HPLC法测定西咪替丁注射液有关物质的研究

HPLC法测定西咪替丁注射液有关物质的研究

王志远

德惠市疾病预防控制中心130300

【摘要】目的：分析与探讨HPLC法对西咪替丁注射液有关物质的测定。方法：通过HPLC法测定，色谱条件为：色谱柱：SHIMADZUshim-packC18，甲醇－0.05mol/L己烷磺酸钠溶液为流动相，（3.5±0.1）为磷酸调节PH值，检测波长为319nm，1ml•min-1的流速。结果：5~1000μg/ml浓度范围内，西咪替丁呈良好线性关系，99.86的加样平均回收率，RSD为0.38%。结论：研究表明，HPLC法可靠、准确，相比于标准法，HPLC能够取得令人满意的结果，值得在西咪替丁注射液有关物质测定中应用与推广。

【关键词】西咪替丁；HPLC；含量；有关物质

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2015）-11-042-02

应用于临床中的西咪替丁注射液本身属于一种H2受体颉颃剂，一般用其治疗消化道溃疡。目前以国家药监局部颁标准为测定西咪替丁的国家级标准。这种标准是通过紫外分光光度法对西咪替丁含量进行测定，通过薄层色谱法对西咪替丁注射液有关物质进行检测[1]。具有较差的专属性。本文通过高效液相色谱（HPLC）法控制西咪替丁注射液含量及有关物质，测定结果显示，该方法具有较高专属性，而且存在快速、简便、准确以及优良重现性等优势，比较适合当作控制西咪替丁注射液质量的有效方法。

1.仪器与试药

所选用仪器为美国Water公司生产的Waters2998紫外检测器、Waterse2695高效液相色谱仪以及Empower色谱数据处理系统，MettlerAG-135电子天平，分析纯为已烷磺酸钠、磷酸，色谱纯为甲醇，水为超纯水。3批西咪替丁注射液（分别为上海现代哈森药业公司、徐州莱恩药业有限公司及山东方明药业公司生产）。

2.测定方法与结果

2.1.色谱条件

5μm，（4.6×150）mm的WatersSunfireCI8柱为色谱柱，比例为24：76的甲醇-水为流动相，即每100ml西咪替丁注射液中含0.94g乙烷磺酸钠，与0.3ml磷酸，1.0ml/min的流速，220mm的检测波长，30℃的柱温，10μl的进样量。

2.2.选择波长检测

取西咪替丁内容物，通过研细再精密城区适量，将其放在200ml的容量瓶中，同时加入流动相使其充分溶解，稀释到规定刻度后，摇匀并过滤，在200ml容量瓶中加入2ml续滤液，再加流动相对其进行稀释，摇匀，在坡长为200~400的范围内加强扫描。扫描结果显示坡长最大值为220nm。对不同生产商不同批次西咪替丁注射液进行测定，结果显示波长均在（220±1）nm的范围内。所以检测波长应该确定为220nm[2]。

2.3.制备溶液

2.3.1.供试品溶液

选取西咪替丁注射液内容物，研细后，适量称取，将其放在100ml的容器中，并加流动相充分溶解内容物后，继续加流动相，使其稀释到规定刻度，充分摇匀，并过滤，最后精取10ml的续滤液，将其置于容量瓶（100ml）中，再加流动相使其稀释至刻度，充分摇匀，以作供试品溶液。

2.3.2.对照品溶液

称取100mg西咪替丁为对照品，置于容量瓶（100ml）中，加流动相使其溶解，充分稀释西咪替丁溶液至刻度，摇匀，以作对照品溶液。

2.3.3.阴性对照溶液

选取普通供试品溶液（不含西咪替丁成分），遵照以上供品溶液制备法，将其制作为阴性对照溶液，以作对比。

2.3.方法学考察

2.3.1.线性关系考察

根据规定的色谱条件，选取25ml的西咪替丁对照品置于100ml容量瓶中，通过流动相溶解，直至其稀释到刻度，以此将其制作成为西咪替丁对照品浓溶液，并在5ml、10ml、100ml、200ml容量瓶中分别加入1ml的对照品浓溶液，加流动相充分稀释到规定刻度，注入精取的10μl的溶液至液相色谱仪中，对色谱图进行详细记录。以A（峰面积）为纵坐标、C（浓度）为横坐标，得到回归方程：r=1.0000，A=49555C-7428。结果表明，在5~1000μg/ml的浓度范围内，西咪替丁注射液浓度和峰面积具有良好线性关系。

2.3.2.干扰试验

选取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，根据色谱条件实施10μl测定，测定结果显示阴性没有干扰。

2.3.3.稳定性试验

根据色谱条件，选取适量对照品溶液，每次10μl，分别于0h、3h、6h、9h、12h、24h注入液相色谱仪中，对其色谱图进行记录，检测出RSD的值是0.17%。检测结果显示，24h内，西咪替丁溶液呈现稳定状态。

2.3.4.精密度重现性试验

对5份同一样品紧密称取，根据色谱条件明确测定，根据供试品溶液制备法严格操作，检测出溶液含量RSD平均为0.47%。检测结果表明，HPLC法具有较好的重现性。

2.3.5.加样回收率试验

对已知含量西咪替丁样品细粉进行适量称取，将其置于容量瓶（100ml）中，并加流动相溶解样品细粉，使其稀释到规定刻度后，摇匀并充分过滤，得出10ml的续滤液，将其置于容量瓶（100ml）中，再紧密加入5ml的对照品溶液，再加流动相，稀释，摇匀。根据色谱条件规定，每次10μl，将其注入至液相色谱仪中，对色谱图进行详细记录，并测定加样回收率，见表1。

表1：加样回收率试验（%）

3.讨论

采用HPLC法对西咪替丁注射液进行测定的相关报道中，具有较多的流动相设计，相关报道曾对比例不同的甲醇-水-三乙胺；甲醇-水以及甲醇-水-磷酸-三乙胺等实施试验，因为西咪替丁本身属于碱性药物，具有较强的极性，对流动相比例进行有效调节，而且西咪替丁具有较快的保留时间，很难使系统达到平衡效果[3]。若将乙烷磺酸钠加入流动相中，能够有效改善出峰时间，在很大程度上提升系统稳定性。

本研究以二极管阵列检测器为检测器，采用HPLC法对西咪替丁胶囊有关物质进行测定，结果显示，5~1000μg/ml浓度范围内，西咪替丁呈良好线性关系，99.86的加样平均回收率，RSD为0.38%。该方法具有较好重现性、简单易行、线性关系良好且准确度高等优势，能够在很大程度上提升西咪替丁注射液有关物质测定准确度，能够取得令人满意的结果，值得在西咪替丁注射液有关物质测定中应用与推广。

参考文献：

[1]解斐，凌霄，吴敬德.HPLC法测定氟胞嘧啶及其注射液中氟尿嘧啶有关物质[J].药物分析杂志，2010（02）：148-149.

[2]邢晋华，王永霞.HPLC法测定盐酸帕诺洛司琼注射液的有关物质[J].齐鲁药事，2010（01）：124-125.

[3]殷飞，王雪芹，李洁.HPLC法测定硫酸罗通定注射液的含量及有关物质[J].中国药事，2010（02）：169-170.