铁皮石斛对急性酒精肝损伤的最适修复浓度范围的探究

铁皮石斛对急性酒精肝损伤的最适修复浓度范围的探究

姚依韬胡俊白妍妍冯振国李久成张女

长沙医学院湖南长沙410000

【摘要】目的：本实验来探究不同浓度的铁皮石斛对酒精肝损伤的最适修复浓度范围方法：选取km小鼠将其分为空白对照组、模型组、铁皮石斛提取物高（500mg/kg）、中（300mg/kg）、低（100mg/kg）剂量组，除空白对照组外，其余各组采用酒精灌胃的方式来进行建模，空白对照组灌胃等量的蒸馏水，连续2周。建模后再将其灌胃相应的药物。14天后，测定小鼠血清中谷草转氨酶（AST）,谷丙转氨酶（ALT）的活性，并取其肝脏观察它们相应的形态学变化。结果：与模型组相比，灌胃不同浓度铁皮石斛提取物后，小鼠血清AST、ALT水平含量下降，尤其铁皮石斛提取物低剂量组（100mg/kg）水平显著下降（P<0.05）。结论：低浓度组的铁皮石斛对酒精肝损伤的修复作用是其最适修复浓度

[关键词]铁皮石斛急性酒精肝损伤浓度

现在，由于生活水平的提高，酒精性肝病[1]的发生率大大提高，酒精的滥用造成了肝脏的损伤，初期表现为脂肪肝，后发展为酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化[2]甚至肝癌。因此，许多专家一直在研究治疗酒精肝损伤的理想药物。铁皮石斛[3]是一种中药材，其用途越来越广泛。随着对铁皮石斛成分的知晓，其主要成分为双苄酚类及菲酚类化合物[4]，黄酮、毛兰素等。随着研究的深入，铁皮石斛在抗肿瘤[5]、增强免疫力、降血糖、酒精肝损伤修复、抗衰老[6]等方面都有作用。但是目前国内外对铁皮石斛的研究重点还是铆钉于对癌细胞抑制作用方面和其对不同地区栽培出的含量差异的研究。对脏器的作用研究还很缺乏。尤其是对小鼠酒精肝[7]损伤修复作用的研究。基于此，本次课题以动物实验为基础，来研究不同浓度的铁皮石斛提取物对小鼠酒精肝损伤的保护作用以及其对肝脏修复的最适浓度范围，从而对今后临床上治疗酒精性肝病的相关研究提供依据。

1资料与方法

1.1实验材料

（1）实验动物：km小鼠25只20±2（g）雄性

（2）实验器材：实验室一般器械谷丙转氨酶ALP/GPT试剂盒光学显微镜血液检测仪血液分析仪分光光度计谷草转氨酶AST/GOT试剂盒

1.2实验步骤

（1）建模及给药将雄性小鼠随机分成五组：空白对照组、模型组、石斛提取物高（500mg/kg）、中（300mg/kg）、低（100mg/kg）剂量组，分别编号为1、2、3、4、5组。先将小鼠培养14天后，再给药，给药时除空白对照组外其余各组灌胃体积分数为50%的酒精0.020ml/g建模，空白对照组灌胃等量的蒸馏水，每天下午灌胃一次，连续14天。建模后，将后面三组分别灌胃等量高（500mg/kg）、中（300mg/kg）、低（100mg/kg）剂量的铁皮石斛提取物。一天灌喂一次，连续14天。

（2）小鼠血清生化指标检测最后一次给药结束后，禁食12h，于次日上午摘取眼球取血，分离血清，后再测定小鼠血清中AST、ALT的活性。

（3）肝脏病理学检查处死后剖取其肝脏，将其用体积分数为4%甲醛溶液进行固定，后用HE染液进行染色，制作成切片在光镜下进行组织病理学检验，观察肝细胞的形态、排列、细胞的完整性以及脂肪变性及坏死程度的变化。

1.3数据处理

采用SPSS15.0软件进行统计学分析，结果用平均值±标准差（x±ｓ）表示，n为样本量，组间比较采用方差分析，并用t检验。

2结果

2.1血清ALT、AST指标分析

与空白对照组相比，小鼠血清中ALT、AST含量明显上升（p<0.01）,表示建模成功，小鼠的肝脏得到了损伤。与酒精模型组进行比较，给药三组中小鼠血清ALT、AST含量下降（P<0.01）,其中中高剂量的铁皮石斛对小鼠ALT、AST含量下降不高，尤其高剂量组的AST、ALT的含量与空白对照组相比还有点偏高，提示高剂量对小鼠酒精肝损伤的修复程度并不高或者对小鼠肝脏还有一定影响。为此，以后实验可以将高剂量展开研究，研究高剂量组的铁皮石斛提取物浓度到底对酒精肝损伤的修复程度有多大。但通过与空白对照组和模型组对比，低剂量（100mg/kg）组的铁皮石斛提取物对小鼠血清中ALT、AST含量下降尤为明显，由此可知，低剂量组（100mg/kg）对小鼠肝脏损伤修复效果最好，低剂量组的铁皮石斛浓度也是本次实验的最适修复浓度范围，因此以后实验可以从低剂量组来进行研究，在低剂量的浓度范围中研究哪种浓度的铁皮石斛提取物对酒精肝损伤的修复效果是最佳的。

2.2肝脏标本病理检查

通过对肝组织切片的观察，空白对照组小鼠肝组织结构正常，形态结构完整，肝细胞排列整齐，，并且以中央静脉为中心成放射状排列，肝组织中也未见有脂肪性变和白色空泡样变，细胞核染色深，胞质染色均匀。模型组由于受到酒精的损伤，肝索排列紊乱，形态不完整，染色变淡，边境不清晰，肝细胞中出现严重的脂肪性变和成水样壮变性。细胞核染色变浅，肝细胞出现肿大，并且出现了不同程度的肝组织坏死。中浓度剂量组和高浓度剂量组与模型组相比，有较大改善，肝细胞相对完整，染色也相对均匀。但与空白对照组相比，有少量的包浆水样性变和白色空泡样变，尤其高浓度剂量组出现这种现象较明显，从而表现出高剂量组对酒精肝损伤的修复现象不怎么明显。

低剂量组的肝索排列整齐，边境清晰，肝组织中未见脂肪性变，和正常组的对比，差别不大，细胞核染色深，胞质染色均匀，与模型组比较，对酒精肝损伤得到修复现象尤为明显，效果最佳。

A为空白对照组；B为模型组；C为低剂量组；D为中剂量组；E为高剂量组

3讨论

肝脏是主要的生物代谢场所，长期大量饮酒是造成酒精肝的主要原因[8]。现如今，越来越多的专家学者开始研究治疗酒精肝损伤的理想药物日益成为一个热点话题。评价肝功能的指标是测量肝脏中AST、ALT的含量，而本实验恰是通过检测AST、ALT的含量以及通过制作肝脏切片来进行探究不同铁皮石斛浓度对酒精肝损伤的最适修复浓度。

综上所述，通过本研究表明，铁皮石斛对酒精肝损伤具有一定的修复作用并且低浓度范围的铁皮石斛提取物对其酒精肝损伤的修复能力更强，效果更好。

[参考文献]

[1]高潇雪,刘立新.酒精性肝病流行病学及发病机制研究进展[J].中华消化病与影像杂志(电子版),2016,6(02):62-65.

[2]周园，黎小妍，熊天琴，等．高良姜对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用［Ｊ］.北方药学，2012（7）:30-31.

[3]李玲，邓晓兰，赵兴兵，等．铁皮石斛化学成分及药理作用研究进展［Ｊ］．肿瘤药学，２０１１（２）：９０－９4．

[4]高正，杨兵勋，陈立钻铁皮石斛的应用进展[J]．中国现代应用药学杂志，2008；25（8）：693-5.

[5]郑秋平.铁皮石斛中抗肿瘤活性物质的分离纯化[D].华南理工大学,2014：16.

[6]唐汉庆,韦祎,卢兰,陈桦,李晓华,朱晓莹,劳传君.铁皮石斛对小鼠端粒酶活性及抗衰老能力的影响[J].中国老年学杂志,2016,36(08):1809-1811.

[7]高潇雪,刘立新.酒精性肝病流行病学及发病机制研究进展[J].中华消化病与影像杂志(电子版),2016,6(02):62-65.

[8]CHIOBK,KIMTW,LEEDR,etal.Apolymethoxyflavonoids-richCitrusaurantiumextractamelioratesethanol-inducedliverinjurythroughmodulationofAMPKandNrf2-relatedsignalsinabingedrinkingmousemode［Ｊ］.PhytotherRes，2015，29（10）：1577—1584.