简介：目的构建分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白（rhINGAP）载体毕赤酵母。方法通过PCR扩增INGAP基因，插入到重组质粒α,／pUC18的α因子信号序列处，再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K，SalI酶切线性化重组质粒αINGAP／pPIC9K。电穿孔转化毕赤酵母，营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子，PCR鉴定是否含有目的基因INGAP，甲醇诱导rhINGAP的表达，Westernblotting鉴定目的蛋白，ELISA法定量测定其含量。结果重组表达质粒αINGAP／pPIC9K经酶切获得758bp片段，符合α因子与INGAP片段融合的长度，筛选得到3个阳性转化子，培养上清含有与抗INGAP抗体反应的蛋白。结论成功构建了分泌INGAP蛋白的毕赤酵母菌株。

简介：目的构建含Sonichedgehog（SHH）蛋白N端基因片段的毕赤酵母表达载体。方法通过BamH1、Xho1双酶切、T4连接酶连接，将SHH-N基因片段插入pET22b原核表达载体，构建pET22b-SHH-N质粒；经PCR扩增，产物再与pTA2载体连接，构建pTA2-SHH-N重组质粒；经EcoR1及Not1双酶切、T4连接酶连接，将SHH—N端基因片段插入pPIC9K质粒，构建pPIC9K-SHH-N重组质粒；通过线性化、脱磷酸化，将线性化pPIC9K-SHH-NDNA转染毕赤酵母菌株GS115，最后经PCR扩增和测序鉴定。结果转染的毕赤酵母经PCR扩增和测序证实含有SHH-N基因片段，与原始的基因片段序列完全一致。结论成功地构建含SHH-N蛋白基因片段的毕赤酵母表达载体。

简介：目的探讨谷参肠安胶囊在辅助治疗慢性肺心病由于长期使用抗菌素和／或激素。导致菌群失调及二重感染方面的效果。方法对63例90例次肺心病住院病人中的10例痰培养为白色念珠菌生长及5例痰培养虽无白色念珠菌生长而有鹅口疮的患者使用抗真菌药物的同时应用谷参肠安辅助治疗菌群失调及严重感染的疗效进行回顾性临床分析。结果10例痰培养为白色念珠菌生长的肺心病患者肺部感染9—14天，平均12天得到控制。表现为痰量减少稀薄，肺部干湿罗音明显减少；5例鹅口疮患者在5—9天，平均7天基本治愈；其中7例伴腹泻者，用药3天后腹泻次数逐渐减少至成形便。对曾有菌群失调及二重感染史的15例中的8例再入院才者均预防性给予谷参肠安口服。仅1例在5次住院时发生腹泻及鹅口疮。除此之外，还能明显改善患者食欲、减轻腹胀，增加食量。结论慢性肺心病患者，特别是高龄患者。由于病程长，常反复长期使用抗菌素。抗菌素抑制了肠道中厌氧菌生长，菌群平衡被破坏，加之肺心病由于心衰、呼衰，致使胃肠道淤血、水肿、缺O2，肝淤血肿大，胃肠蠕动差，各种消化液分泌减少。肠道屏障功能被削弱。如合并使用激素，机体免疫力功能被抑制，特别是细胞免疫，白色念珠菌成为条件致病菌，发生肠道细菌移位，导致二重感染。谷参肠安胶囊是目前专用于保护肠粘膜结构并增强和调节肠道功能，直接作用于肠道细胞，使其活力增加，上市已四五年的药物。此药无副作用，特别适合于高龄肺心病患者多次住院。曾有菌群失调及二重感染史的再入院病人的预防用药，对已发生菌群失调及二重感染的肺心病患者除加用抗真菌药物外，给予谷参肠安口服有一定的辅治治疗效果。