两种方法测定槐花3种饮片中鞣质含量

作者：李娆娆，吴丽莎，原思通

【摘要】 目的采用《中国药典》2005版和2000版所收载的鞣质含量方法分别测定3种槐花饮片，分析结果，比较两种方法的优缺点。方法根据《中国药典》2005版附录的磷钼钨酸-干酪素比色法和2000版附录项下的皮粉法分别测定槐花、炒槐花和槐花炭中鞣质含量；采用SPSS软件对结果进行统计学分析。结果两种方法所测得的槐花3种饮片中鞣质含量结果无显著性差异（P>0.05）。比色法与皮粉法相比较，操作简便，用样量少，准确度高。结论比色法比皮粉法更简单、方便，更适合于中药中鞣质含量的测定。

【关键词】 鞣质含量； 槐花； 饮片； 比色法； 皮粉法

Abstract：ObjectiveThe merits and demerits of two methods for determining the content of tannin in processing pieces of Flos Sophorae were analyzed according to Chinese Pharmacopoeia 2005 and 2000. MethodsA tungsten molybdophosphate-casein colorimetric method was established according to the addenda of Chinese Pharmacopoeia in 2005, and a hide powder method was established according to the addenda of Chinese Pharmacopoeia 2000. Both of the two methods were used for determining the content of tannin in Flos sophorae, Flos sophorae stir-baked and Flos sophorae carbonized, respectively. Then SPSS software was carried on for statistic analysis. ResultsThe studies showed that the two testing methods hold no significant difference.ConclusionThe colorimetric method is more simple, convenient and accurate than the hide powder method.

Key words：Chinese Pharmacopoeia; Flos Sophorae; Processing pieces; Hide powder method; Colorimetric method; Content of tannin

槐花为常用凉血止血药［1］，临床常用饮片包括生用、炒黄、炒炭3种规格。传统经验认为与槐花相比，炒槐花止血作用略有增强，槐花炭止血作用显著增强［2］。现代研究认为鞣质为止血的有效成分之一，槐花炭止血作用的显著增强，与鞣质含量大幅度增加有关［3］。

《中国药典》2000版附录项所收载的鞣质含量测定方法为皮粉法［4］，而2005版附录项下则改收载磷钼钨酸-干酪素比色法［5］。采用皮粉法测定槐米不同炮制品中鞣质含量已有报道［6］，而这两种测定方法的对比研究尚未见到报道。因此文章对此进行相关实验研究，以期为该方面的研究提供实验数据。

1 仪器与材料

紫外-可见分光光度计 SHIMAFD ZU UV-120-02（上海医用仪器厂）；CYJB-700滚筒式燃油炒药机（上海凯旋中药机械制造有限公司）。槐花购自北京、山东、山西、安徽；生产炒槐花、槐花炭各10批，经原思通研究员鉴定均为豆科植物槐的干燥花蕾，来源于北京的槐花炭饮片（京炭10）稍过火。没食子酸（Gallic acid）对照品购于中国药品生物制品检定所，批号110837-200302。水为高纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 炮制工艺 炒槐花：以炒药机仪表指示温度（火焰温度）250 ℃，实测筒壁温度151 ℃、筒心温度118 ℃炒至表面深黄色；槐花炭：以炒药机仪表指示温度（火焰温度）390 ℃，实测筒壁温度225 ℃、筒心温度181 ℃炒至表面焦褐色。

2.2 比色法测定槐花3种饮片中鞣质含量

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品46.4 mg，置100 ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5 ml，置50 ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升中含没食子酸0.0464 mg）。

2.2.2 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置25 ml棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1 ml，再分别加水11.5，11，10，9，8，7 ml，用29 ％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30 min，以相应的试剂为空白，照紫外－可见分光光度法（附录 ⅤA），在760 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为Y=116.05X-0.306，相关系数 r=0.999 6，表明没食子酸的线性关系良好。

2.2.3 供试品溶液的制备 取药材粉末约0.5 g，精密称定，置250 ml棕色量瓶中，加水150 ml，放置过夜，超声处理10 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置（使固体物沉淀），滤过，弃去初滤液50 ml，精密量取续滤液20 ml，置100 ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 测定方法

总酚：精密量取供试品溶液2 ml，置25 ml棕色量瓶中，照“2.2.2”项标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1 ml”起，加水10 ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg），计算，即得。 不被吸附的多酚：精密量取供试品溶液25 ml，加至已盛有干酪素0.6 g的100 ml具塞锥形瓶中，密塞，置30 ℃水浴中保温1 h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 ml，置25 ml棕色量瓶中，照“2.2.2”项标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1 ml”起，加水10 ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg），计算，即得。按下式计算鞣质的含量：鞣质含量＝总酚量－不被吸附的多酚量。

2.2.5 方法学考察

精密度实验：精密量取同一份供试品溶液，分别在上述同一光谱条件下，按照药典方法连续测定5次。平均含量为6.73 mg，RSD为1.84 ％（n=5）。

稳定性实验：按“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液，在上述同一光谱条件下，分别在0，1，2，8，24 h测定含量。平均含量为6.72 mg，RSD为1.81 ％（n=5）。

重复性实验：按“2.2.3”项下的方法，平行制备5份供试品溶液，在上述同一光谱条件下，分别测定鞣质含量。平均含量为6.76 mg，RSD为1.95 ％（n=5）。

加样回收率实验：采用加样回收法，取已知含量的槐花粉末，分别加入等量的没食子酸对照品，按上述光谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

2.3 皮粉法测定槐花3种饮片中鞣质含量按照《中国药典》2000版Ⅰ部附录中鞣质的含量测定方法。具体操作步骤如下：取不同槐花饮片，样品约10 g（60 ℃下干燥6h，粉碎，过80目），精密称定，准确加入250 ml的H2O，称重，水浴30 min，放冷，补足损失重量，离心（2400 r/min）15 min，上清液滤过，取100 ml滤液（Ⅰ）准确加入6.00 g皮粉，振荡15 min，离心（2400 r/min）15 min，上清液滤过，得到滤液（Ⅱ），取滤液Ⅰ、Ⅱ各25 ml至已恒重的蒸发皿中蒸干，于105 ℃恒重3 h，测得鞣质含量。测定结果见表2。表1 回收率实验结果

2.4 样品测定按照“2.2”和“2.3”项下的方法分别测定槐花3种饮片中鞣质含量，测定结果见表2。试验数据采用SPSS软件进行显著性分析，α＝0.05，P=0.597，P＞0.05，所以两种测定方法结果无显著性差异。

3 讨论

鞣质含量测定的常用方法有皮粉法、高锰酸钾法、干酪素法、络合滴定法、比色法。皮粉法的适用范围很广，不足之处则是样品的使用量大、测定周期长，并且选择性较差，适用于鞣质含量较高中药的测定，鞣质含量较低的中药则不宜采用该法。干酪素法能够选择性的测定有生理活性的鞣质，选择性优于皮粉法，适用于鞣质含量较低中药的测定［7］。表2 两种测定方法所测得槐花3种饮片中鞣质含量槐花3种饮片中鞣质含量的测定结果显示，无论样品中鞣质含量的高低，皮粉法与比色法所测得的24批样品的鞣质含量结果无显著性差异。

本次实验结果显示皮粉法的精密度和重现性较差，样品用量过大，少量的样品难以进行测定，皮粉的质量差异较大，影响试验结果。比色法操作简便、精密度高、成本低廉。因此鞣质含量测定宜选用比色法。

【参考文献】
［1］ 国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京: 化学工业出版社, 2005：246

［2］ 原思通. 医用中药饮片学［M］. 北京: 人民卫生出版社, 2001：372.

［3］ 李 惠, 原桂东, 金亚红,等. 槐花饮片及其提取物止血作用的实验研究［J］. 中国中西医结合杂志, 2004, 24(11): 1007.

［4］ 国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京: 化学工业出版社, 2000：附录ⅩB.

［5］ 国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京: 化学工业出版社, 2005：附录ⅩB.

［6］ 念其滨. 槐米不同炮制品的鞣质含量测定［J］. 福建中医药, 2004, 35(5): 48.

［7］ 王 坤, 鲁 静. 中药材中鞣质含量测定方法的研究［J］. 中国药事, 2004, 18(6): 361.