青藏高原唐古特大黄提取物不同成分对小鼠免疫功能影响的研究

【摘要】 　　目的探讨青藏高原唐古特大黄提取物的不同成分对小鼠体液免疫功能及细胞免疫功能的影响。方法应用唐古特大黄对小鼠进行灌胃给药，采用溶血空斑实验来观察药物对小鼠抗体生成水平的影响，同时采用E玫瑰花环实验检测小鼠的细胞免疫功能。结果青藏高原唐古特大黄的不同提取成分中,只有糖类成分对小鼠的体液及细胞免疫功能有提高作用,而其余成分（鞣质类，苯丁酮苷类，芪类成分，番泻苷类，蒽醌苷元类，蒽醌类成分等）对小鼠的体液及细胞免疫功能有抑制作用。结论 唐古特大黄具有药物免疫调节作用。

【关键词】 唐古特大黄；提取物；免疫功能

　　Abstract：ObjectiveTo observe humoral immunity function activity of different constituents extracted from Qing-zang Tanguticum Rheum in mice. MethodsThe mice were orally administrated with different constituents extracted from Qing-zang Tanguticum Rheum. The production of antibody was detected by plaque method, and the cell immunity function of the mice was observed by E-rosette test method .ResultsOnly the carbohydrate in the different extracts from Qing-zang Tanguticum Rhubarb could improve the humoral immunity function and cell immunity function. But the other extracts（tannin,butyrophenone,sennoside,anthraquinone glycoside etc.） had inhibitory effects.ConclusionQing-zang Tanguticum Rhubarb can regulate the immunity function.

　　Key words：Qing-zang Tanguticum Rhubarb； Extract; Immunity function

　　大黄味苦性寒，有通便导滞、泻火凉血、活血祛淤、利胆退黄之功效。大黄系蓼科植物，大黄的干燥根及根茎均可药用。唐古特大黄R.palmatuml.var. tangguticum Maxim.ex Regel为青海省的道地野生药材，其整体根茎均有药用价值。现代药理研究表明，大黄具有抗菌消炎、镇痛解痉、强心利尿等作用［1］。本研究选用青海唐古特大黄对其提取物不同成分，水煎物与醇提物进行了以小鼠为实验动物的免疫功能的检测，为进一步探讨唐古特大黄的免疫药理机制奠定基础。

　　1 器材

　　1.1 动物

　　昆明种小鼠200只，雌雄各半，体重（20±2）g；豚鼠6只，雄性，体重（500±50）g，由兰州大学医学实验中心提供，合格证号为宜动字第14－005号。

　　1.2 药品

　　本实验中所采用药品来自青海海拔3 500 m以上地域，由青海大学医学院中医学系魏全嘉教授鉴定。唐古特大黄提取物不同成分由北京大学中药现代化研究中心提取。将药物粉剂用生理盐水制成液体，配比浓度为0.9 g/ml。唐古特大黄生药水煎液由大黄粗颗粒粉末浸泡后煮沸过滤而得，再将过滤液用生理盐水配比为0.9 g/ml。唐古特大黄的醇提液由乙醇浸泡唐古特大黄过滤液后再回收乙醇，制得膏剂，配比浓度为0.9 g/ml。

　　1.3 仪器及试剂

　　ERMA显微镜；电子天平；淋巴细胞分离液，可溶性淀粉溶液，天津市化学试剂六厂三分厂提供；豚鼠血清，绵羊红细胞（SRBC），无钙镁Hank`s液均由青海大学医学院形态学实验室提供，冰箱保存备用，所用试剂使用周期不超过2 d。

　　2 方法与结果

　　2.1 对小鼠体液免疫功能的影响

　　2.1.1 方法

　　小鼠100只，随机分为10组（表1），每组10只。药物组每只小鼠灌胃0.36 g/d相应的药物，连续7 d，对照组给予等量的生理盐水，于给药后2 d ,用2 ×109/ L SRBC 0.2 ml 经腹腔注射免疫小鼠。免疫5 d后取小鼠脾脏制备脾悬液(1 ×1010/ L) 与稀释的SRBC( 2 ×108/ L)等量混合后加入事先预温在46℃水浴中的0. 7%琼脂中，混匀后加入到已制备好的1.4%的琼脂平皿中。经37 ℃孵育1. 5 h 后，加入豚鼠血清，继续孵育30 min。取出倾去琼脂上多余的豚鼠血清，计数溶血空斑的形成数目。　2.1.2 结果

　　经统计学方法处理，采用t检验方法，结果表明：鞣质组，苯丁酮苷组，番泻苷组，蒽醌苷组，蒽醌苷元组，芪类组，生药组，醇提组的溶血空斑形成数低于对照组，与对照组有显著性差异（P<0.01或P<0.05）,糖类组溶血空斑的形成数高于对照组，同样与对照组有显著差异（P<0.01）。结果见表1。表1 大黄的不同提取成分对小鼠的溶血空斑形成的影响（略）

　　2.2 对小鼠细胞免疫功能的影响

　　2.2.1 方法

　　小鼠100只，随机分为10组，每组10只（表2）。药物组每只小鼠灌胃0. 36 g/d相应的药物，连续7 d，对照组给予等量的生理盐水，第8 天对小鼠采取断头取血的方法进行取血1 ml，125 u/ml肝素抗凝，用毛细吸管吸取抗凝血沿管壁轻轻加入在盛有1ml淋巴细胞分离液的离心管内，2 500 r/min离心20 min后，吸去上层血浆，取中段白雾状淋巴细胞层，加入1 ml Hank`s液混匀，1 000 r/min离心10 min，去上清液，同上重复洗两遍，最后弃去上清液，留取沉淀物约0.1 ml，加入小牛血清0.1 ml，再加入SRBC悬液0.1 ml混匀，置于37℃水浴作用10 min，再置于4℃冰箱2 h后取沉淀液约0.1 ml，涂于洁净载玻片上瑞氏染色镜检，计数200个淋巴细胞中的E玫瑰花环形成率［2］。

　　2.2.2 结果

　　经统计学方法处理，采用t检验，结果表明：糖类组E花环形成率高于对照组，与对照组有显著性差异（P<0.01或P<0.05）。鞣质组，苯丁酮苷组，番泻苷组，蒽醌苷组，蒽醌苷元组，芪类组，生药组，醇提组的E花环形成率低于对照组，与对照组有显著性差异（P<0.01）。结果见表 2。表2 大黄的不同提取成分对小鼠的E玫瑰花环形成的影响（略）

　　3 讨论

经研究发现灌服唐古特大黄的糖类提取物可以促使小鼠的B细胞成熟，增加抗体分泌量。同时可以促使小鼠的T淋巴细胞增殖与分化。植物多糖具有广泛的生物学活性, 如抗肿瘤、抗炎、抗凝血、抗病毒、抗放射、降血糖及调节血脂等。多糖可以增强机体免疫功能, 其机制是主要通过刺激巨噬细胞、T 细胞及NK细胞等的功能, 从而提高机体的防御能力［3］。本研究表明青藏高原唐古特大黄的提取成分中糖类成分对小鼠可促进T、B细胞的增殖，增强体液免疫功能及细胞免疫功能。而鞣质类成分，苯丁酮苷类成分，芪类成分，番泻苷类成分，蒽醌类成分，蒽醌苷元类成分，醇提药物，生药等均对小鼠的体液免疫功能及细胞免疫功能有抑制作用。

　　综上所述，唐古特大黄对小鼠免疫功能具有调节作用。因此，进一步研究唐古特大黄的免疫药理作用将有利于对青藏高原唐古特大黄的开发与利用。

【参考文献】
　　［1］冯则怡.大黄的炮制与应用［J］.湖北中医杂志，2000，20（11）：41.

　　［2］李春子,关晓清,周学章,等.应用E玫瑰花环试验检测动物T细胞［M］.延边大学医学学报,2001，24（1）：30.

　　［3］曹锦花, 李华.多糖免疫调节作用的研究进展［J］.中国生化药物杂志, 1999 , 20 (2) ：104.