简介:目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后松果体内小RNA(miRNA)的差异表达,研究其在HIBD导致的昼夜节律紊乱中的作用。方法将7日龄的新生Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为HIBD模型组和假手术组,根据Rice-Vannucci法制作HIBD模型,24h后分别取两组松果体组织,通过miRNA芯片检测及实时荧光定量PCR法(RT-PCR)筛选出HIBD后高表达的miRNA,测定其在各组织(肺、肠、胃、肾、大脑皮层、松果体组织)中的表达差异。利用RT-PCR技术分别测定两组在缺氧缺血后0、24、48、72h松果体中高表达miRNA及靶基因ClockmRNA的表达变化。结果miRNA芯片结果结合RT-PCR技术筛选出多个和HIBD相关的miRNA,其中miRNA-182表达差异明显。miRNA-182在松果体组织中高丰度表达。HIBD后24h、48hmiRNA-182的表达水平高于对应时间点的假手术组(P〈0.05);与对应时间点的假手术组相比,HIBD后0hClockmRNA表达水平升高,48h时降低,72h后明显升高(P〈0.05)。结论miRNA-182可能参与了HIBD后昼夜节律紊乱的病理生理过程。
简介:摘要目的探讨miR-182-5p对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR-182-5p的表达。将miR-182-5p抑制剂、miR-182-5p模拟物及阴性对照转染食管鳞癌Eca109和TE1细胞,RT-qPCR检测转染后ESCC细胞中miR-182-5p的表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测ESCC细胞的增殖能力,Transwell小室法检测ESCC细胞的侵袭能力。双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与细胞黏附分子2(CADM2)的相互作用,RT-qPCR检测ESCC组织中CADM2的表达,并分析其与miR-182-5p表达的相关性。Western blot检测转染后CADM2、粘着斑激酶(FAK)、p-Akt和Akt蛋白的表达。结果ESCC组织中miR-182-5p的相对表达水平为2.180±1.295,显著高于正常组织(0.890±0.284,P<0.001)。miR-182-5p高表达ESCC患者的生存率低于低表达患者(P<0.05)。ESCC组织中miR-182-5p的表达与ESCC的TNM分期和淋巴结转移有关关(均P<0.05)。ESCC细胞EC9706、Eca109、TE1、KYSE450和KYSE70中miR-182-5p的相对表达水平分别为2.449±0.082、2.965±0.088、4.873±0.258、1.338±0.045和1.999±0.082,均高于正常食管上皮细胞Het-1A(0.989±0.087,均P<0.01)。miR-182-5p抑制剂组Eca109和TE1细胞中miR-182-5p的表达下调,细胞的增殖和侵袭能力降低,而miR-182-5p模拟物组Eca109和TE1细胞中miR-182-5p的表达上调,细胞的增殖和侵袭能力增强。双荧光素酶报告实验显示,在CADM2 3′非翻译区-野生型载体和miR-182-5p模拟物共转染后,Eca109和TE1细胞中荧光素酶的活性显著降低(P<0.01),CADM2是miR-182-5p的直接作用靶点。ESCC组织中CADM2 mRNA的相对表达水平为0.190±0.143,显著低于正常组织(0.845±0.327,P<0.001)。ESCC组织中miR-182-5p和CADM2的表达呈负相关(r=-0.5004,P<0.001)。ESCC组织中CADM2表达与ESCC的TNM分期和淋巴结转移均密切相关(P<0.05)。CADM2高表达ESCC患者的生存率高于低表达患者(P<0.05)。miR-182-5p抑制剂组CADM2蛋白表达上调,FAK、p-Akt和Akt蛋白表达下调,而miR-182-5p模拟物组CADM2蛋白表达下调,FAK、p-Akt和Akt蛋白表达上调。结论miR-182-5p参与ESCC的发生发展过程,有望成为ESCC潜在的分子治疗靶点。
简介:摘要目的探讨血清miRNA-145(miR-145)、miRNA-21(miR-21)和miRNA-197(miR-197)对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值。方法回顾性分析2019年1月至2020年6月四川省泸州市中医医院收治的65例NSCLC患者的临床资料,以60名健康体检者为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有受试者血清miR-145、miR-21和miR-197的相对表达量,分析其与NSCLC患者临床病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-21和miR-197单独及联合诊断NSCLC的效能。结果NSCLC组miR-145相对表达量低于健康对照组(1.05±0.40比1.38±0.44,t=-4.326,P<0.01),miR-21、miR-197相对表达量均高于健康对照组(2.37±0.89比0.83±0.25,4.42±0.75比1.10±0.33,均P<0.01)。NSCLC组中,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者血清miR-21和miR-197相对表达量均高于Ⅰ~Ⅱ期患者(均P<0.01),腺癌患者miR-145相对表达量高于鳞状细胞癌患者(P<0.01),淋巴结转移患者miR-21相对表达量高于无淋巴结转移患者(P<0.01)。miR-145、miR-21、miR-197单独诊断NSCLC时,曲线下面积(AUC)分别为0.842(95% CI 0.795~0.907)、0.868(95% CI 0.812~0.938)、0.857(95% CI 0.801~0.913),诊断最佳截断值分别为1.14、2.03、2.98;采用最佳截断值进行诊断时,单独检测灵敏度最高的是miR-145(83.76%),特异度最高的是miR-21(87.63%);三者联合检测时AUC为0.939(95% CI 0.904~0.965),诊断灵敏度为91.58%,特异度为79.86%。结论miR-145、miR-21、miR-197相对表达量与NSCLC患者病理类型、TNM分期、淋巴结转移相关,可能成为辅助诊断NSCLC的标志物,三者联合检测可提高诊断效能和灵敏性。
简介:摘要目的探讨外周血miRNA-146a、miRNA-155和miRNA-186在重症肺炎患者中的表达及临床意义。方法选择宁波市医疗中心李惠利医院东部院区2019年2月至2021年2月收治的重症肺炎患者79例为研究对象,按照入院28 d预后情况,分为存活组(58例)与死亡组(21例);另选择同时段健康体检者60例为对照组。采集研究对象外周血标本,分离血清,采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)测定外周血miRNA-146a、miRNA-155和miRNA-186表达。结果重症肺炎组急性生理学和慢性健康状态Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分[(18.54±2.83)分]高于对照组[(3.18±0.57)分](t=41.37,P < 0.05)。重症肺炎组外周血miRNA-146a相对表达量(0.32±0.07)低于对照组(1.08±0.21),而miRNA-155相对表达量(2.54±0.46)和miRNA-186相对表达量(3.16±0.38)均高于对照组[(0.42±0.09)、(0.89±0.17)](t=30.07、35.16、43.08,均P < 0.001)。死亡组外周血miRNA-146a相对表达量(0.25±0.68)低于存活组(0.59±0.12),而miRNA-155相对表达量(3.97±0.78)和miRNA-186相对表达量(5.23±0.86)均高于存活组[(0.89±0.21)、(1.52±0.23)](t=19.11、27.69、30.29,均P < 0.001)。APACHE Ⅱ评分与miRNA-146a呈线性负相关(r=-0.75,P=0.015),而与miRNA-155和miRNA-186呈线性正相关(r=0.82、0.70,P=0.002、0.021)。重症肺炎诊断中,miRNA-146a灵敏度为72.34%,特异度为62.50%;miRNA-155灵敏度为75.00%,特异度为62.96%;miRNA-186灵敏度为66.67%,特异度为48.65%。结论外周血miRNA-146a在重症肺炎中低表达,而miRNA-155和miRNA-186在重症肺炎中高表达,且miRNA-146a、miRNA-155和miRNA-186与患者预后密切相关。
简介:MicroRNAs(miRNAs)areaclassofshort,endogenously-initiatednon-codingRNAsthatpost-transcriptionallycontrolgeneexpressionviaeithertranslationalrepressionormRNAdegradation.ItisbecomingevidentthatmiRNAsareplayingsignificantrolesinregulatorymechanismsoperatinginvariousorganisms,includingdevelopmentaltimingandhost-pathogeninteractionsaswellascelldifferentiation,proliferation,apoptosisandtumorigenesis.Likewise,asaregulatoryelement,miRNAitselfiscoordinativelymodulatedbymultifariouseffectorswhencarryingoutbasicfunctions,suchasSNP,miRNAediting,methylationandcircadianclock.Thismini-reviewsummarizedthecurrentunderstandingofinteractionsbetweenmiRNAsandtheirtargets,includingrecentadvancementsindecipheringtheregulatorymechanismsthatcontrolthebiogenesisandfunctionalityofmiRNAsinvariouscellularprocesses.
简介:摘要:miRNA在基因调控方面起着重要作用,其异常表达和特异性表达提示其可成为诊断或预后的生物标志物。因此准确测定其表达水平对于其应用十分关键。但是由于miRNA序列短,同源序列相似度高,含量低,缺乏能够使其选择性扩增的共同特征,使得检测miRNA十分具有挑战性。本文对近年来miRNA的检测方法进行了概述,包括传统方法及其改进进展,以及一些新的检测方法,并对这些方法的优缺点进行了总结。
简介:SmallinterferingRNA(siRNA)andmicroRNA(miRNA)aresmallRNAsof18-25nucleotides(nt)inlengththatplayimportantrolesinregulatinggeneexpression.TheyareincorporatedintoanRNA-inducedsilencingcomplex(RISC)andserveasguidesforsilencingtheircorrespondingtargetmRNAsbasedoncomplementarybase-pairing.ThepromiseofgenesilencinghasledmanyresearcherstoconsidersiRNAasananti-viraltool.However,inlong-termsettings,manyvirusesappeartoescapefromthistherapeuticalstrategy.Anexampleofthismaybeseeninthecaseofhumanimmunodeficiencyvirustype-1(HIV-1)whichisabletoevadeRNAsilencingbyeithermutatingthesiRNAtargetedsequenceorbyencodingforapartialsuppressorofRNAi(RNAinterference).Ontheotherhand,becausemiRNAtargetingdoesnotrequireabsolutecomplementarityofbase-pairing,mutationalescapebyvirusesfrommiRNAspecifiedsilencingmaybemoredifficulttoachieve.Inthisreview,wediscussstratagemsusedbyvariousvirusestoavoidthecells'antiviralsi/mi-RNAdefensesandnotionsofhowvirusesmightcontrolandregulatehostcellgenesbyencodingviralmiRNAs(vmiRNAs).
简介:摘要目的探讨miRNA-133b(miR-133b)和miRNA-150(miR-150)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及临床意义。方法选取2018年6月至2019年6月连云港市第一人民医院手术并经病理确诊的30例NSCLC患者,收集患者术前清晨空腹外周血10 ml以及术后新鲜癌组织、癌旁组织(距离癌组织≤3 cm)、正常肺组织(距离癌组织>5 cm)。以30名同期健康体检者作为健康对照组,收集清晨空腹外周血10 ml。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组受试者血清及NSCLC患者各组织中miR-133b、miR-150的相对表达量。分析NSCLC患者血清miR-133b、miR-150水平与临床病理特征的关系;以病理诊断为金标准,应用受试者工作特征(ROC)曲线判断miR-133b、miR-150诊断NSCLC的效能。结果NSCLC患者中,miR-133b在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为0.55±0.17、0.68±0.11、0.69±0.12,癌组织中miR-133b表达水平低于癌旁组织和正常肺组织(均P<0.01);miR-150在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为1.19±0.14、1.13±0.13、1.09±0.12,癌组织与癌旁组织间miR-150表达水平差异无统计学意义(t=1.98,P=0.051),癌组织中miR-150表达水平高于正常肺组织(t=3.06,P=0.003)。NSCLC患者血清miR-133b相对表达量较健康对照组低(0.43±0.11比0.55±0.16,t=3.68,P<0.05),miR-150相对表达量较健康对照组高(1.14±0.13比1.04±0.12,t=-3.18,P<0.05)。NSCLC患者血清中miR-133b的表达水平与淋巴结转移有关(P=0.003),而与患者的性别、年龄、病理分型、TNM分期均不相关(均P>0.05)。NSCLC患者血清中miR-150表达水平与各项临床病理特征均不相关(均P>0.05)。根据ROC曲线,NSCLC患者血清中miR-133b、miR-150的曲线下面积分别为0.732、0.726,二者联合检测的曲线下面积为0.811。结论NSCLC患者癌组织和血清中miR-133b表达水平均降低,miR-150表达水平均升高,二者在NSCLC患者的癌组织与血清中的表达趋势一致。miR-133b可能与NSCLC的恶性程度和侵袭、转移有关。miR-133b、miR-150可能成为诊断NSCLC的分子标志物,二者联合检测的诊断效能更高。
简介:目的探讨原发性肝癌患者miRNAlet-7a、miRNAlet-7f的表达.方法收集龙岗中心医院院及合作医院2014年6月至2016年3月接受肝癌切除手术的40例原发性肝癌患者.采用RT-PCR方法检测miRNAlet-7a、miRNAlet-7f在血清、肝癌/癌旁组织中的表达水平.选择同期该院体检的40例健康者作为健康对照者.比较肝癌患者和健康对照者血清miRNAlet-7a、let-7f的表达差异.结果肝癌癌变组织miRNAlet-7a[(0.18±0.04)×103]、miRNAlet-7f[(0.19±0.01)×103]分别较癌旁组织[(1.52±0.11)×103、(0.67±0.10)×103]低,差异有统计学意义(P<0.01);肝癌患者血清miRNAlet-7a[(0.22±0.06)×103]、miRNAlet-7f[(0.15±0.04)×103]较健康对照者[(1.13±0.21)×103、(0.62±0.12)×103]低,差异有统计学意义(P<0.01).结论miRNAlet-7a、miRNAlet-7f在肝癌患者病变组织及血清中异常偏低表达,可作为早期诊断肝癌的重要标志物,为临床诊断提供参考.
简介:摘要目的探讨血清miRNA-9-5p(miR-9-5p)、miRNA-21-5p(miR-21-5p)和miRNA-3923(miR-3923)对子宫颈癌的诊断价值。方法收集2016年7月至2018年6月山西省肿瘤医院收治的100例子宫颈癌患者(子宫颈癌组)和同期100名健康体检者(健康对照组)资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)结合探针杂交检测子宫颈癌患者石蜡包埋组织和健康对照者子宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA的表达水平,以Ct值≤40个循环为HPV E6/E7阳性。取3例子宫颈癌患者与3名健康对照者血清样本,采用微RNA(miRNA)Array检测384个miRNA基因表达量,并进行差异miRNA表达筛选及聚类分析,采用qRT-PCR对筛选的miRNA进行验证。绘制最终筛选的各miRNA及HPV E6/E7单独或联合诊断子宫颈癌的受试者工作特征(ROC)曲线,比较诊断子宫颈癌效能。结果100例子宫颈癌患者石蜡包埋组织中,HPV E6/E7阳性65例(65%);100名健康对照者子宫颈脱落细胞HPV E6/E7均为阴性。3例子宫颈癌患者与3名健康对照者血清样本中发现248个差异表达的miRNA,经聚类分析鉴定出前16个调控异常miRNA。经qRT-PCR验证,确认在健康对照组和子宫颈癌组中miR-9-5p、miR-21-5p和miR-3923表达水平差异均有统计学意义(均P<0.01),选取三者用于后续子宫颈癌的诊断。与健康对照组比较,HPV E6/E7阳性子宫颈癌组miR-9-5p、miR-21-5p和miR-3923表达水平均增高(均P<0.05),HPV E6/E7阴性子宫颈癌组miR-21-5p和miR-3923表达水平均增高(P=0.008和P=0.038);HPV E6/E7阳性组3个miRNA表达水平均高于HPV E6/E7阴性组(均P<0.05)。经ROC曲线分析,miR-9-5p、miR-21-5p和miR-3923单独诊断子宫颈癌时,miR-3923的曲线下面积(AUC)最大(0.843),特异度也最高(82%,截断值为2.88);miR-21-5p的灵敏度最高(85%,截断值为4.08);3个miRNA联合诊断子宫颈癌的AUC(0.924)和灵敏度、特异度(85%、94%,截断值为4.04)均高于单一指标。HPV E6/E7单独诊断的AUC为0.766,miR-9-5p、miR-21-5p、miR-3923分别联合HPV E6/E7的诊断效能进一步增高,AUC分别为0.914、0.848和0.932;四者联合的诊断效能最高,AUC为0.942。结论miR-9-5p、miR-21-5p和miR-3923可能有助于子宫颈癌诊断。
简介:摘要目的观察波依定治疗原发性高血压,患者服用波依定,以观察其降压效果及远期效果(心脑血管病变情况),如血压未达标,则病情依次加入利尿剂,血管紧张素转换酶抑制(ACEL)。血管紧张素Ⅱ受体拮抗(ARB)及β受体阻滞剂(BB)。结果治疗一年后显示波依定降压疗效显著,其不良反应除踝部水肿外未见其它不适。结论波依定治疗轻、中度原发性高血压有较强的降压作用,较少不良反应及较好的治疗依从性,值得基层医院参考使用。现报道如下
简介:摘要目的了解我院患者痰培养病原菌的种类及耐药性为临床上合理用药提供依据。方法收集我院2013年1月至2013年6月送检的痰标本182例,对培养出的46株致病菌进行耐药性分析结果在检出的46株病原菌中,革兰阴性杆菌33株,占71.7%;革兰阳性菌6株,占13.0%;真菌7株,占1