简介：摘要我们提出一种新型的基于体外细胞株增殖抑制的药物筛选方法，该方法使用了绿色荧光蛋白(GFP)，既简单又省时可靠。我们的实验数据显示，使用绿色荧光蛋白的结果比MTT测定法更加一致可靠。我们的数据还证实了新的检测方法在细胞生长曲线的灵敏度和精度、抗癌药物的抑制作用、剂量反应。

简介：摘要目的探讨微小 RNA（microRNA，miRNA）在子宫内膜异位症（endometriosis，EMS）患者异位内膜组织中的表达特征。方法收集2018年4月至2019年10月期间于厦门大学附属第一医院妇产科就诊EMS 患者异位内膜组织和对照组在位内膜组织开展实验。利用Illumina平台的miRNA测序检测内膜组织中 miRNA的表达情况。通过生物信息学分析差异表达的miRNAs及其潜在靶基因在EMS发生、发展中的作用。结合文献挑选6个具有显著差异的miRNAs（miR-98-5p、let-7c-5p、miR-495-3p、miR-200b-3p、miR-200c-3p、miR-148b-3p），应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）进行验证，并在构建miRNA-基因调控网络后初步验证其潜在靶基因。结果测序结果显示，相比对照组，EMS患者异位内膜组织中有69个miRNAs出现差异表达（差异倍数>1.5，P<0.05），其中表达上调22个，表达下调47个。基因本体分析显示，差异表达的miRNAs所调控的靶基因在生物学过程中集中在与蛋白质修饰、发育调控、细胞代谢和形态结构等相关。KEGG pathway分析显示，靶基因富集于蛋白质功能、自噬、AGE-RAGE及MAPK信号通路中。qRT-PCR结果显示miR-98-5p、let-7c-5p、miR-200b-3p、miR-200c-3p的表达情况与测序结果一致。miRNA-基因共表达网络显示 miRNAs与所预测的靶基因间的相互关系。miRNAs潜在靶基因的qRT-PCR验证结果显示，miR-200b-3p、miR-200c-3p与ZEB2呈负相关，miR-98-5p与PGRMC1呈负相关，miR-98-5p、let-7c-5p与ADIPOR2呈正相关。结论miR-98-5p、let-7c-5p、miR-200b-3p和miR-200c-3p在EMS患者异位内膜组织中存在显著差异表达，可能参与EMS的发生、发展。

简介：摘要目的筛选与大鼠膝骨关节炎相关的差异代谢物及其代谢通路，为深入研究骨关节炎生物标志物提供线索。方法60只雄性SPF级SD大鼠按体质量（300 ~ 350 g）采用随机数字表法分为模型组和对照组，每组30只。实验周期分别为4、8和12周，每个周期每组10只大鼠。模型组大鼠左侧膝关节采用改良Hulth法行造模手术，5 d后，驱赶大鼠使之活动，每天30 min。实验期间，两组大鼠均饲喂普通固体饲料、自由饮用自来水。实验期满，采集大鼠膝关节和血液样本。采用苏木素-伊红（HE）染色观察膝关节组织病理学变化，超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱仪（UPLC-Q-TOF-MS）检测血清中小分子代谢物，并通过多元统计分析和数据库比对，筛选与骨关节炎相关的差异代谢物及其相关代谢通路。结果模型组大鼠膝关节软骨变薄，表层粗糙、缺损或剥脱，软骨细胞变性、坏死、缺失，病变随实验周期延长而加重。筛选出11个与骨关节炎相关的血清差异代谢物，分别为硒代半胱氨酸、6-羟褪黑素、γ-谷氨酰半胱氨酸、花生四烯酸、二氢神经鞘氨醇、白三烯A4、白三烯B4、11，12-环氧-二十碳三烯酸（11，12-EpETrE）、溶血磷脂酰胆碱、神经酰胺和N-花生四烯酰甘氨酸。其中，实验4周时筛选出9个，与对照组比较，模型组5个高表达，4个低表达；实验8周时筛选出8个，与对照组比较，模型组2个高表达，6个低表达；实验12周时筛选出8个，与对照组比较，模型组5个高表达，3个低表达。筛选出2条与骨关节炎密切相关的代谢通路，分别为鞘脂代谢通路和花生四烯酸代谢通路，其中，二氢神经鞘氨醇和神经酰胺归属到鞘脂代谢通路，花生四烯酸、白三烯A4和白三烯B4归属到花生四烯酸代谢通路。结论骨关节炎疾病进程可以影响血清代谢物谱的构成和水平。11个血清差异代谢物涉及鞘脂代谢通路和花生四烯酸代谢通路，与骨关节炎的发生发展相关。

简介：摘要目的筛选脑死亡供者(DBD)肝移植术后早期肝移植物功能不良(PEGF)相关分子标志物，并构建肝移植术后PEGF早期预测模型。方法基于美国基因表达数据库(GEO)GSE23649数据集中16例DBD供肝复灌2 h标本(8例发生PEGF，8例未发生PEGF)转录组数据，采用差异表达分析筛选PEGF相关基因；运用LASSO-Logistics回归筛选最佳建模基因集合构建风险评分模型，使用受试者工作特征曲线下面积(AUC)与Nomogram图评估模型预测效力及可视化；采用基因集富集分析(GSEA)探索PEGF相关生物学通路。结果本研究筛选出6个与DBD肝移植术后PEGF密切相关的关键基因，包括4个上调基因(HBB、PFDN5、RPS3A、RPS5)和2个下调基因(RPL22、FAM62B)。基于该6基因所构建的风险评分模型对DBD肝移植术后PEGF有良好的预测价值(AUC＝1，P＝0.000 8)。GSEA提示DBD肝移植术后PEGF可能与"血管内皮生长因子"、"自然杀伤细胞介导的细胞毒性"等通路相关(均P<0.05)。结论该模型将有助于DBD肝移植术后早期精准评估PEGF风险，且未来有望联合常温机械灌注用于术前供肝质量评估。

简介：摘要目的探讨超声造影成像特征在磁共振引导聚焦超声(magnetic resonance guided focused ultrasound, MRgFUS)治疗子宫肌瘤患者术前筛查中的作用。方法回顾性分析2018年1月至2021年3月于空军军医大学西京医院行MRgFUS治疗的子宫肌瘤患者28例(共32个病灶)的术前超声造影特征。评价病灶的二维灰阶超声成像的回声强度、超声造影成像灌注强度、灌注分布、造影剂进入模式、动脉期病灶内是否有迂曲走行的血管、环样灌注及灌注消退等7个指标与消融坏死范围的关系。结果术前二维灰阶超声显示68.75%(22/32)病灶呈低回声；术前超声造影检查显示81.25%(26/32)病灶呈等/低增强，65.63%(21/32)病灶灌注不均匀，68.75%(22/32)可见有迂曲走行的血管，71.88%(23/32)可见周边环状增强，75%(24/32)造影延迟相呈快退。以上6个指标对子宫肌瘤消融率≥50%有影响，差异有统计学意义(均P<0.05)。结论超声造影成像可评价子宫肌瘤内血流特征，为子宫肌瘤MRgFUS消融术前筛选提供重要信息。

简介：摘要目的利用基因芯片技术筛选脊柱结核患者椎间盘病灶组织中差异表达的环状RNA(circRNA)并分析其在脊柱结核发生发展中可能的分子作用机制。方法选取2019年1月至2020年12月就诊于宁夏医科大学总医院脊柱骨科手术治疗的脊柱结核患者3例作为实验组，腰椎间盘退变手术治疗的患者3例作为对照组，收集术中切除的间盘组织，利用Arraystar Human circRNA Array V2芯片检测并采用独立样本t检验进行数据分析筛选出两组差异表达的circRNA；用生物信息学软件预测差异circRNA可能靶向作用的微小RNA(miRNA)；对差异表达的circRNA分子的亲本基因进行基因本体(GO)生物学过程富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果脊柱结核患者的间盘病灶组织中差异表达的circRNA(差异倍数>2，P<0.05)共有1 396条，其中有757种表达上调，639种表达下调；hsa_circ_0031968、hsa_circ_0001806、hsa_circ_0077607、hsa_circ_0071312、hsa_circ_0062683表达显著上调；hsa_circ_0004183、hsa_circ_0000367、hsa_circ_0000691、hsa_circ_0006220、hsa_circ_0043278表达显著下调；对所有差异表达的circRNA的亲本基因进行GO分析发现其主要参与细胞蛋白分解代谢、三磷酸鸟苷(GTP)酶结合、组蛋白修饰、转录因子结合、蛋白激酶激活等过程；经KEGG通路分析发现其主要富集在内质网中的蛋白质加工、细胞凋亡、蛋白水解、环鸟苷酸-蛋白激酶G、腺苷酸活化蛋白激酶、EB病毒感染等信号通路。结论脊柱结核患者椎间盘病灶组织中差异表达的circRNA可能与脊柱结核的发生和发展密切相关。

简介：摘要术后放疗引起的心脏不良反应可增加乳腺癌患者特别是左乳腺癌患者心血管不良事件的发生风险，增加的风险与心脏受照射剂量成正比。深吸气屏气（DIBH）技术已被证明能明显降低左乳腺癌患者的心脏剂量，但不同患者从该技术获益程度差异较大，且该技术的实施需要额外的设备、时间及人力等，所以需要提前筛选出适用该技术的患者。本文全面分析了影响DIBH筛选的定位前一般因素，侧重于系统性总结了CT模拟定位图像相关指标，即CT模拟定位时测量心脏接触距离（CCDps）、心胸距离（HCD）、最大心脏宽度（HWmax）和最大心脏深度（HDmax）的乘积，及CT模拟定位后测量最大心脏距离、照射野内心脏体积（HVIF）及自由呼吸（FB）与DIBH状态下肺体积差值及心脏体积差值等解剖学指标。这些指标对评估以切线野为主放疗计划是否采用DIBH技术有指导意义。治疗计划系统中快速计划（RP）功能可快速预测DIBH获益程度。本文旨在帮助临床医生筛选出适合采用DIBH技术的患者，使DIBH技术资源能够被合理利用。

简介：摘要目的采用分子对接技术从天然产物中筛选PPARγ激动剂。方法研究时间为2021年1月至9月。基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的PDB晶型结构（PDB Code：6md4），构建虚拟靶标模型，以天然产物数据库中的1 680个化合物为配体筛选对象，以6md4原配体分子为对照。首先采用SYBYL软件对天然小分子化合物进行虚拟筛选，随后对排名前20位的化合物进行高精度分子对接，最后再使用PyMol软件分析结合稳定的化合物。结果根据评分结果并结合冲突、极性和相似度，最终筛选出橙皮苷等20个小分子PPARγ激动剂，其中橙皮苷能够与PPARγSer289、His323、Tyr327等多个氨基酸形成氢键，结合良好。结论从天然产物中筛选出潜在的PPARγ激动剂，为发现新型抗糖尿病的先导化合物或膳食补充剂提供基础。

简介：无

简介：摘要目的筛选消化系统肿瘤患者围术期神经认知障碍(PND)潜在致病基因。方法采用生物信息学分析方法技术分析肿瘤基因组图谱数据库中食管癌、胃癌、结肠癌、直肠癌和肝癌的基因表达数据，筛选上述疾病样本中肿瘤组织相对于癌旁正常组织的差异表达基因，并通过与人类分泌蛋白组基因比对，获得消化系统肿瘤中表达趋势一致的分泌蛋白组差异基因。通过与GeneCards数据库对比，确定上述差异基因与PND致病的相关性程度；通过PPI网络构建和计算，筛选核心基因；通过GO和KEGG富集分析，明确上述差异基因的功能和所在信号通路。结果与癌旁组织相比，食管癌组织中2 640个基因表达上调，1 423个基因表达下调；胃癌组织中3 748个基因表达上调，908个基因表达下调；结肠癌组织中2 684个基因表达上调，2 678个基因表达下调；直肠癌组织中2 876个基因表达上调，2 945个基因表达下调；肝癌组织中1 484个基因表达上调，723个基因表达下调；其中，53种分泌蛋白的编码基因在上述肿瘤中一致上调，20种分泌蛋白的编码基因在上述肿瘤中一致下调；20个上调基因和3个下调基因与PND相关。PPI网络分析表明，MMP9等是核心基因；GO和KEGG分析结果提示，差异表达基因主要与受体-配体活性、细胞因子活性和趋化因子活性相关，主要富集于与细胞周期、细胞老化等相关的信号通路。结论消化系统肿瘤中差异表达的基因中约有23个与PND潜在相关，其中MMP9等可能是核心基因，主要作用于受体-配体结合、细胞因子和趋化因子活性调节过程和细胞周期/细胞老化等相关信号通路。

简介：6ml/瓶）、药物含量、转染前细胞状态以及药物作用时间的长短等因素进行模型稳定性研究,转染后细胞接种到24孔板的浓度对药物抑制作用的影响确定了两种转染质粒的配比及转染过程中NCS含量关系,HIV-1Tat蛋白结合Tar的抗HIV-1药物筛选模型的构建经以上实验建立方法后

简介：摘要目的采用基因表达汇编（GEO）数据库中转录组数据筛选和分析滤泡性淋巴瘤的关键基因。方法通过GEO数据库收集转录组数据集GSE32018和GSE55267。使用R软件行差异分析，筛选差异表达基因，FunRich 3.13软件分析共同差异基因，Cytoscape 3.7.2软件进行滤泡性淋巴瘤相关生物过程和通路分析，筛选与滤泡性淋巴瘤相关的潜在基因，通过分析Oncomine数据库的临床数据进行生存分析，验证所筛选的差异基因。结果通过对GSE32018和GSE55267数据集的差异分析，确定141个上调基因和199个下调基因，其中筛选出12个关键基因，即CXCL8、KRT19、CYCS、CDKN3、SFN、RRM2、FN1、APOE、CXCL12、VWF、GATA3、TIMP1，其中CYCS、CXCL8和CXCL12与患者早期生存率的关联最为明显。CXCL12过表达和CYCS低表达与患者不良预后相关；CXCL8在淋巴瘤组织中表达下降，但生存分析中其相对高表达患者出现总生存期缩短的现象，可能与滤泡性淋巴瘤早期发展相关。筛选出GO、KEGG及Reactome通路，分别为GO：0001892、KEGG：04115、R-HSA：2559582、GO：0060968、R-HSA：6785807、GO：0043627、GO：0001936、GO：0043062。结论筛选出的基因CYCS、CXCL8和CXCL12可能为滤泡性淋巴瘤的治疗研究提供更有效的生物标志物。

简介：目的建立表面活性剂眼刺激性测试的体外细胞方法分层筛选模型。方法应用中性红摄取试验（NRU）、红细胞溶血试验（RBCH）及荧光素漏出试验（FLT）3种体外细胞方法对20种表面活性剂的眼刺激性进行检测,将检测结果代入4种分层筛选模型（FLT＋NRU、FLT＋RBCH、RBCH＋NRU、NRU＋RBCH）,所得到的分级结果与Draize试验结果进行比较（指标为Gamma系数、McNemar-Bowker系数、Kappa系数和分级一致率）,以此来评价4种分层筛选模型对表面活性剂的检测效能。结果本研究建立的4种分层筛选模型（FLT＋NRU、FLT＋RBCH、RBCH＋NRU、NRU＋RBCH）与Draize试验分级结果进行比较,分级一致率分别为90.0%、80.0%、80.0%、65.0%,Kappa值分别为0.84、0.68、0.69、0.47（均P〈0.01）,Gamma值分别为1.00、1.00、0.93、0.88（均P〈0.01）。结论以FLT（第1层）和NRU（第2层）组成的分层筛选模型较其他3种模型具有较好的检测效能,更适合应用于对表面活性剂的眼刺激性检测。

简介：目的该研究旨在利用噬菌体展示技术，构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库，搭建人源性抗体制备的技术平台，解决鼠源性单克隆抗体临床应用的不足，为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径。方法从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA，并逆转录为cDNA。用PCR扩增轻链和重链Fd段（即重链的可变区和第一恒定区）基因，并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体，电转化XL1-Blue大肠杆菌，经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体库。对此抗体库双酶切进行鉴定，并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选。结果经过重轻链基因的重组，成功构建一免疫噬菌体抗体基因库，共有2．08×10^7个不同的克隆菌，其中70％的克隆均含有轻链和重链Fd基因。因此，所构建的噬菌体抗体库的库容量为1．46×10^7，经过滴定，原始抗体库的滴度为1．06×10^12pfu／mL。经初步筛选，抗体库得到了不同程度的富集。结论利用基因重组技术和噬菌体展示技术，成功构建了小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性Fab噬菌体抗体库，为人源性单克隆抗体的制备提供了良好的条件，为进一步的研究奠定了基础，亦将有益于小儿呼吸道合胞病毒感染的诊断、治疗和预防。

简介：

简介：摘要目的基于妊娠期高血压和蛋白尿发生的报道寻找预测妊娠期高血压疾病（HDP）的循环补体相关蛋白，探讨补体系统在HDP发生发展中的作用。方法采用巢式病例对照研究，收集2014年11月至2017年3月于广州市妇女儿童医疗中心产检并分娩的孕妇孕20周前血清，共纳入60例HDP和60例正常孕妇，按年龄和孕周1∶1配对。采用非标记蛋白质谱方法筛选12对血清标本中差异表达的补体蛋白，余48对用于初步验证。当差异倍数（FC）>1.2或<0.8，且P<0.05时入选。用受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）评价相应因子的预测价值。结果高血压孕妇血清补体C1亚单位（C1s）、C8 beta链（C8β）、C1抑制剂（C1-INH）的FC分别为1.19、1.23、0.73（t=2.07，2.06，-3.40；P均<0.05）；子痫前期（PE）孕妇C1s、C8β、C1-INH、H因子相关蛋白5（CFHR5）、丛生蛋白（CLU）、C反应蛋白（CRP）的FC分别为1.39、1.50、0.72、2.49、4.38和1.82（t=4.36，5.61，-3.70，6.82，8.70，7.27；P均<0.05）。C1s、C8β和C1-INH联合对HDP的AUC值为0.89。CFHR5、CLU和CRP对PE的AUC值分别为0.88、0.92和0.91。结论HDP发生前，孕妇体内已出现补体经典途径和旁路途径的激活及调节紊乱。补体C1s、C8β、C1-INH联合检测有望用于HDP的预测，CFHR5、CLU、CRP可能是肾脏损伤性HDP的潜在预测分子标志。

简介：目的建立高效液相色谱串联质谱同时测定保健品和中成药中违禁添加的7种抗高血压药物利血平，氢氯噻嗪、米诺地尔、卡托普利、哌唑嗪、尼卡地平、奈诺普利的检测方法。方法样品用80％甲醇提取，采用ZorbaxSBC18分析柱（3．5μm，2．1mm×150mm），以保留时间和质谱二级特征离子作为定性依据。结果在建立的色谱、质谱条件下，7种抗高血压药物的加标回收率为80．5％～101．0％。对样品6次测定的RSD为2．7％～7．9％。结论该法灵敏度高，结果准确可靠，可用于保健品和中成药中掺杂该7种成分抗高血压药的快速鉴定。

简介：摘要目的筛选Toll样受体2(Toll-like receptor 2, TLR2)通路下游与辐射防护调控相关的关键miRNA，并探讨miR-21功能。方法以60Co γ射线对野生型(wild type, WT)、TLR2 KO小鼠分别进行6.0、7.0、8.0 Gy全身照射，观察小鼠生存情况；通过转录组测序筛选骨髓细胞内TLR2通路下游关键miRNA，并通过QT-PCR验证其表达。过表达/敲低该miRNA后检测其生物学功能。结果6.0、7.0、8.0 Gy全身照射后，TLR2 KO小鼠较WT小鼠辐射敏感性增加(χ2＝4.490、13.100、7.928，P<0.05)，骨髓移植实验证明TLR2 KO小鼠辐射敏感性增加与照射后骨髓细胞损伤有关(χ2＝4.291，P<0.05)。转录组测序筛选到差异基因55个([log2 Fold Change]>0.95，Q<0.05)，其中上调基因28个，下调基因27个；定量PCR实验确定TLR2 KO(t＝9.420，P<0.01)与MyD88 KO(t＝10.700，P<0.01)小鼠骨髓细胞内miR-21表达下调。PAM3CSK4刺激后小鼠骨髓细胞内白介素6(IL-6)(t＝13.790，P<0.05)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)(t＝14.280，P<0.05)表达量上调且依赖于TLR2。miR-21过表达可以促进EL4(t＝5.951，P<0.05)和NIH/3T3(t＝4.786，P<0.05)辐射后细胞活力，抑制WT小鼠(t＝4.842，P<0.05)和TLR2 KO小鼠(t＝10.520，P<0.05)BMCs辐射后细胞凋亡。miR-21敲低后降低EL4(t＝4.815，P<0.05)和NIH/3T3(t＝4.042，P<0.05)辐射后细胞活力。结论miR-21在TLR2辐射防护进程中具有关键调控作用，其作用机制可能与上调IL-6与TNF-α有关。

简介：6ml/瓶）、药物含量、转染前细胞状态以及药物作用时间的长短等因素进行模型稳定性研究,转染后细胞接种到24孔板的浓度对药物抑制作用的影响确定了两种转染质粒的配比及转染过程中NCS含量关系,HIV-1Tat蛋白结合Tar的抗HIV-1药物筛选模型的构建经以上实验建立方法后

简介：摘要目的探讨海德堡视网膜断层扫描仪（Herdebergretinatomography，HRT）在民航航空人员眼科体检中的应用价值。方法选择民航医学中心眼科体检中疑似青光眼飞行员22例（44眼）纳入疑似青光眼组，同时纳入同期正常对照飞行员28例（56眼）为正常对照组；所选飞行员均通过直接检眼镜测量杯盘比，并均进行HRT检查；比较两组飞行员视乳头形态结构参数，并观察其与杯盘比之间的关系。结果疑似青光眼组的视盘、视杯面积，杯/盘面积比，视杯容积及合并平均视杯深度、最大视杯深度均明显大于正常对照组，盘沿面积和平均视网膜神经纤维层厚度及视网膜神经纤维层截面面积均显著小于正常对照组，差异具有统计学差异（P＜0.05）；经HRT检查，疑似青光眼组飞行员杯盘比明显大于正常对照组飞行员，且杯盘比越大，HRT所得视乳头形态结构参数异常率越大。结论HRT检查重复性好，对筛选早期开角型青光眼有重要参考意义，应用于民航飞行员眼科体检有利于提高诊断的准确性。