简介：目的：构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶（S6K）的体外活性测定。方法：采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定。结果：酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103。该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强。结论：S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础。

简介：对四个单位保种的S180细胞经KM小鼠腹腔传代，体外培养加秋水仙碱，涂片、染色后，显微镜下计数染色体数目：腹水传代的S180细胞．用70％乙醇固定，流式细胞仪测DNA含量。结果如下：本学部(本部)，中国医学科学院药物所(药物所)，武汉大学保种中心(武汉大学)和北京市肿瘤所(肿瘤所)保种的S180细胞株，其染色体均数分别为628±22．8，69．1±21．2，39．9±8．26，58．7±9.75条。四单位S180细胞株染色体数做方差分析表明，除肿瘤所与本部外，其它两单位比较均有显著统计学差异(P<0．01)。直方图分析显示主流染色体范围分别为56～60，61～65，41～45，61～65条。流式细胞术DNA含量分析表明肿瘤所S180DNA含量最多，武汉大学保种的S180细胞的DNA含量最少。这些结果均证明四个单位的S180细胞株在一些方面已出现显著差异。

简介：用定序技术的16SrDNA基因，entomopatho遗传因子的线虫(杀虫剂的一种)的非共生的细菌的三不同的种(Steinernemasp。并且Heterorhabditissp)从感染的昆虫死尸被孤立并且识别{街郎mellonella幼虫)在48小时的柱子感染以后。顺序类似分析表明紧张SRK3，SRK4和SRK5分别地属于Ochrobactrumcytisi，Schineria幼虫和Ochrobactrumanthropi。isolatesO。anthropi和S。幼虫被发现分别地，而，与Heterorhabditisindica紧张BDU-17和Yer-136被联系O。cytisi与Steinernemasiamkayai紧张BDU-87被联系。Phenotypically，时间的杀虫剂的一种细菌是相当与共生杀虫剂的一种细菌(Photorhabdus和Xenorhabdus类)有关。紧张SRK3和SRK5phylogeographically类似于几非共生者并且污染了在德国(LMG3311T)和中国(X-14)孤立的杀虫剂的一种细菌，当紧张SRK4与S的isolates相同时。从在匈牙利的Wohlfahrtiamagnifica的幼虫(Ll/57，Ll/58，Ll/68和L2/11)。结果被RNA第二等的结构和排列序列的最小的精力计算进一步证实。这研究建议这些线虫的非共生者phylogeographically由于阶段变化在某程度被分叉。因此，这些紧张不是主人依赖者，但是环境特定孤立。

简介：目的：探讨灵芝多糖成分（GLP）抑制肿瘤的作用机制。方法：在小鼠右腋皮下接种1×106TC-1细胞后7天后,用100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg3种剂量给小鼠口服灌胃给药20天,然后观察肿瘤的重量,并用ELISA检测小鼠血清中IL-2、IL-6和TNF-alpha,用流式细胞仪检测其外周血中CD4＋和CD8＋。结果：100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg3种剂量给小鼠口服灌胃给药20天,与对照组比较,抑瘤率分别可以达到53%、59%和58%,P〈0.05;小鼠外周血血清中的IL-2从1.27ng/mL提高到了2.88ng/mL,P〈0.05;TNF-α从1.05ng/mL提高到了1.82ng/mL,P〈0.05;而IL-6则没有明显的变化。CD4＋细胞水平升高（从54.80%提高到了58.27%）,但差异无统计学意义（P〉0.05）;CD8＋细胞明显增多（从24.15%提高到了45.36%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：GLP有明显抑瘤作用,但抑瘤作用与GLP剂量不存在依赖关系。GLP对肿瘤细胞生长的抑制是通过提高小鼠的细胞免疫能力来实现,而并非直接杀伤肿瘤细胞。

简介：【背景】米尔顿姬小蜂是一种入侵我国台湾地区的植食性小蜂,能够严重影响水果的产量和食用价值。目前在我国大陆没有分布,由于其个体微小,与近似种区别较小,通过传统的形态学分类方法难以鉴定,因此有必要研究其基因片段序列,探讨分子鉴定方法。【方法】利用PCR方法扩增并测定了米尔顿姬小蜂线粒体16SrRNA和COⅠ基因的部分序列,并对各序列的碱基组成进行了分析。然后根据COⅠ基因部分序列,利用DNAMAN的MaximumLikelihood方法构建了米尔顿姬小蜂与膜翅目其他科的系统发育树。【结果】16SrRNA基因的PCR扩增产物为426bp,COⅠ基因的PCR扩增产物为488bp。通过测序获得米尔顿姬小蜂16SrRNA和COⅠ基因部分序列,序列分析表明,16SrRNA和COⅠ基因的A+T含量均较高,存在较强的A+T偏向性。系统发育树显示,米尔顿姬小蜂与蚜小蜂科的Encarsiaberlesei亲缘关系最近,与姬小蜂科的Chrysocharisnautius、C.eurynota亲缘关系较远。【结论与意义】本研究为米尔顿姬小蜂的分子鉴定提供了依据。

简介：

简介：目的：分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶（SRK13-b）基因并进行序列及结构域分析，构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化。方法：提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA，用RT-PCR法分离SRK13-b基因；将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中，构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT，转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS菌株，经0．1mmol／LIPTG诱导，用Ni—NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化。结果：分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571bp，编码856个氨基酸，GenBank收录号为EU180597；对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化，SDS—PAGE显示相对分子质量约43×10^3的蛋白质特异表达，对表达产物进行分离纯化，获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白。结论：羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达，为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础。

简介：目的：构建一个牛dSl酪蛋白调控序列指导人溶菌酶（hLYZ）基因组序列的杂合基因座。方法：采用本实验室发明的连续3步缺口修复技术。将6个无痕连接的同源臂插入以pBR322为载体的骨架中，构成能进行3次连续基因抓捕的载体，利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术，分别抓捕牛aSl酪蛋白3’端调控序列（9kb）、hLYZ基因座序列（5kb）、牛axSl酪蛋白5’端调控序列（20kb），使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上，形成牛oLSl酪蛋白一hLYZ杂合基因座。结果：实验经过PCR扩增、限制性内切酶酶切验证和序列测定，验证了hLYZ的基因组序列对牛仪S1酪蛋白编码基因组序列的精确置换。结论：这种修复技术为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了可行的思路及方法。

简介：为了阐明水稻光温敏不育系幼穗分化期耐冷的形态生理机制,以耐冷不育系Y58S和4个生产上常用光温敏不育系为试验材料,研究了低温胁迫（17.5℃,10d）下结实率、穗部形态、株高、光合特性以及抗氧化物酶系统等的变化。结果表明,低温胁迫下Y58S的幼穗分化期耐冷性在5个不育系中最强,与敏感的C815S和株1S相比,Y58S表现为株高和穗长降低幅度较小,保持较高结实率;光合作用受低温影响不显著,SPAD值、光合速率等光合指标无显著变化;SOD、POD活性降低幅度较小,MDA含量、相对电导率增幅较小。

简介：乙肝病毒前S1抗原含多个免疫优势表位及乙肝病毒肝细胞受体结合位点,具有重要的生物学功能.为使其高效、可溶性表达,在DnaStar软件辅助分析下,将前S1基因5′端复杂二级结构突变后,克隆入原核表达载体pQE-30a,转化大肠杆菌M15感受态细胞,经IPTG诱导后,获得了高水平、可溶性表达;并对其进行了纯化和鉴定,为进一步研究乙肝病毒前S1抗原的结构功能特点奠定了基础.

简介：

简介：死亡联系域的蛋白质Daxx施加包括调停的许多报导功能经由激活c6月N终端从FasL发信号到apoptosisapoptosis的kinase(JNK)，正式就职和抑制，和染色质改变的规定。它原来从酵母被克隆用船边交货对相似物体之连续感觉而形成心像口的细胞内部的尾巴的二混血儿的屏幕诱饵。而许多起始的报告仍然保持争论，Daxx在一系列压力信号包括UVirradiation，过氧化氢治疗和TGF-β治疗触发的apoptosis的规定起重要作用，是清楚的。在这评论，我们在Axinbeing上集中连接Daxx到p53的一个拴住的因素。

简介：CCAAT/enhancer有约束力的蛋白质α(C/EBPα)是transcriptional禁止细胞增殖的规章的因素，和其他的翻译开始生产二多肽，C/EBPαp30并且C/EBPαp42。由表示介绍，C/EBPαp30specifically禁止了基因的一个唯一的集合，这被揭示，包括MPP11，p84N5和SMYD2，它没被C/EBPαp影响42在两根QSG-7701hepatocyte房间线和QGY-7703hepatoma，cells.Semi量的RT-PCR分析独立地证实了这些结果。Chromatinimmunoprecipitation试金显示出30比C/EBPαp更强烈绑了在这些基因的倡导者的那C/EBPαp42。在C/EBPα是调整的down的临床的hepatoma在样品，所有三基因明确地由30在上面的C/EBPαp禁止了调整。然而，MPP11，p84N5和SMYD2genes的压抑可能直接不涉及C/EBPαp30-mediated生长抑制。我们的数据建议30调整的那C/EBPαp目标基因的一个唯一的集合并且多于C/EBPαp的dominant-negativeregulator42。

简介：目的：探讨RAGE及其配体S100B在实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）中对T细胞的作用及其相关机制。方法：选取体重160-180g的Lewis大鼠,并将其随机分为EAMG模型组和CFA对照组。EAMG模型组大鼠通过尾根部注入200μL含有R-AChR97-116肽段的免疫乳剂,并于初始免疫后的第30天尾根部追加免疫一次;CFA对照组大鼠为免疫乳剂中不含有R-AChR97-116肽段。采用流式细胞术检测和比较两组大鼠CD4＋T细胞上RAGE的表达情况;ELISA方法检测淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β、IL-6和S100B的表达水平;采用S100B体外干预淋巴细胞,进一步检测S100B对EAMG大鼠T细胞增殖、亚型分布、细胞因子分泌的影响。结果：在疾病发生的晚期时相（初次免疫后第45天）,EAMG组淋巴细胞CD4＋T细胞上RAGE的表达明显高于CFA组（P〈0.001）,血清中RAGE的配体S100B的表达也高于CFA组（P〈0.001）;体外加入S100B干预能促进T淋巴细胞的增殖,与未干预组相比较差异显著（P〈0.05）;S100B刺激后,Th1细胞和Th17细胞的百分比进一步增高,Th2细胞和Treg细胞百分比下降（PTh1〈0.05,PTh17〈0.05,PTh2〉0.05,PTreg〈0.05）,IFN-γ和IL-17的表达上调（PIFN-γ〈0.05,PIL-17〈0.05）,而IL-4和TGF-β表达下降（PTGF-β〈0.01,PIL-4〉0.05）,Th17细胞的调控因子IL-6表达升高（PIL-6〈0.05）。结论：RAGE及其配体S100B参与EAMG的发病过程,在晚期时相中表现出明显的致病性;RAGE与S100B相互作用可以上调T细胞的致病性作用,加重四种辅助性T细胞之间的网络失衡。

简介：【背景】烟粉虱作为世界性的多食性害虫，对我国农业生产造成了严重危害。已有研究表明，许多植物的次级代谢产物能够对烟粉虱解毒酶和靶标酶活性产生影响。【方法】采用常规生化方法研究了辣椒碱对烟粉虱体内羧酸酯酶（CarE）、谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活性的影响。【结果】与对照相比，500mg·L^-1辣椒碱处理烟粉虱成虫后6h，CarE活性被激活，其他时段被抑制；1000mg·L^-1辣椒碱处理后6、12、48h，CarE活性受到抑制，其他时段被激活；2000mg·L^-1辣椒碱处理后6h，CarE活性受到抑制，其他时段被激活；d000mg·L^-1辣椒碱处理后3、12h，CarE活性受到抑制，其他时段被激活；8000mg·L^-1辣椒碱处理后1h，CarE活性被激活，其他时段受到抑制。辣椒碱对烟粉虱体内GSTs活性的诱导存在剂量和时间效应，8000mg·L^-1辣椒碱处理烟粉虱成虫后24和48h，GSTs活性受到明显抑制，其余各处理在任何时段GSTs活性均被激活而高于对照。辣椒碱各浓度处理对烟粉虱体内AChE活性的诱导存在时间效应，各处理均在处理后48h对AChE活性产生了抑制作用。【结论与意义】辣椒碱对烟粉虱体内的解毒酶CarE和GSTs、靶标酶AChE活性具有明显影响，且存在剂量或时间效应，这可为辣椒碱在生物农药领域的应用提供理论依据。

简介：目的：探讨经椎旁肌间隙入路治疗胸腰椎骨折的临床疗效及对Cobb’S角与椎体功能的影响。方法：选择2013年8月至2015年8月我院接诊的94例胸腰椎骨折患者，通过随机数表法分为观察组（n=47）和对照组（n=47），观察组使用经椎旁肌间隙入路椎弓根螺钉内固定术，对照组使用传统开放式置入椎弓根螺钉内固定术。比较两组围术期情况及术前术后视觉模拟评分法（VAS）、下腰痛功能障碍指数（ODD、Cobb’S角和椎体前缘高度的变化。结果：观察组切口长度、手术时间、住院时间、卧床时间均明显短于对照组，术中出血量明显少于对照组（P〈0．05）；两组手术前VAS评分、ODI评分、Cobb’S角、椎体前缘高度比较差异均无统计学意义（P〉0．05），手术后7d、1个月时VAS评分、ODI评分均较治疗前显著降低（P〈0．05），手术后1个月、1年时Cobb’S角、椎体前缘高度均显著改善（P〈0．05），且观察组手术后7d、1个月时VAS评分、ODI评分均明显低于对照组（P〈O．05），手术后1个月时Cobb’s角、椎体前缘高度均优于对照组（P〈0．05），但两组手术后1年时Cobb’S角、椎体前缘高度比较无显著差异（P〉O．05）。结论：在胸腰椎骨折患者中应用经椎旁肌间隙入路椎弓根螺钉内固定术效果显著，其具有创伤小、手术时间短、出血量少、术后椎体功能恢复快等优点。

简介：应用DNA聚合酶链式反应(PCR)技术,对p16抑癌基因(CDKN2)进行体外定点突变,在p16cDNA中引入第48位密码子CCG(Pro)→CTG(Leu)和第74位密码子GAC(Asp)→AAC(Asn)突变,构建了p16-P48L和p16-D74N突变体。野生型和突变型p16cDNA克隆于pcDNA3构建pCMV-p16、pCMV-p16P48L和pCMV-p16D74N真核表达载体,导入纯合缺失p16基因的人肺癌细胞株H460,经RNA点杂交、RNA印迹和细胞免疫化学染色,检测到P16表达。通过比较表达野生型和突变型P16的H460细胞在~3H-TdR掺入及细胞所在周期的差异,证实P16表达抑制细胞进入S期,而P48L和D74N突变体对细胞进入S期没有什么影响,提示P48L和D74N突变导致P16蛋白功能丧失。

简介：在Saccharomycescerevisiae，必要基因CDC13编码telomeric遗传上并且身体上与Stn1p和Ten1p交往的搁浅单人赛的DNA有约束力的蛋白质，并且为telomere结束保护和telomere长度控制被要求。Ten1由参予telomere长度规定和染色体结束保护的分子的机制留下逃犯。在这个工作，我们用净化的recombinantCdc13p和Ten1p在胶化过滤分析观察了Cdc13p和Ten1p的一个弱相互作用。Ten1p本身展出一项弱DNA有约束力的活动，但是提高telomericTG1鈥吗？Cdc13p的DNA有约束力的能力。Cdc13p是有Ten1p的co-immunoprecipitated。在变异的ten1-55或ten1-66房间，在Ten1p和Cdc13p之间的损害相互作用与telomericDNA导致长得多的telomeres，以及Cdc13p的一个减少的协会。一致地，Ten1-55和Ten1-66异种蛋白质没能刺激telomeric在vitro的Cdc13p的DNA有约束力的活动。这些结果建议Ten1p提高telomericCdc13p到的DNA有约束力的活动否定地调整telomere长度。

简介：1.ContactInformationGreatPlainsDiagnosticNetwork,DepartmentofPlantPathology4024ThrockmortonPlantSciencesCenterKansasStateUniversity,Manhattan,Kansas66506USAPhone:+01-785-5321388E-mail:jstack@ksu.edu2.PresentRanksProfessor,KansasStateUniversity

简介：TheundecapeptidesubstanceP(SP)wasshowntobeintimatelyinvolvedinboththestructuralandfunctionalaspectsoftheanteriorpituitary.Yet,inadditiontoitsinfluencesonhormonalsecretion,SPmaywellpossessmoreactionsinthismastergland.ThepresentstudywasfthereforeaimedtoinvestigatetheeffectofSPontheproliferationofratanteriorpituitarycellsinprimaryculture,ItwasfoundthatSPcoulddose-dependentlyincreasetheincorporationoftritiatedthymidine(3H-TdR)intoculturedanteriorpituitarycells.OthermammaliantachykininssuchasneurokininAandneurokininBhadsimilareffectbuttovaryingdegrees.TheequipotentanalogueofSP,Norleucine^11-SP(Nle^11-SP),alsoactedlikewise.withitsactionantagonizablebyspantide,aSPreceptorblocker.TofurthercharacterizethenatureofcellsresponsivetothechallengeofSP,immunocytochemicalstainingagainstS-100proteinandsomeadenohypophysealhormoneswasperformedaloneorplusautoradiography.TheresultsshowedthatthepercentageofS-100proteinimmunorectivecellswasapparentlyelevatedbytheaddtionofNle^11-Spfor48h,whichindicatesapreferentialproliferationoffolliculo-stellatecellsundertheregime.ThiswasconfirmedbyincreasesinimmunocytochemicalorautoradiographicallabellingindicesofanteriorpituitarySubstancePandanteriorpituitarycellproliferation.Cellstreatedsimilarly.Takentogether,TheseresultsrevealthatthetrophicactionofSPobservedpreviouslyinothertissuesisalsopresentatleastinculturedratanteriorpituitarycells.withrespondingcellsbeingpredominantlyfolliculo-stellatecellsastypifiedbyS-100proteinimmunoreactivity.Therefore,anintra-pituitarytrophicactionofSPinvivocouldbeanticipated.