简介：目的：构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达。方法：应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码Uqcrfs1的cDNA,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定及测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,使用RT-PCR、WesternBlot方法检测重组质粒在转录及蛋白水平的表达。结果：测序结果证实PCR扩增得到编码Uqcrfs1的cDNA序列正确;磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,在基因转录与蛋白表达水平,结果达到预期。结论：成功构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒,该重组质粒可在HEK293T中过表达。

简介：TGF-β信号通路的改变发生于肾上皮细胞恶性转变的早期，并与TGF-β型受体（TβRⅢ）的缺失有关。为了研究TβRⅢ介导的肾透明细胞癌凋亡中的作用，通过构建腺病毒基因载体，在体外转染肾透明细胞癌使其重新表达TβRⅢ，并在裸鼠瘤内注射重组腺病毒来建立体内TβRⅢ高表达模型，

简介：目的探讨AID（活化诱导胞嘧啶核苷酸脱氨酶）在人体膀胱癌、癌旁组织中的表达情况以及AID对膀胱癌细胞株T24增殖、侵袭、迁移以及凋亡的影响。方法运用Westernbolt以及免疫组织化学染色法检测16例临床膀胱癌组织以及癌旁组织中AID的相对表达量；将携带有抑制AID表达的shRNA序列（shAICDA-T24组）或空载序列（NC-T24组）以慢病毒为载体对T24细胞进行感染，利用Westernbolt对T24、NC-T24以及shAICDA-T24组进行AID表达量的检测；因为转染后的多克隆细胞株AID的表达抑制效果有限，随后我们对转染的T24细胞进行单克隆细胞筛选，通过Westernbolt结果选取抑制效果最明显的组别用于后续试验；然后运用细胞增值试验（CCK8）、流式细胞术（凋亡）、细胞划痕实验以及细胞小室实验（Transwell）检测抑制AID的表达对T24细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。结果人体膀胱癌组织中存在AID的表达，并且膀胱癌组织中AID的表达显著高于癌旁组织（P〈0．05）；通过RNA干扰技术（RNAi）抑制AID的表达可显著降低膀胱癌细胞株T24的增殖、侵袭和迁移能力，并且增加了T24细胞的凋亡率（P〈0．05）。结论抑制AID的表达可显著降低T24细胞增殖、侵袭以及迁移能力，并且增加T24细胞的凋亡，其表达可能与膀胱癌的进展具有相关性。

简介：目的以Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌细胞系T24细胞，观察其对T24细胞侵袭能力的影响。方法Ad-Surp-LRIG1转染T24细胞，用RT-PCR和Westernblot检测细胞中LRIG1的表达水平，并采用Transwel!小室测定转染后细胞侵袭能力的变化。结果Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌T24细胞后，与对照组和空白对照组相比，体外侵袭实验显示实验组细胞的侵袭能力明显下降。LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高，而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低（P〈0．01）。结论Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1能够在T24细胞中有效表达，并显著抑制T24细胞的侵袭能力。

简介：目的观察加味附子理中汤对药物性急性肾损伤脾阳虚证患者血清胱抑素C（cystatinC,CysC）、T淋巴细胞亚群（CD3~＋、CD4~＋、CD8~＋）及血管性假血友病因子（vonWillebrandfactor,vWF）的影响。方法选择2013年6月至2015年6月广西中医药大学第一附属医院门诊或住院的药物性急性肾损伤患者92例,按随机数字表分为研究组和对照组,每组46例;治疗过程中经排除脱落、终止病例等,实际纳入研究病例78例,其中研究组44例,对照组34例。对照组予基础治疗（立即停用肾损害的药物,卧床休息,给予低盐、低脂及优质蛋白质饮食,预防感染,控制血压及对症治疗）的同时加用醋酸泼尼松片,研究组在对照组治疗基础上加用加味附子理中汤,2组疗程均为4周。另设健康体检者30名为健康对照组,予抽血行T淋巴细胞亚群、vWF检测。观察2组患者治疗前后肾功能、T淋巴细胞亚群及vWF因子的变化,同时将研究组、对照组患者治疗前T淋巴细胞亚群、vWF水平与健康组进行比较。结果研究组与对照组经治疗后肾功能均改善,血尿素氮、血肌酐、血清CysC水平较治疗前下降,差异均有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）,研究组治疗后肾功能改善较对照组明显（P〈0.01）;药物性急性肾损伤患者免疫功能较健康人群明显下降,而vWF水平较健康人群明显上升,差异有统计学意义（P〈0.01）;研究组患者治疗后CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋水平均上升,vWF水平明显下降,与治疗前比较,差异均有统计学意义（P均〈0.01）;对照组治疗前后免疫功能、vWF无明显变化,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论加味附子理中汤能改善药物性急性肾损伤患者肾功能,下调血清CysC水平,且能提高患者免疫功能及下调vWF水平。

简介：使用高危因素数目说明根治性前列腺切除治疗临床T3b/4前列腺癌患者的结果。瑞士、美国、意大利、德国和比利时5国6家机构协作,回顾性分析EMPaCT资料库临床T3b/4NXM0前列腺癌行扩大根治性前列腺切除＋盆腔淋巴结切除患者资料,辅助性/挽救性治疗按各机构要求进行。按规定间隔时间随访时行PSA测定,生化检查表明治疗失败或出现症状时行影像学检查。使用Cox单元和多元分析及Kaplan-Meier方法,分析其全组和亚组增加的不利高危因素（PSA〉20ng/ml,Gleason评分≥8）数目与临床无复发生存率、癌特异性生存率和总生存率是否相关。结果显示1988年至2011年,8家中心外科手术治疗临床T3b/4292例,平均随访时间102.8个月（中位时间92.2,SD±73.2）。研究群体中仅是临床T3b/4的患者占61.6%,临床T3b/4＋PSA〉20ng/ml者12.7%,临床T3b/4＋Gleason评分≥8者19.5%,同时具有3个高危因素者6.2%。单元和多元分析发现高危因素组合与临床无复发生存率、癌特异性生存率和总生存率明显相关（全部P值〈0.01）,单独临床T3b/4组10年临床无复发生存率（81.3%）明显高于＋PSA〉20ng/ml（72.8%）或＋Gleason评分≥8对照组（64.0%）,但这些亚组间癌特异性生存率无显著差异（80.1%-84.6%）,全部＋高危因素的组合均与恶化的结果相关,5年临床无复发生存率和癌特异性生存率分别为24.5%和59.0%。认为非常高危的前列腺癌表现有多种多样的组合,具有全部3项高危因素者其癌相关死亡风险最高。