粘附分子整合素α5 β1在胆囊癌中的表达及其临床意义

【摘要】　目的　研究粘附分子整合素α5β1在胆囊腺癌中的表达及其与胆囊腺癌分化、侵袭转移和预后的关系。方法　应用免疫组织化学方法对57例胆囊腺癌石蜡包埋标本进行整合素α5β1半定量检测。结果　有41例(71.9%)胆囊腺癌组织整合素α5β1表达减弱或消失，高分化癌的整合素α5 β1阳性率明显高于低分化癌(P＜0.05)。整合素α5β1阳性率在胆囊癌伴淋巴结转移组低于淋巴结阴性组(P＜0.05)。整合素α5β1表达阳性者2年生存率(32.5%)显著高于表达阴性者(11.3%，P＜0.05)。结论　整合素α5β1表达与肿瘤细胞的分化程度、淋巴结转移呈负相关，整合素α5β1表达与患者预后相关，可作为判断胆囊癌患者预后的生物学指标。

　　Expression of integrin α5 β1 in adenocarcinoma of gallbladder and its clinical implication

　　【Abstract】 ObjectiveTo investigate the integrin α5 β1 expression in adenocarcinoma of gallbladder and its relation with tumor differentiation, invasion, metastasis and prognosis.Methods The integrin α5 β1 expression was detected in 57 cases of gallbladder adenocarcinoma by using immunohistochemistry technique (PAP method) and 37 cases of chronic cholecystitis.Results The expression of integrin α5 β1 in71.9 % cases of gallbladder carcinoma and 13.5 % cases of chronic cholecystitis was weaker than in the surrounding normal cholecystic mocusa. The positive rate of integrin α5 β1 was lower in poorly differentiated carcinoma group than in well differentiated group (P＜0.05). The positive& nbsp;rate of integrin α5 β1 was lower in metastatic carcinoma group than in non-metastatic group (P＜0.05). the two-year survival rate was higher in integrin α5 β1 positive group (32.5%) than in negative group (11.3 %, P＜0.05).Conclusion The weak or loss expression of integrin α5 β1 was related with differentiation and metastasis of gallbladder carcinoma. The expression of integrin α5 β1 might have prognostic value.

　　【Key words】 Gallbladder adenocarcinoma;　Integrinα5 β1;　Immunohistochemistry

　　胆囊癌发病率逐年升高，占胆道系统恶性肿瘤的64.7%。我们应用免疫组织化学方法检测57例胆囊腺癌石蜡包埋标本中粘附分子整合素(integrin)α5β1的表达并探讨其意义。

　　对象和方法

　　1.病例选择：1988～1994年上海医科大学附属华山医院和中山医院手术切除的原发性胆囊癌病例标本57例，其中男22例，女35例，年龄36～81岁，平均56岁。按1991年WHO病理分类标准，57例均为胆囊腺癌，其中高分化癌18例，分化中等癌26例，分化差的癌13例。依据1987年UICC的胆囊癌TNM分期标准：T1期19例，T2期15例，T3期17例，T4期6例。57例中有37例(64.9%)合并有胆囊结石。取同期37例慢性胆囊炎的标本作为对照。

　　2.标本制备及免疫组化染色：兔抗人整合素α5 β1多抗为Sigma公司产品，羊抗兔IgG与兔PAP试剂为Vecter实验室产品。标本经福马林固定、石蜡包埋、连续切取2张5μm厚切片，1张作常规HE染色外，另1张用于检测整合素α5 β1表达。免疫组化染色采用PAP法。

　　3.整合素α5 β1染色结果判定标准：按肿瘤细胞着色强度及阳性细胞分布范围分为4个等级：无细胞着色(-)；10%～30%细胞呈弱、中等强度阳性反应(+)；30%细胞呈强阳性反应或30%～60%细胞呈弱、中等强度阳性反应()；＞60%细胞呈强阳性反应()。

　　4.统计学方法：免疫反应结果及其临床病理参数的关系采用χ2检验，生存率计算使用寿命表法，不同分组间生存率差异使用时序检验。

　　结果

　　1. 整合素α5 β1表达与胆囊癌临床病理学特征的关系：整合素α5β1的表达慢性胆囊炎和癌旁正常胆囊腺上皮整合素α5 β1多呈强阳性反应，其主要分布于腺上皮细胞的细胞膜及外周胞浆。而在57例胆囊腺癌组织中有41例(71.9%)整合素α5 β1呈阴性或不同程度表达减弱，在同一个病例，瘤细胞整合素α5β1的表达随其浸润的深度而不同，特别是侵入肌层或浆膜层的瘤细胞多趋于明显减弱或消失。整合素α5β1表达与肿瘤的分化程度呈正比，即分化差时整合素α5 β1的表达趋于减少。分化好组整合素α5β1表达各级例数为2、1、3、1 2；分化中等组整合素α5 β1表达-～各级的例数分别为11、5、7、3；分化差组整合素α5β1表达-～各级的例数分别为10、1、1、1。3组比较，差异有显著性(P＜0.05)。此外，整合素α5β1的表达明显减少者临床趋向于有淋巴结转移。淋巴结转移组整合素α5β1表达-～各级的例数分别为4、0、1、1；无淋巴结转移组整合素α5β1表达-～各级的例数分别为19、7、11、16。两组比较，差异有显著性(P＜0.05)。

　　2.整合素α5 β1表达与胆囊腺癌预后的关系　45例胆囊癌病人获得术后随访，随访率为78.5%，患者生存时间为3个月～6年，除去由于术后并发症生存少于6个月的病例，整合素α5β1的表达减少组平均生存期7个月，无表达减少组为17个月。Logrank检验显示两者的生存率差异有显著性(P＜0.05)。

　　讨论

　　胆囊癌的生物学特性是多呈浸润性生长，局部转移早，患者的预后差。本实验结果发现，57例胆囊癌患者2年中77.8%的病人出现转移，总的2年生存率仅为22.2%。肿瘤局部的浸润程度与预后呈负相关，T4期2年生存率为0%。整合素是由α、β两条多肽链经非共价键连接而成的异二聚体，主要介导细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用。两条链均有较长的细胞外片段、跨膜区和较短的细胞内片段。细胞外片段含配体的结合位点、与调节因子作用的功能区和Ca2+结合区。细胞内片段则通过actinin、vinculin、talin、actin等小分子与细胞骨架相连。各种整合素的结构十分相似，大多数整合素细胞外配体结合部位能识别RGD(精-甘-门冬氨酸)三肽序列，并与含有RGD的多种ECM成分结合。以往研究显示细胞恶变后，瘤细胞表面的整合素表达有所改变，这种变化与肿瘤细胞的侵袭性及转移密切相关［1，2］。但各种整合素在不同的肿瘤中表现不同，在同一肿瘤的不同部分表现也不同。如侵袭性强的黑色素瘤细胞表面表达β3。在黑色素瘤侵袭转移时α6亚单位表达减少［3］。Feldman等［4］在对小细胞肺癌的研究中发现整合素α5β1 mRNA表达阴性与肿瘤的复发相关。Zutter等［5］发现整合素α5β1在乳腺癌中的表达与肿瘤分化有关。

　　本研究结果显示，71.9%的胆囊癌组织中整合素α5 β1表达减少、丢失，而非肿瘤的胆囊组织只有14.3%表达减少。整合素α5β1主要分布于肿瘤浅表部位的瘤细胞，而浸润胆囊壁肌层的癌细胞表达明显减少，整合素α5β1的表达与胆囊癌组织学分级和淋巴结转移有关，提示整合素α5β1是分化好、肿瘤无浸润转移的标志物。本研究显示大多数病例肿瘤细胞整合素α5β1的表达均有不同程度的减少或消失，肿瘤细胞表面粘附因子的缺乏可能部分解释胆囊癌易于局部浸润和早期转移的特点。手术标本中肿瘤细胞整合素α5β1的表达可以作为判断患者预后的一个指标。

参考文献
　　［1］Condic Ml, letowneau PC. Ligand-induced changes in integrin expression regulate neuronal adhesion and neurite outgrowth. Nature, 1997,389:852-856.

　　［2］Hangan D, Morris Vl, Boeters L, et al. An epitope in VLA-6(alpha6 beta1) integrin involved in migration but not adhesion is required for extravasation of murine melanoma B16F1 cells in liver. Cancer Res, 1997,57:3812-3817. 

　　［3］Maemura M, Akiyama SK, Woods VJ, et al. Expression and ligand binding of alpha 2 beta 1 integrin on breast carcinoma cells. Clin Exp Metastasis, 1995,13:223-235.

　　［4］Feldman LE, Shin KC, Natale RB, et al. Beta 1 integrin expression on human small cell lung cancer cells. Cancer Res, 1991, 51:1065-1070.

　　［5］Zutter MM, Mazoujian G, Santoro SA, et al. Decreased expression of integrin adhesive protein receptors in adenocarcinoma of the breast. Am J Pathol,1990,137:863-870.