简介:摘要目的通过比较不同时期大脑类器官脑区分化和神经细胞标志物的改变,分析萝卜硫素对大脑类器官发育的影响及可能机制。方法使用萝卜硫素处理人诱导多能干细胞分化形成的大脑类器官。实验组为不同浓度(1 μmol/L、2 μmol/L、5 μmol/L)萝卜硫素处理组,对照组为空白对照组,每组20个类器官。采用免疫荧光、苏木精-伊红染色法观察比较萝卜硫素处理后不同时期脑区标志物和神经细胞标志物表达特点;RNA测序分析差异表达基因并进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)功能富集分析;实时定量反转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcriptase-mediated polymerase chain reaction,qRT-PCR)进一步筛选验证可能参与萝卜硫素促进大脑类器官生长潜在基因或可能的靶点。结果加入萝卜硫素处理40 d的大脑类器官中性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)、前脑标志蛋白叉头框G1(forkhead box G1,FOXG1)、前额叶皮质孤独症易感候选基因2(autism susceptibility candidate 2,AUST2)、配对盒基因6(paired box 6,PAX6)表达明显增强;加入萝卜硫素处理70 d大脑类器官中神经元标志蛋白神经元Ⅲ型β-微管蛋白(β-tubulin,TUJ1)、神经元核(neuronal nuclei,NeuN)、微管相关蛋白2(recombinant microtubule associated protein 2,MAP2)、T脑蛋白家族1(T-brain-1,TBR1)等表达增强。RNA测序分析显示,相比于对照组,实验组显著上调基因105个,下调基因512个,共617个。qRT-PCR验证差异表达基因(SFTPC、AKR1C3、CXCR6、PRAP1、TMC8、GPR182、F2RL2、KCNJ10)的转录水平与测序结果基本一致。结论差异表达基因AKR1C3、KCNJ10可能参与萝卜硫素促进大脑类器官前额发育和神经元分化,这有助于为萝卜硫素改善精神疾病和神经退行性疾病患者的认知和症状提供证据支持。
简介:摘要目的探究Nrf2激活剂萝卜硫素(sulforaphane,SFN)改善阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠焦虑情绪和恐惧记忆的行为及其机制。方法选取AD转基因小鼠和同窝对照野生型(WT)小鼠,随机分为野生型+生理盐水组(WT+NS组)、野生型+萝卜硫素组(WT+SFN组)、AD模型+生理盐水组(AD+NS组)和AD模型+萝卜硫素组(AD+SFN组),每组12只。SFN用生理盐水(0.9% NaCl溶液)溶解并配制成浓度为1 g/L的溶液,每天在固定时间根据体质量对WT+SFN组和AD+SFN组小鼠腹腔注射SFN(10 mg/kg),WT+NS组和AD+NS组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,1次/d,连续30 d。采用旷场实验检测小鼠的自主探究能力及焦虑行为,高架十字迷宫检测小鼠的焦虑情绪,条件恐惧实验检测小鼠的恐惧记忆行为,最后通过ELISA检测小鼠海马和脑皮质中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的表达水平。采用Graphpad Prism 8.0.2软件进行双因素方差分析。结果在旷场实验中,AD+SFN组小鼠在中央区域停留时间的百分比[(9.99±0.37)%]高于AD+NS组[(8.47±0.42)%](q=3.842,P<0.05);高架十字迷宫中,AD+SFN组小鼠在SFN干预后开放臂停留时间百分比[(26.2±1.6)%]高于AD+NS组[(15.8±1.0)%]( q=7.452,P<0.01)。条件恐惧实验中,各组小鼠均形成了恐惧记忆,但在测试阶段AD+SFN组小鼠僵直时间百分比[(64.5±3.8)%]高于AD+NS组[(51.0±4.3)%](q=5.266,P<0.01);除此之外,AD+SFN组小鼠的海马(q=6.370,P<0.01)和皮质(q=7.858,P<0.01)组织中反映氧化应激水平的重要指标SOD表达均增高,而MDA在海马(q=5.146,P<0.05)和皮质(q=5.833,P<0.01)中的表达均出现降低。结论SFN可能是通过Nrf2通路抑制氧化应激,从而改善了AD小鼠的焦虑情绪和恐惧记忆。
简介:摘要目的研究萝卜硫素(SFN)对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响。方法MTT法测定不同浓度SFN对SW480细胞生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外迁移能力的影响,Western blotting法测定1、2、5 μmol/L SFN处理后SW480细胞Notch、Hes1、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、E-cadherin蛋白表达水平。结果与对照组比较,1、2、5、10、20、40 μmol/L SFN处理后均能显著抑制SW480细胞增殖(P<0.05)。5 μmol/L SFN作用48 h后对SW480细胞抑制率为(26.38±3.24)%,细胞活力大于70%,为防止SW480细胞活力过低导致侵袭实验和划痕实验出现假阳性结果,因此后续实验选取SFN浓度1、2、5 μmol/L进行。侵袭和迁移实验发现,与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后侵袭能力、迁移能力、Ki-67、PCNA、MMP-9蛋白表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),呈浓度依赖性;与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后,Notch、Hes1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论SFN可能通过阻断Notch通路活化,下调Hes1表达水平,达到抑制结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭的目的。
简介:摘要目的探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)在毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)诱导胰腺癌细胞上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用及其机制。方法免疫组化检测CRT在胰腺癌组织中表达差异,分析其与胰腺癌患者临床病理学参数的关系。免疫印迹和Transwell检测CRT沉默对TG诱导EMT表型影响。Fluro-4/AM和共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞胞浆内钙离子水平。结果CRT在胰腺癌组织中高表达(P<0.01),与淋巴结转移(P=0.017)、UICC分期(P=0.021)呈正相关,与E钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达呈负相关(P=0.013)。CRT高表达联合E-cad低表达胰腺癌患者预后不良(P=0.023)。在胰腺癌细胞中,TG诱导EMT表型被CRT沉默所逆转。同时,CRT沉默能够抑制TG诱导胰腺癌胞浆内钙离子增加。结论CRT通过介导TG对胞浆内钙离子调控,最终促进胰腺癌细胞EMT的发生。
简介:摘要目的探讨萝卜硫素(SFP)对人肾腺癌细胞凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法选取人肾小管上皮细胞系(HK-2)和视网膜母细胞瘤细胞系(ACHN、UOK146、786-0和GRC-1)为研究对象,采用CCK-8方法和流式细胞术分析细胞增殖和凋亡情况;应用TargetScan软件预测miR-520a-3p与EGFR的关系,并采用双荧光素酶报告基因系统检测其相互作用;采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)和Western blot法检测miR-520a-3p和人表皮生长因子受体(EGFR)mRNA和蛋白的表达水平。结果SFP呈时间和浓度依赖性的抑制ACHN细胞增殖(均P<0.05),SFP处理细胞36 h后,SFP组细胞凋亡率相对于对照组明显升高(均P<0.05)。与对照组比较,SFP组的Cleaved-Caspase-3的表达水平增高,而Pro-Caspase-3的表达水平则降低(P<0.05)。20、40、80 μg/mL SFP处理ACHN细胞36 h后,miR-520a-3p表达水平均较对照组明显升高(P<0.05)。与对照组比较,转染WT-EGFR质粒组中miR-520a-3p荧光素酶活性明显降低(P<0.05),而MUT-EGFR质粒组中miR-520a-3p荧光素酶活性无变化(P>0.05)。转染miR-520a-3p mimics质粒能明显诱导miR-520a-3p基因表达(P<0.05),而抑制EGFR mRNA和蛋白表达(P<0.05)。80 μg/mL SFP处理ACHN细胞36 h后,EGFR mRNA和蛋白的表达水平均较对照组降低(均P<0.05)。与SFP组比较,SFP+miR-520a-3p inhibitor组的miR-520a-3p表达、细胞凋亡率明显降低,而EGFR表达、细胞活力明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论SFP通过上调miR-520a-3p水平降低EGFR表达,进而抑制肾腺癌细胞增殖、诱导其凋亡,miR-520a-3p/EGFR信号通路可能是肾腺癌治疗的新靶点。
简介:【摘要】目的:研究萝卜硫素对再灌注心肌细胞损伤的保护效果。方法:选择150只大鼠心肌细胞按随机原则分为A、B、C3组, A组为常氧条件下的心肌细胞, B组在A组基础之上实施缺氧3h复氧3h处理,C组为B组基础之上采用5u mol/L SFN预处理的心肌细胞。统计不同措施处理后的3组心肌细胞SOD、LDH、CK-MB、MDA含量变化情况,统计3组细胞的凋亡指数。结果:B组与A组相比细胞LDH、CK-MB、MDA指标水平显著升高,SOD含量显著下降,心肌凋亡指数显著升高[(20.5±1.3)%VS.(2.3±0.8)%],组间数据比较有统计学差异,P
简介:【摘要】目的:研究萝卜硫素对再灌注心肌细胞损伤的保护效果。方法:选择150只大鼠心肌细胞按随机原则分为A、B、C3组, A组为常氧条件下的心肌细胞, B组在A组基础之上实施缺氧3h复氧3h处理,C组为B组基础之上采用5u mol/L SFN预处理的心肌细胞。统计不同措施处理后的3组心肌细胞SOD、LDH、CK-MB、MDA含量变化情况,统计3组细胞的凋亡指数。结果:B组与A组相比细胞LDH、CK-MB、MDA指标水平显著升高,SOD含量显著下降,心肌凋亡指数显著升高[(20.5±1.3)%VS.(2.3±0.8)%],组间数据比较有统计学差异,P