羟丙基β-环糊精作为流动相添加剂对硝基苯胺的拆分分析

羟丙基β-环糊精作为流动相添加剂对硝基苯胺的拆分分析

白蓉白熙

白蓉1白熙2

（1山西襄垣后堡潞安集团山西长治046200；2山西长治医学院化学教研组山西长治046000）

【摘要】以羟丙基β-环糊精作为流动相添加剂，于C18反相柱上建立了位置异构体硝基苯胺的高效液相色谱拆分方法。在选定的三种最优条件下，硝基苯胺都获得了较好的基线分离。结果令人满意。此外还对其拆分机理进行了分析。

【关键词】羟丙基β-环糊精流动相添加剂硝基苯胺拆分HPLC

【中图分类号】R914【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）08-0362-02

1.引言

近年来，高效液相色谱法(HPLC)拆分对映体化合物的技术取得了突飞猛进的发展，新型手性固定相和手性流动相也不断涌现，种类繁多。β-环糊精(β-CD)及其衍生物用于手性固定相或手性流动相添加剂拆分对映体的方法显示出了良好的选择性[1-4]。对映体的分离，一般采取手性固定相法或手性流动相添加剂法两种色谱分离模式。本章主要介绍以羟丙基β-环糊精为流动相添加剂来拆分一些手性化合物。

2.实验部分

2.1仪器与试剂

高效液相色谱仪（Agilent1050），紫外-可见波长检测器（Agilent1050），色谱数据工作站（浙江大学N2000），高压恒流泵(Agilent1050),AS3120超声波清洗器(昆明市超声仪器有限公司)，pH-3TC型pH计（上海天达仪器有限公司），BS110S型电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。

羟丙基β-环糊精（山东新大精细化工有限公司）；甲醇（洛阳市化学试剂厂）；乙酸（洛阳市化学试剂厂）；三乙胺（天津市科密欧化学试剂有限公司）。所用试剂均为分析纯。

测定样品：硝基苯胺（上海试剂三厂）。

2.2色谱分离条件

色谱柱：SHIM-PACKVP-ODS柱，5μm，250mm×4.6mm（Shimadzu,Japan）;流动相：含0.6mmol/L羟丙基β-环糊精的醋酸三乙胺缓冲液/甲醇（pH=4.1），醋酸三乙胺缓冲液和甲醇的比例分别取60/40，70/30，80/20(v:v)；流速：0.5mL/min；柱温：30℃；检测波长：254nm；进样量：5μL。

3.结果与讨论

表1给出了硝基苯胺在三种流动相下的拆分结果，我们可以在在这三种固定相上得到临-、间-、对-的硝基苯胺。并且它们的都可以达到基线分离，分离效果较好。Rs2都可以达到2以上，其中在80：20的流动相下达到了2.99。图1是硝基苯胺在三种流动相下的拆分色谱图。

表1硝基苯胺在三种流动相下的拆分结果

k1：容量因子；α：分离因子；Rs：分离度。流动相为醋酸三乙胺缓冲液和甲醇按上述比例配置。

图1A流动相为醋酸三乙胺缓冲液/甲醇=60/40（体积比pH=4.1），B流动相为醋酸三乙胺缓冲液/甲醇=70/30（体积比pH=4.1），C流动相为醋酸三乙胺缓冲液/甲醇=80/20（体积比pH=4.1）。流速：0.5mL/min,柱温：30℃，检测波长：254nm。

4.手性识别机理

β-环糊精(β-CD)是由多个葡萄糖分子以1,4-糖苷键相连的七元环状低聚糖化合物,其分子中空并呈“V”型的圆桶状构造。组成β-环糊精的每个葡萄糖单元有5个手性碳原子,由m个葡萄糖单元构成的CD分子将有5m个手性中心,因而作为主体分子能够提供给客体分子一个良好的不可多得的不对称环境。其手性识别机制主要依赖于对映体分子能否进入β-环糊精的空腔及其紧密程度,通过两对映体与β-环糊精不同的相互作用,所形成的非对映体络合物的保留差异和稳定性差异,从而实现对映体的分离[5-7]。而羟丙基β-环糊精又为客体分子提供了一个羟丙基的空间位阻，使得客体分子更加容易被拆分

5.结论

羟丙基β-环糊精作为流动相添加剂对硝基苯胺有非常好的拆分能力，且出峰顺序是为间-、对-、临-。所得到的三个峰全部达到基线分离。

参考文献

[1]SybilskaD,ZukowskiJ,BojarskiJ.Resolutionofmephenytoinandsomechiralbarbituratesintoenantiomersbyreversedphasehighperformanceliquidchromatographyviaβ-cyclodextrininclusioncomplexes.JLiqChromatogr.1986,9(2&3):591.

[2]SybilskaD,ZukowskiJ.Chapter7.Cyclodextrinadditives.In:KrstulovicAM.ChiralSeparationsbyHPLCApplicationstoPharmaceuticalCompounds.Chichester:EllisHorwoodLimited.1989,147-174.

[3]UekamaK,HirayamaF,NasuS,etal.Determinationofthestabilityconstantsforinclusioncomplexesofcyclodextrinsofcyclodextrinswithvariousdrugmoleculesbyhighperformanceliquidchromatography.ChemPharmBull.1978,26:3477.

[4]DurhamDG,LiangH.Molecularmodellingoftheinclusioncomplexesbetweenβ-cyclodextrinand(R)/(S)-methylphenobarbitoneanditsapplicationtoHPLC.Chirality.1994,6:239-244.

[5]HorváthC,MelanderW,MelanderJ,etal.Measurementofassociationconstantsforcomplexesbyreversed-phaseHPLC.J.Chromatogr.A.1979,186:371-403.

[6]梁宏,DURHAMDG.HPLCβ-环糊精手性流动相添加剂的研究:Ⅴ.甲基β-环糊精动态覆盖手性色谱固定相模型的提出[J].中国药科大学学报.1999,30(1):27-30.

[7]姚彤炜,曾苏,丁海青.环糊精类手性流动相添加剂及其在药物分析中的应用[J].色谱.1996,14(2):106-110.