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  • 简介:目的探究ripply1基因在斑马鱼早期背腹轴发生过程中的作用.方法利用斑马鱼整封原位杂交技术揭示ripply1基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达模式,通过显微注射技术在胚胎1细胞期注射ripply1的mRNA来高表达Ripply1蛋白并在后期观察胚胎背腹标记基因的变化及胚胎形态变化.利用Tol2转基因技术构建ripply1启动子驱动的GFP转基因鱼.结果原位杂交结果显示ripply1基因在斑马鱼原肠早期胚盾期特异表达在胚盾处,即预定的背部.高表达ripply1后,在胚盾期背部标记基因表达范围扩大,腹部标记基因表达减弱,受精后24小时胚胎表现出严重的背部化表型:头部增大,腹部卵黄延伸减弱,尾部躯干及尾部区域减少,有的甚至形成了第二个体轴.得到的转基因鱼揭示ripply1母源表达,并且转录起始位点上游1200个碱基驱动的GFP能模拟内源基因的表达图式.结论ripply1可能参与斑马鱼胚胎早期背腹轴的发生.

  • 标签: 斑马鱼 ripply1 早期胚胎发育 背腹发生
  • 简介:目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性。方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-kB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子a(TNFa)引起的NF-kB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFa引起的NF-kB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础。

  • 标签: CASPASE 8 10相关RING结构域蛋白1 真核表达 泛素连接酶 细胞生长
  • 简介:椎间盘退行性变动物模型已经应用于研究椎间盘的生物力学行为、生物化学变化和生物学改变。为了探讨生骨蛋白-1(OsteogenicProtein-1,OP-1)在椎间盘合成代谢和抗分解代谢中的作用,美国Rush大学生化系的ChubinskayaS等人用椎间注射的方法制作了椎间盘退行性变模型,并用生物学和免疫组化的方法开展了研究工作。该实验共用了34只大鼠,分成5组:空白对照组、阴性对照组、核浆(nucleuspulposus,NP)盐注射加压组、两组OP-1注射组:COP-1组(椎间盘注射OP-1后持续加压)和ROP-1组(OP-1注射后停止加压)。

  • 标签: 椎间盘 分解作用 挤压性 慢性 生物化学变化 动物模型
  • 简介:文中对子囊菌代表类群的延伸因子1alpha基因密码子的使用模式进行了研究。结果表明:该基因的密码子使用偏好性不仅与核酸碱基组成密切相关,也受到其他选择性压力的影响。统计分析揭示了子囊菌各类群该基因的密码子组成和编码特点,在同义密码子的选择模式上,酵母纲(Saccharomycetes)的成员具有较独特的偏好性。基于密码子用法分歧度的聚类分析方法较合理地反映了大部分类群的分类学地位,但在各个纲的内部,密码子偏好性的变化程度存在差异。

  • 标签: 密码子偏好性 聚类分析 分类学地位 选择性压力
  • 简介:高通量电穿孔系统可以在哺乳动物细胞、细菌和酵母细胞系高效产生电穿孔。适合导入siRNA和DNA表达载体到哺乳动物细胞中。这个系统提供96孔电穿孔板和一个设计用于96孔板电穿孔实验的操作处理器,提供高效基因导入。

  • 标签: 电穿孔 高通量 系统 哺乳动物细胞 基因导入 siRNA
  • 简介:LittleDipper微阵列处理系统是一种经济适用的工具,它用于实验室标准微阵列杂交、洗涤和干燥,目标是减少实验室水浴之间和实验人员之间在微阵列分析结果上的系统误差。它包括一个可旋转的自动臂,可以移动微阵列架.通过5个温度控制水浴并放置到一个整合的离心机用于干燥。

  • 标签: 处理系统 微阵列 LITTLE 经济适用 系统误差 分析结果
  • 简介:目的报道1例手掌发病的儿童掌黑癣,并文献复习此病临床特点。方法患儿女,5岁9个月,因左手掌黑色斑疹6个月就诊。取局部皮屑完善真菌学检查,分离菌株进行分子生物学鉴定,并文献检索统计在中国大陆报道掌黑癣患者的临床特点。结果分离菌株鉴定结果为威尼克何德霉。总结文献病例9例特点:多见于儿童;左手掌受累比例略多;长江以南为主要发病区域;致病菌均为威尼克何德霉;全部病例外用抗真菌药,3周内治愈。结论掌黑癣主要发生于儿童手掌,镜检可快速诊断,菌种鉴定建议完善分子鉴定,外用抗真菌药膏疗效显著。

  • 标签: 掌黑癣 威尼克何德霉 中国大陆
  • 简介:兼容丑恶纸巾的表面上的花粉萌芽是为植物授精的必要的步。这里,我们报导Arabidopsis变异的bcl1是由于花粉萌芽的失败不育的男性。我们证明bcl1异种等位基因不能被男配偶体播送,没有同型结合的bcl1异种被获得。花粉发育阶段的分析显示bcl1变化影响花粉萌芽然而并非花粉成熟。分子的分析证明花粉萌芽的失败被AtBECLIN1的混乱引起。AtBECLIN1在成熟花粉主要被表示并且与重要相同编码蛋白质到在酵母为autophagyandvacuolar蛋白质排序的过程(VPS)要求的Beclin1/Atg6/Vps30。我们也证明AtBECLIN1为正常被要求植物开发,和那与autophagy,VPS和glycosylphosphatidylinositolanchor系统有关的基因,被AtBECLIN1的缺乏影响。

  • 标签: 拟南芥 AtBECLIN1 花粉萌发 植物发育
  • 简介:MembersofBcl-2familyofproteinsareregulatorsofcelldeaththatcanbegroupedintosubfamiliesofprosurvivalandproapoptoticmolecules.Theyarecharacterizedbythepresenceofseveralconservedmotifs,knownastheBcl-2homology(BH)domains,designatedBH1,BH2,BH3andBH4.MutagenesisandstructuralstudiesrevealedthattheBHdomainsareimportantfunctionaldomainsthatarealsorequiredfordimerizationfunction.Recently,asubfamilyofproapoptoticmoleculesonlycontainsBH3motifhasbeenidentifiedsuggestingBH3domainalonemaybesufficientformediatingproapoptoticfunctionamong

  • 标签: 前凋亡蛋白 map-1 多bcl-2同源域 bax相关蛋白 特性
  • 简介:Peroxisome激活proliferator的受体鲸鱼群妈(PPARγ)coactivator-1高山哈(PGC-1α)coactivates多重抄写因素并且调整几个代谢过程。Thecurrent学习在人的上皮的卵巢的癌症房间在apoptosis的正式就职调查了PGC-1α的角色。在人的卵巢和人的卵巢的上皮的肿瘤之间的PGC-1α信使rna水平被量的RT-PCR检验。更少的PGC-1α表示与正常卵巢相比在恶意的肿瘤的表面上皮被发现。在人的上皮的卵巢的癌症房间线Ho-8910的PGC-1α的Overexpression通过Bcl-2和Bax表示的协调规定导致了房间apoptosis。Microarray分析证实PGC-1α戏剧性地在Ho-8910房间影响了apoptosis相关的基因。Mitochondrial功能的试金证明apoptosis的正式就职通过由细胞色素c.Furthermore的版本的终端阶段,导致的apoptosis部分是,然而并非完全,由PPARγantagonist(GW9662)堵住了的PGC-1α-,并且由siRNA的PPARγ表示的抑制也在Ho-8910房间禁止了PGC-1α-inducedapoptosis。这些数据建议PGC-1α通过aPPARγ-依赖者小径施加了它的效果。我们的调查结果显示PGC-1α涉及apoptoticsignaltransduction小径,PGC-1α的down规定可以是在支持上皮的卵巢的癌症生长和前进的一个关键点。

  • 标签: 卵巢上皮癌细胞 PGC-1Α 诱导 细胞凋亡 PPARY
  • 简介:TRAF2isacriticaladaptormoleculeforTNFreceptorsininflammatoryandimmunesignaling.Uponreceptorengagement,TRAF2isrecruitedtoCD40andtranslocatestolipidraftsinaRINGfinger-dependentprocess,whichenablestheactivationofdownstreamkinases.TRAF1candisplaceTRAF2andCD40fromraftfractions,anditpromotestheabilityofTRAF2tosustainsignalactivation.ReplacementoftheRINGfingerofTRAF2witharaft-targetingsignalrestoresJNKactivationandassociationwiththecytoskeletalproteinFilamin,butnotNF-KBactivation.TRAF1-/-dendriticcellsshowattenuatedresponses

  • 标签: TRAF2细胞内定位 TRAF1调节 信号转导机制
  • 简介:目的:构建猪α-1,3-半乳糖转移酶(GGTA1)基因的正负筛选打靶载体。方法:以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板,采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段;以长约2kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂,在XbaI和ClaI位点插入pLoxP质粒正筛选标记neo基因的3’端;以长约5.4kb包括部分第8外显子、全部第8内含子及部分第9外显子的片段为同源长臂,于NotI位点插入该质粒中聊D基因的5’端;2.7kb的负筛选标记船基因位于载体中同源短臂的3’端外侧。结果与结论:酶切、PCR及测序结果表明,同源臂被正确连接至质粒pLoxP,成功构建了猪GGTA1基因正负筛选打靶载体pSL/GT。

  • 标签: α-Gal表位 猪α-1 3-半乳糖转移酶 基因打靶 异种移植
  • 简介:目的:构建EF-1α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α(EF-1α),测定其对体外蛋白翻译的影响。方法:通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建的重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出的蛋白含量。结果:测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增的EF-1α-Flag基因序列正确,所构建的重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换的EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白的翻译。结论:从哺乳动物细胞中纯化的EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α的功能奠定了基础。

  • 标签: 延伸因子1α Flag肽置换 蛋白翻译
  • 简介:缺氧诱导因子-1(hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1)是细胞在低氧状态下起重要作用的核转录因子。体内真菌感染部位常形成缺氧微环境,从而激活HIF-1并在抗真菌感染免疫中起到重要作用。该文就HIF-1的结构、活性调控及相关信号通路,真菌感染与缺氧的关系,HIF-1对宿主抗真菌免疫的影响等方面进行了综述。

  • 标签: 缺氧诱导因子-1 抗真菌免疫 烟曲霉 组织胞浆菌 白念珠菌
  • 简介:Theinsectcuticleplaysimportantrolesinnumerousphysiologicalfunctionstoprotectthebodyfrominvasionofpathogens,physicalinjuryanddehydration.Inthisreport,weconductedacomprehensivegenome-widesearchforgenesencodingproteinswithperitrophinA-type(ChtBD2)chitin-bindingdomain(CBD)inthesilkworm,Bombyxmori.Oneofthesegenes,whichencodesthecuticleproteinBmCBP1,wasadditionallycloned,anditsexpressionandlocationduringtheprocessofdevelopmentandmoltinginB.moriwereinvestigated.Intotal,46protein-codinggeneswereidentifiedinthesilkwormgenome,includingthoseencoding15cuticleproteinsanalogoustoperitrophinswithoneCBD(CPAP1s),ninecuticleproteinsanalogoustoperitrophinswiththreeCBD(CPAP3s),15peritrophicmembraneproteins(PMPs),fourchitinases,andthreechitindeacetylases,whichcontainedatleastoneChtBD2domain.MicroarrayanalysisindicatedthatCPAP-encodinggeneswerewidelyexpressedinvarioustissues,whereasPMPgeneswerehighlyexpressedinthemidgut.QuantitativepolymerasechainreactionandwesternblottingshowedthatthecuticleproteinBmCBP1washighlyexpressedintheepidermisandhead,particularlyduringmoltingandmetamorphosis.Animmunofluorescencestudyrevealedthatchitinco-localizedwithBmCBP1attheepidermalsurfaceduringmolting.Additionally,BmCBP1wasnotablyup-regulatedby20-hydroxyecdysonetreatment.Theseresultsprovideagenome-levelviewofthechitin-bindingproteininsilkwormandsuggestthatBmCBP1participatesintheformationofthenewcuticleduringmolting.

  • 标签: Bombyx mori CHITIN cuticle protein METAMORPHOSIS
  • 简介:抽象昆虫由被不变的微生物引起的表面分子的识别激活的一个有效天生的免疫系统保护自己免于微生物引起的感染。在水果苍蝇果蝇melanogaster,细菌的存在在主人与抗菌剂肽的表示被联系免疫者能干的纸巾。主人受体检测感染并且中继信号装适当有免疫力的反应。在果蝇像血球的l(2)有Pefabloc的mbn房间感染前处理,一个通常使用的丝氨酸朊酶禁止者,导致了二主要效果:它响应现场克否定的细菌和细菌的表面分子(peptidoglycans污染的粗略的lipopolysaccharide)堵住了抗菌剂肽Diptericin的表示,它导致了词法变化。

  • 标签: 丝氨酸蛋白酶抑制剂 血细胞 诱导 微生物感染 革兰氏阴性菌 表面分子