浅谈梅毒螺旋体实验室检查标本的采集与规范操作

浅谈梅毒螺旋体实验室检查标本的采集与规范操作

王祥

王祥

（达州市宣汉县第三人民医院；四川达州636150）

梅毒螺旋体又称苍白密螺旋体苍白亚种，是导致人类患梅毒疾病的病原体，也是以人为唯一宿主的少见病原体。在临床慢性性传播疾病中，梅毒是常见病种之一，对人类健康的危害性也较为严重。临床根据感染途径的不同，将梅毒分为先天性梅毒及获得性梅毒，先天性梅毒是梅毒螺旋体通过孕妇的胎盘垂直传播给胎儿，致使胎儿发生感染；获得性梅毒则主要通过性接触传播感染，极少数情况下接吻、哺乳及接触带有梅毒螺旋体的分泌物也可发生感染。临床根据梅毒患者病程的不同，又将获得性梅毒分为三期，即Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期梅毒。

由于梅毒螺旋体在不含有活体细胞的培养基中无法完成生长繁殖，梅毒的诊断主要依赖于临床标本中的病原体直接检查和血清学诊断，检查方法的选择主要取决于患者的临床表现和标本类型，即检查方法的选择因梅毒患者的病程、取材部位的不同而异。潜伏期梅毒患者临床症状、体征不明显，多采集血液标本检测梅毒抗体或反应素为主要手段；Ⅰ期梅毒(又称为硬下疳期)患者，外生殖器易形成硬结、溃疡，溃疡部位渗出液中含有大量的梅毒螺旋体，此阶段的感染性较强，用暗视野显微镜容易查见梅毒螺旋体，此期多采集硬下疳渗出液，用暗视野显微镜直接查找运动活泼的梅毒螺旋体活体或镀银染色光学显微镜查找梅毒螺旋体死体为实验室常用检查手段，Ⅰ期梅毒末期，也可以采集患者的血液标本检测梅毒螺旋体抗体或是反应素；Ⅱ期梅毒患者，往往全身皮肤、粘膜出现梅毒疹和淋巴结肿大，其中含有较多梅毒螺旋体，有较强的传染性，血清学反应几乎100%为阳性，此期以采集血液标本检测梅毒抗体或反应素为主，也可采集患者皮损渗液或局部淋巴结抽出液于暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体；Ⅲ期梅毒患者，由于病程较长，病变可波及全身组织、器官，其基本损害为慢性肉芽肿和局部组织坏死，皮肤、肝、脾和骨骼常被累及，甚至侵害中枢神经系统而引起神经性梅毒，此期患者的梅毒血清学反应常为阳性，多采集患者血液、脑脊液标本做梅毒血清学检测。

在梅毒实验室检查过程中，注重各种标本的规范采集与处理，对保证检测结果的准确性至关重要。常用几种标本的规范化采集与处理方法如下：1、血清标本采集：宜用促凝管采集静脉血2~5ml，保持室温静置1~2h或37℃水浴0.5h，待血液完全凝固，血块收缩时，离心机分离血清备用，离心条件为3000r/min，10~15min；新鲜血清可-20℃冷冻保存备用，保存的标本应尽量避免溶血、脂血及污染等，以免对实验结果造成影响。2、血浆标本采集：采集抗凝静脉血2~5ml，颠倒混匀数次，一般为10次左右，离心机分离血浆备用，离心参数为3000r/min，10~15min。3、硬下疳、溃疡、梅毒疹等皮损组织渗出液标本采集：用0.9%氯化钠溶液浸湿棉拭子后，擦净皮损表面污渍，以刮勺轻轻刮擦皮损表面，同时挤压患者的皮损部位，取渗出液与生理盐水混合，加盖玻片立即用暗视野显微镜镜检或渗出液直接涂片镀银染色镜检；核酸检测时，将与皮损渗出液标本同法取得的渗液标本加入盛有1ml/管的DNA保存液标本管中备用。4、淋巴结穿刺液：穿刺前清洁患者皮肤，保持整个穿刺过程无菌操作，穿刺后向其淋巴组织内注入0.3ml生理盐水，反复抽吸3次后，吸取少量淋巴液，滴于载玻片上，加盖玻片后，立即暗视野显微镜镜检。5、脑脊液标本采集：患者取侧卧位，双手抱膝紧贴于腹部，身躯呈弓形，患者的第3至第4腰椎棘间隙为最适穿刺点，用2%利多卡因对患者实施局部麻醉。施术者以非惯用手固定穿刺部位皮肤，惯用手则持穿刺针缓慢刺入，穿刺角度垂直于患者背部，针尖稍向患者头部方向倾斜，不同采集对象进针深度略有不同，成人一般进针深度为4-6cm，儿童2-4cm。当阻力突然消失，感觉有明显落空感时，表明针尖已刺过患者的韧带及硬膜，此时将针芯缓慢抽出，可见脑脊液流出，及时留取适量标本备用。

实验室检查是目前确诊梅毒感染的主要手段，且具有检查标本获取容易，操作简单、检测速度快、检测成本较低，可大大缩短患者的就诊时间，有利于及时、早期展开治疗，控制疾病发展，减轻患者痛苦及经济负担。不过，要确保实验室检测结果的准确性，得到符合送检要求的检查标本质量是基本的前提和保障。为了保障标本质量，在标本的采集、运送、保存过程中，不仅必须严格按照既定标准规范操作，还应该注重理化因素对病原体的影响，如梅毒螺旋体对外界环境的抵抗能力极弱，对干燥、冷、热及化学消毒剂都比较敏感，一般梅毒螺旋体在体外干燥环境中1~2小时即会死亡，温度超过50℃，时间超过5min会导致病原体死亡，尤其肥皂水等碱性液体，数分钟内即能将其杀死。同时，标本接收也应该有严格的执行标准，如核对送检标本和送检申请单信息的一致性，检查标本容器/管子有无破损、渗漏或溢出，血液标本有无溶血、黄疸及微生物污染等。

总之，梅毒作为一种传染性较强的性传播疾病，实验室检查在梅毒螺旋体感染的诊断、治疗、预防及疗效观察中具有重要作用和价值，为了保障检查结果的准确、可靠，确保患者的早期诊断和治疗，在梅毒螺旋体这类感染性疾病标本的采集、运送、处理及检测过程中，应严格按照操作规程标准操作，杜绝操作方法、流程错误的发生，避免传染性疾病的误诊、漏诊，有利于提高检查、检验质量和实验室安全及感染风险管理能力，为梅毒的临床诊疗和防治工作提供可靠依据和有力保障。