分光光度法测定不同产地灰毡毛忍冬中咖啡酰奎宁酸的含量

【摘要】 　　目的以咖啡酰奎宁酸的含量为指标，测定评价国内各主产区灰毡毛忍冬干燥花蕾的质量。方法以绿原酸做对照，用分光光度法测定。结果测定了国内主产区四省市灰毡毛忍冬干燥花蕾中咖啡酰奎宁酸的含量，结果显示咖啡酰奎宁酸含量为10.06%～12.24%,远比正品金银花中的高。结论 为灰毡毛忍冬干燥花蕾的开发和利用提供参考。

【关键词】 灰毡毛忍冬 咖啡酰奎宁酸 分光光度法

　　Abstract：ObjectiveTo determine the content of caffeoylquinic acid in Lonicera macranthoides dry buds in each main yield area for evaluating the quality of them. MethodsTo make the comparison with chlorogenic acid and the spectrophotometry analysis was used. ResultsThe contents of caffeoylquinic acid in Lonicera macranthoides dry buds in 3 provinces and 1 city were determined by spectrophotometry. It showed that the contents of caffeoylquinic acid were 10.06%～12.24% and were far more higher than that in Lonicera japonica. ConclusionThe reports may provide a useful reference for their development and utility of Lonicera macranthoides.

　　Key words：Lonicera macranthoides； Caffeoylquinic acid; Spectrophotometry

　　灰毡毛忍冬Lonicera macranthoidesH.-M.一直是湖南、重庆、四川、贵州等地的习用金银花品种［1］，但自2005年版《中国药典》将其收入新增加的“山银花”项下以来［2］，不时有将其称为非法金银花的宣传［3］。金银花中的有效成分主要是咖啡酰奎宁酸类，包括绿原酸、异绿原酸、新绿原酸等，其它成分相对含量很低［4～7］。以上咖啡酰奎宁酸类成分中紫外光谱基本是由其结构中共有的咖啡酰基产生的，故其紫外光谱特征几乎一致［8］。为了客观评价灰毡毛忍冬的质量，本文以绿原酸做对照，以道地金银花河南“密银花”L. japonica Thunb.做比较，用分光光度法对我国主产区的灰毡毛忍冬中的咖啡酰奎宁酸类总含量进行了测定。

　　1 材料

　　Lambda35分光光度计（Perkin Elmer），TCQ-250超声波清洗器（北京医疗设备二厂），Sartrorius BP211D 1/10万电子分析天平，ZK-82B型电热真空干燥箱。绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，80℃减压干燥至恒重），蒸馏水，分析纯甲醇。

　　实验材料经成都中医药大学万德光教授鉴定为灰毡毛忍冬的成熟干燥花蕾，“密银花”委托河南中医学院曹继华教授采集鉴定。

　　2 方法与结果

　　2.1 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品8.08 mg，置于100 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，配制成80.8 μg·ml-1的绿原酸溶液。

　　2.2 测定波长的选择将对照品溶液和供试品溶液在200～400 nm进行扫描，其均在327 nm波长处有最大吸收，故检测波长选择为327 nm。

　　2.3 标准曲线的绘制及线性范围精密吸取绿原酸对照品1，4，8，12，15，20 ml分别置于50 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，配制成1.616，6.464，12.928，19.392,24.240,32.320 μg·ml-1的绿原酸溶液，以甲醇作空白对照，在327 nm处测吸收度。以吸收度（A）对进样浓度（M）进行回归，得绿原酸线性回归方程为A=0.041 13M-0.006 8，r=1.000 0，线性范围为1.616～32.320 μg·ml-1。

　　2.4 供试品溶液的制备精密称取药材细粉约1.0 g，加甲醇定容于50 ml容量瓶中，超声30 min,放置至室温，滴加甲醇至50 ml，摇匀，精密吸取1 ml甲醇定溶于10 ml容量瓶中，再精密吸取1 ml甲醇定溶于10 ml容量瓶中，稀释倍数为5000，作为药材供试品溶液。

　　2.5 精密度实验将8号样品制成的供试品溶液，按标准曲线项下操作重复测定6次，RSD为0.08%（n=6），说明精密度良好。

　　2.6 重现性实验 精密称取6份同一样品（8号），各约1.0 g，按供试品溶液制备项下进行制备，按标准曲线项下操作测定，RSD为0.73%（n=6），说明重现性好。

　　2.7 稳定性实验对8号供试品溶液在0，1，2，3，4，5 h按标准曲线项下操作各测定1次，RSD=1.05%（n=6），说明样品溶液在5 h内基本稳定。

　　2.8 回收率实验采用加样回收法。精密称定6份8号样品各约0.5 g，分别精密加入绿原酸对照品2，4，6 mg（3个水平共6份），按供试品溶液制备项下进行制备，按标准曲线项下操作。结果见表1。
　表1 回收率实验结果（略）

　　2.9 样品测定按供试品溶液制备项下进行制备，按标准曲线项下操作测定，从回归方程求得绿原酸的质量，再计算出金银花中绿原酸的含量，结果见表2。

　　表2 灰毡毛忍冬中绿原酸含量（略）

　　3 小结

　　绿原酸、异绿原酸、新绿原酸等咖啡酰奎宁酸类的紫外光谱特征几乎一致，所以用绿原酸做对照以分光光度法测定金银花类药材中咖啡酰奎宁酸类总含量是完全可行的。

　　2005年版《中国药典》将忍冬规定为金银花唯一来源的重要依据是合格的金银花（忍冬）中含有大于0.1%的木犀草苷［2，9］。文献表明，金银花中活性成分很多，但绿原酸是金银花中的主要有效成分，其它类成分相对含量很低，0.1%的木犀草苷在金银花功效中所起的作用到底有多大是值得商榷的。河南新乡的花生壳含木犀草苷达1.1％ 以上［10］，是新版药典规定的金银花中木犀草苷含量的11倍，难道1 g花生壳能作1l g金银花入药吗？或者可以用花生壳来勾对木犀草苷含量达不到要求的金银花吗？

　　本文测定了我国灰毡毛忍冬主产地湖南、四川、重庆、贵州的样品中有效成分绿原酸的含量，结果为10.06%～12.24%，都比较集中，而且远比正品金银花中的高，说明各地栽培的都是经过人工选育的优良品种，而且主产地都适合其生长发育。由于绿原酸、异绿原酸、新绿原酸等咖啡酰奎宁酸类是金银花中的主要活性成分，其它成分相对含量很低，所以从主要活性成分含量看灰毡毛忍冬的内在质量要优于正品忍冬。

　　灰毡毛忍冬因一直是湖南、重庆、四川、贵州等地的习用金银花品种而被收入当地地方药材标准中［1］，有关“当地一些不法种苗贩子把号称金银花王的山银花（又称灰毡毛忍冬）冒充中药材金银花，大量贩卖给农民”的宣传看来有些言重了［3］。

【参考文献】
　　［1］ 黎跃成.药材标准品种大全［S］.成都：四川科学技术出版社，2001：58.

　　［2］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部 ［S］.北京：化学工业出版社，2005：21，152.

　　［3］ 蒋高明，李先恩.药农注意：莫把山银花当金银花［N］.人民日报，20050715.（6）

　　［4］ Chai XY，Li SL，Li P，et al. Quality evaluation of Flos lonicerae through a simultaneous determination of seven saponins by HPLC with ELSD［J］.J Chromatogr A，2005，1070(1-2):43.

　　［5］ Li XP，Yu J，Luo JY，et al. Simultaneous determination of chlorogenic acid, caffeic acid, ferulic acid, protocatechuic acid and protocatechuic aldehyde in Chinese herbal preparation by RP-HPLC［J］.Chem Pharm Bull. 2004，52（10）:1251.

　　［6］ Li HJ，Li P，Ye WC，et al. Determination of five major iridoid glucosides in Flos Lonicerae by high-performance liquid chromatography coupled with evaporative light scattering detection［J］.J Chromatogr A，2003，1008(2):167.

　　［7］ 黄 雄，李松林，李 萍，等.HPLC法同时测定金银花中8种黄酮的含量［J］.药学学报，2005，40（3）：285.

　　［8］ 黄璐琦，王永炎.中药材质量标准研究［M］.北京：人民卫生出版社，2006：411.

　　［9］ 马双成，刘 燕，毕培曦，等.金银花药材中抗呼吸道病毒感染的黄酮类成分的定量研究［J］.药物分析杂志，2006，26（4）：426.

　　［10］ 唐丽萍，龚云麒，吴小燕，等．不同产地花生壳中木犀草苷的HLPC测定［J］.花生学报，2005，34(2)：1.