简介:目的利用逆病毒表达载体快速构建梯度过表达人MTA1稳转单克隆细胞系。方法利用噬菌斑原位杂交筛选人肺噬菌体文库,以阳性克隆为模板,RT-PCR获得人MTA1完整CDS序列。以逆病毒表达载体pMX为基础,经过多次酶切连接,构建逆病毒表达载体pMX—MTA1-flag—IRES—EGFP。将构建好的逆病毒载体系统,转染293-gag/pol细胞,包装出含该表达载体的逆病毒颗粒。以含病毒上清多次感染HCT116细胞,获得稳定转染MTA1的HCT116多克隆细胞系。将该多克隆细胞系按合适比例稀释后接种至10cm大皿,获得大量单克隆细胞系,以GFP为筛选标志,筛选不同荧光强度的单细胞克隆进行扩增并分析MTA1与GFP表达水平的线性关系。结果测序结果显示成功克隆出人MTA1表达序列。免疫荧光、WesternBlot结果证实成功构建出梯度过表达MTA1的稳转细胞系。相关性验证结果显示构建的非融合载体MTA1与GFP的表达呈明显的线性相关,相关系数r=0.932,P〈0.01。结论利用逆病毒表达系统,快速成功构建并筛选出MTA1与GFP非融合梯度过表达稳转单克隆细胞系,为MTA1基因功能研究提供了良好模型。该逆转录病毒平台可用于快速建立其他基因的稳转单克隆细胞系。
简介:肺癌是目前世界上最常见的男性恶性肿瘤。肺癌中约80%为非小细胞肺癌(non—smallcelllungcancer,NSCLC)。NSCLC对化疗或放疗效果不佳,手术是惟一可以治愈的方法,但只有30%NSCLC患者有机会手术切除。50%NSCLC患者5年内肿瘤转移。尽管新的化疗药物不断涌现(如含铂类的化疗方案),但无手术机会的晚期NSCLC预后仍然很差。最近,东方肿瘤协作组(EastemCooperativeOncologyGroup,ECOG)对1155位NSCLC患者的临床研究,将标准的顺铂/紫杉醇化疗方案与其他三种含铂类的化疗方案的疗效进行了比较,发现总体有效率为19%,中位生存期仅8个月,1年存活率33%,2年存活率11%。几种化疗方案之间没有显著性差异。顺铂/紫杉醇方案组疾病平均进展时间为3.4个月,顺铂/吉西他滨方案组优于其他组,为4.2个月。因此,对于NSCLC的治疗迫切需要新的方案。
简介:目的探究TXNIP的基因多态性和启动子区甲基化CpG岛、转录因子结合位点。方法利用生物信息学在线软件获得TXNIP基因3′UTR多态性和mRNA的表达情况;利用相关软件获得TXNIP启动子区序列,预测甲基化CpG岛及转录因子结合部位。结果TXNIP基因3′UTR多态性位点rs7211、rs7212和rs4755的不同基因型与mRNA表达差异有统计学意义(P〈0.05);启动子区序列中甲基化CpG岛位于1763—1943bp处。结论利用生物信息学分析可以更有效地了解基因多态性和启动子区在基因表达调控中的作用。