人群血液样本288份,采用PCR-SSP法检测KIR基因型,统计基因频率。结果河北地区汉族人群中KIR框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1的基因频率均为100.00%,2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的频率较高,均〉92.00%,而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的频率则较低;在河北汉族人群中共发现51种组合型,KIR组合型2DL4＋3DP1＋3DL2＋3DL3＋2DL1＋2DL3＋2DP1＋3DL1＋2DS4所占比例最大,约为43.75%。结论河北汉族人群中KIR基因频率与其他亚洲人群相似,不同于其他民族。KIR组合型2DL4＋3DP1＋3DL2＋3DL3＋2DL1＋2DL3＋2DP1＋3DL1＋2DS4所占比例最大。

简介：

简介：摘要目的应用cDNA分子克隆测序方法，鉴定中国南方汉族1个KIR3DL3新等位基因。方法采集1例KIR3DL3基因测序结果异常的无偿志愿捐血者的外周血样，提取mRNA并逆转录为cDNA。设计1对具有KIR3DL3基因特异性的PCR引物对cDNA进行扩增，扩增产物纯化后进行分子克隆测序。结果经分子克隆测序，检出1个正常的KIR3DL3*00802等位基因和1个KIR3DL3*064新变异等位基因。KIR3DL3*064与KIR3DL3*00601等位基因的序列最为接近，仅有编码区存在nt1184 C>T错义变异，导致第9外显子中的第374密码子由ACT变为ATT，所编码的苏氨酸(Thr)变为异亮氨酸(Ile)。该等位基因被世界卫生组织HLA因子命名委员会KIR分委会正式命名为KIR3DL3*064。结论cDNA分子克隆测序法能够鉴别常规测序分型中的异常结果，可用于鉴定KIR3DL3新等位基因。

简介：摘要目的分析浙江汉族人群KIR3DL2等位基因分布。方法基因组DNA提取采用磁珠法。应用PCR技术通过4对引物扩增KIR3DL2基因的全长序列，利用BigDye terminator v3.1测序试剂盒对208名无血缘关系的汉族无偿献血者的全部外显子序列进行测序分析。根据KIR3DL2基因碱基多态性指定标本基因型。结果在检测的208份样本中，133份的KIR3DL2基因型为杂合子，75份的基因型为纯合子；共检出了46种基因型，常见的基因型为KIR3DL2*00201/KIR3DL2*00201、KIR3DL2*00201/KIR3DL2*00701和KIR3DL2*00201/KIR3DL2*01001，分别有70例、33例和23例。共检测到22个等位基因，频率较高的是KIR3DL2*00201、KIR3DL2*00701、KIR3DL2*01001，分别为57.45%、13.46% 、9.13%。结论浙江汉族人群KIR3DL2等位基因分布具有多态性。

简介：摘要目的探讨中国南方汉族人群KIR-HLA系统分子遗传多态性与急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)、急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia, AML)的相关性。方法对323份成年ALL、350份成年AML患者以及745份随机健康对照的样本，采用PCR-序列特异性引物(sequence specific primer，SSP)方法检测KIR基因，采用测序分型法进行HLA-A、-B、-C基因分型。从KIR基因、KIR基因组合型、HLAⅠ类配体、已知的KIR+HLA受-配体组合等4个方面比较各病例组与对照组分子遗传多态性的差异。结果ALL及AML病例组中分别检出了32种、33种KIR基因组合型，与对照组中检出的35种KIR基因组合型相比，AA1在ALL组和AML组的检出频率均显著低于健康对照组(ALL组：45.79% vs. 55.30%，Pc＝0.004；AML组：48.27% vs. 55.30%，Pc＝0.030)，为急性白血病保护性因素；ALL组中2DL2及其受-配体组合2DL2+HLA-C1、2DS2及其受-配体组合2DS2+HLA-C1的检出频率均显著高于健康对照组，而2DL3基因、HLA-A3/A11配体及3DL2+HLA-A3/A11受-配体组合的检出频率均显著低于健康对照组(P<0.05)，但经过Bonferroni校正后差异显著性均丢失(Pc>0.05)；AML组2DS1和2DL5的检出频率均显著高于健康对照组，而HLA-C2配体及2DL1+HLA-C2受-配体组合的检出频率均显著低于健康对照组(P<0.05)，但经过Bonferroni校正后差异显著性均丢失(Pc>0.05)。结论本文获得了南方汉族KIR-HLA系统中与急性白血病相关的潜在易感或保护性因素，尤其是保护性因素AA1基因组合型，可为急性白血病发病机制和个体化免疫治疗提供新的线索及理论依据。

简介：摘要目的探讨自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）与人类白细胞抗原（HLA）受配体模式对血液病患者单份非血缘脐血移植（sUCBT）预后的影响。方法回顾性分析2012年7月至2018年6月270例接受sUCBT的血液病患者。移植前脐血及患者均进行HLA12个位点高分辨配型，选择移植物（脐血）的KIR均同时表达2DL1和2DL2/2DL3抑制性基因，根据患者KIR配体情况分为缺失组（C1/C1或C2/C2）和无缺失组（C1/C2）。结果270例血液病患者中男146例（54.1%），女124例（45.9%），中位年龄13（1~62）岁；缺失组174例（64.4%），无缺失组96例（35.6%）。全部患者均采用不含抗胸腺细胞球蛋白（ATG）清髓性预处理方案。缺失组、无缺失组粒细胞植入率均为98.9%（172/174、95/96），中位植入时间分别为16（10~41）d、17（11~33）d（P=0.705）；血小板植入率分别为88.5%（154/174）、87.5%（84/96），中位植入时间分别为35（11~113）d、38.5（13~96）d（P=0.317）；缺失组、无缺失组Ⅱ~Ⅳ级急性GVHD发生率分别为38.7%（95%CI 31.4%~45.9%）、50.0%（95%CI 39.6%~59.6%）（P=0.075），多因素分析显示KIR配体缺失是影响Ⅱ~Ⅳ度急性GVHD发生的独立保护性因素（P=0.036）。移植后3年累积复发率分别为17.7%（95%CI 11.7%~24.9%）、22.7%（95%CI 14.4%~32.2%）（P=0.288）。中位随访时间742（335~2 512）d，缺失组、无缺失组3年总生存率分别为72.1%（95%CI 64.1%~78.6%）、60.5%（95%CI 47.9%~69.2%）（χ2=3.629，P=0.079），3年无病生存率分别为64.9%（95%CI 56.2%~72.3%）、55.4%（95%CI 44.4%~65.0%）（χ2=3.027，P=0.082），移植后180 d非复发死亡率分别为12.1%（95%CI 7.7%~17.4%）、16.7%（95%CI 10.0%~24.8%）（P=0.328）。结论在不含ATG清髓性预处理sUCBT血液病治疗体系中，缺失抑制性KIR配体患者移植后急性GVHD发生率更低。

简介：目的研究急性白血病儿童NK细胞受体NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率。方法选取2016年3月至2017年6月本院收治的急性白血病患儿58例,其中急性淋巴细胞白血病患者45例、急性粒细胞白血病患者13例。按照治疗时间不同将患儿分成新发组及正常组,每组29例,分析两组患儿NK细胞受体NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率。结果新发组NKG20表达率为(79.56±11.46)%,正常组NKG20表达率为(92.36±3.25)%,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。新发组NKp46表达率为(61.56±11.32)%,正常组NKp46表达率为(79.26±4.52)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。新发组KIR2DL1表达率为(19.85±3.54)%,正常组KIR2DL1表达率为(12.87±1.75)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。新发组与正常组患儿NK细胞数量及活性比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论随着治疗的进行患儿NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率可逐渐恢复,提示机体NK细胞的免疫能力逐渐提升。

简介：摘要目的探究硫化氢的抗癫痫机制即调控环磷酸鸟苷/蛋白激酶G（cGMP/PKG）信号通路对三磷酸腺苷敏感性钾通道（KATP）亚基Kir6.2表达的影响。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为6个组（每组10只）：（1）正常对照组；（2）癫痫组；（3）硫化氢供体干预组；（4）硫化氢供体加PKG抑制剂（KT5823）组；（5）硫化氢供体加KATP抑制剂（格列本脲）组；（6）硫化氢供体正常对照组。采用腹腔注射戊四氮致大鼠癫痫发作，记录潜伏期、首次发作级别、持续时间；记录癫痫发作时海马脑电图的变化；采用 蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测海马组织中PKG、Kir6.2 mRNA和蛋白的表达水平，酶联免疫吸附测定法检测海马组织中cGMP、磷酸化PKG的浓度。结果癫痫组出现Ⅳ~Ⅴ级发作，级别为4.500（4.000，4.875）级，潜伏期短［（10.37±8.21） min］， 持续时间长［（69.50±24.37） s］。与癫痫组相比，硫化氢供体干预组的发作级别降低（P=0.004），潜伏期延长（P<0.001）和持续时间缩短（P<0.001）。硫化氢供体加PKG抑制剂组与硫化氢供体干预组相比，潜伏期缩短（P<0.001），持续时间延长（P<0.001）。硫化氢供体干预组癫痫波明显减少，波幅与癫痫组相比差异有统计学意义（P<0.001）；硫化氢供体加PKG抑制剂组与硫化氢供体干预组相比癫痫波增加，波幅增大（P<0.001）。组间比较结果提示，各组PKG mRNA和蛋白的表达水平存在差异（分别为n=5， H=26.714， P<0.001和n=5， F=30.597， P<0.001）；其中与正常对照组相比，癫痫组PKG mRNA（分别为1.000±0.001和0.782±0.064，P=0.023）和蛋白（分别为0.550±0.037和0.145±0.020，P=0.042）的表达水平显著下降。组间比较结果提示，各组Kir6.2 mRNA和蛋白的表达水平存在差异（分别为n=5， H=27.761， P<0.001和n=5， F=60.659， P<0.001）；其中与正常对照组相比，癫痫组Kir6.2 mRNA（分别为1.000±0.001和0.897±0.033，P=0.004）和蛋白（分别为0.384±0.035和0.215±0.016，P=0.024）的表达水平显著下降，cGMP（P<0.001）、磷酸化PKG（P<0.001）的浓度降低；与癫痫组相比，硫化氢供体干预组PKG mRNA（P=0.047）、Kir6.2 mRNA（P=0.011）、PKG 蛋白（P<0.001）和Kir6.2蛋白（P<0.001）的表达水平则上升，cGMP、磷酸化PKG的浓度升高（均P<0.001）；尤其是与硫化氢干预组相比，硫化氢供体加PKG抑制剂组PKG mRNA（P=0.015）、Kir6.2 mRNA（P=0.013）、PKG 蛋白（P=0.027）和Kir6.2蛋白（P=0.017）的表达水平下降，cGMP（P=0.005）、磷酸化PKG（P<0.001）的浓度降低。结论硫化氢可抑制大鼠癫痫发作，其机制之一可能与激活海马中cGMP/PKG信号通路上调KATP通道亚基Kir6.2的表达从而降低海马的兴奋性有关。