人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局探究

人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局探究

费黎明钟玲红杨贵忠龙智慧王伟善赫义龙张

长沙生殖医学医院410000

【摘要】目的：探究分析人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及其妊娠结局。方法：选取2013年3月至2016年1月期间，在我院生殖中心行玻璃化冷冻解冻患者，其中有卵裂期胚胎解冻420个周期（卵裂组），囊胚解冻120个周期（囊胚组），比较两组患者玻璃化冷冻解冻后的复苏效果及妊娠结局。结果：两组患者的复苏率、流产率及异位妊娠率比较无显著差异（P>0.05）；囊胚组的妊娠率57.5%和种植率45.76%，均要优于卵裂组的妊娠率44.29%和种植率23.98%（P<0.05）；卵裂组中卵裂球完全存活患者的妊娠率及胚胎种植率优于囊胚组中胚胎完全存活患者的妊娠率及胚胎种植（P<0.05），具有统计学意义。结论：囊胚解冻移植的妊娠结局要好于卵裂期胚胎。

【关键字】卵裂期胚胎；囊胚；玻璃化冷冻；

近年来，冻融胚胎移植（FET）已经成为辅助生殖技术不可缺少的技术，其中玻璃化冷冻式是最常用的方法。该方法具有安全稳定、可靠、易操作等优点[1]，已经成为卵裂期胚胎和囊胚的首选冷冻方法。本次研究将卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局进行比较，现报道如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

本次研究选取2013年3月至2016年1月期间，在我院生殖中心行玻璃化冷冻解冻患者，其中有卵裂期胚胎解冻420个周期（卵裂组），囊胚解冻120个周期（囊胚组），患者年龄26~48岁，平均年龄（32.35±3.62）岁；其中不孕原因包括：排卵障碍60例，输卵管问题268，男方因素162例，不明原因50例。两组患者的年龄、不孕原因等一般资料无显著差异（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1移植的胚胎选择

卵裂期胚胎随机选择D3天6-10细胞的Ⅰ、Ⅱ级胚胎，具有良好的着床潜能。

囊胚随机选择D5和D6，评级3BB以上囊胚，囊胚的评级方法采用常规的六级评分法。

1.2.2玻璃化冷冻方法

囊胚在冷冻前需要进行人工皱缩，本次研究采用激光打孔法：选择远离内细胞团，滋养层细胞少的地方打孔，打孔后以看到囊胚腔有皱缩即可，10~15min后行玻璃化冷冻。采用加藤玻璃化试剂盒，预先平衡至室温。卵裂期胚胎，先在缓冲液中平衡1分钟，再移至冷冻平衡液ES中平衡8-10分钟，以皱缩后的卵裂球体积回复80%时，即可移至玻璃化液中，洗涤3-5个位置，充分去掉ES液，即可装载胚胎；同法，使囊胚在ES玻璃化平衡液中6-8min，然后移至玻璃化液中，洗涤3-5个位置，装载胚胎，投入液氮中即可。

1.2.3胚胎的玻璃化解冻

先将解冻a液平衡至37℃，然后迅速将解冻胚胎放入解冻液a中，持续1min后，将胚胎转移至解冻液b、c、d各持续3min，最后将胚胎移入卵裂分别用培养液洗涤3-5滴（卵裂期用1026、囊胚用1029），继续培养2~3h。解冻后的胚胎卵裂球细胞数≥50%总细胞数即为胚胎复苏[2]。依据卵裂球的复苏情况可将卵裂期胚胎分为卵裂球完全存活组和非完全存活组。

1.2.4胚胎移植方法

内膜随机自然周期或者激素代替周期准备好子宫内膜，内膜厚度为9-13mm，无异常。每移植周期的胚胎数均为2枚。

1.3观察指标

妊娠以移植后14天尿检阳性，以及血β-HCG≥100pg/ml者为妊娠。

胚胎种植以移植后35B超，统计孕囊数。

1.4统计学方法

采用统计学软件SPSS13.0对所有资料进行分析处理，计数资料使用（n，%）表示，用χ2进行检验，P<0.05具有统计学意义。

2结果

2.1两组患者的妊娠结局

由表1可见，两组患者的复苏率、流产率及异位妊娠率比较无显著差异（P>0.05）；囊胚组的妊娠率57.5%（69/120）和种植率45.76%（89/190）均要优于卵裂组的妊娠率44.29%（186/420）和种植率23.98%（246/995）（P<0.05），具有统计学意义。

*与卵裂组比较，P<0.05。

2.2卵裂组中卵裂球完全存活组和非完全存活组的妊娠结局

卵裂组中分为卵裂球完全存活组和非完全存活组，其中卵裂球完全存活组妊娠率为44.62%、种植率为25.69%，而非完全存活组妊娠率为29.26%、种植率为14.21%，两组之间比较差异显著（P<0.05），具有统计学意义。

3.讨论

胚胎玻璃化冷冻技术已经广泛应用于国内外的生殖中心，几乎已经替代传统的慢速冷冻技术，成为辅助生殖技术的重要组成部分。体外受精-胚胎移植（IVF-ET）技术[3]治疗不孕不育患者时，需要依据对取卵患者的情况进行评估，确定新鲜周期能否移植。若不能移植，根据胚胎的情况，结合患者的意愿，进行卵裂期胚胎的冷冻或者行囊胚培养后再冷冻。胚胎冷冻技能具有避免浪费优质胚胎、降低胚胎移植数量等优点，而且冻融胚胎移植相比新鲜周期胚胎移植，在种植率、妊娠率和流产率等方面更具有优势。

本次研究中采用的玻璃化冷冻解冻是近年来临床常用的胚胎冷冻技术，与以往的传统慢速冷冻解冻技术相比，具有复苏率高、方便简洁、节省时间等优势。玻璃化冷冻解冻技术是通过高浓度的冷冻液和快速冷却技术使液体能够快速转变为非晶体，保持其溶液状态的分子和离子的分布。在冷冻和解冻的过程中冷却液不会在液体和晶体形态中转换，避免晶体对细胞的损坏，从而能够获得最佳的冷冻效果。囊胚腔内的液体会使囊胚在玻璃化冷冻的过程中形成晶体，影响囊胚的存活质量，使囊胚的冷冻效果变差。本次研究中在玻璃化冷冻前对囊胚进行人工皱缩，然后再进行玻璃化冷冻，能够获得比卵裂期胚胎更好的复苏率，但差异并不明显。同时本研究结果表明囊胚冷冻胚胎移植与卵裂期胚胎相比，前者种植率和妊娠率都远高于后者，因此辅助殖技术中，行囊胚培养后再移植，可能是一个趋势。

综上所述，人卵裂期胚胎和囊胚采用玻璃化冷冻解冻是适合的冷冻方法，而且能够达到理想的复苏效果。卵裂期的胚胎解冻后胚胎的完整性与临床妊娠率和胚胎种植率密切相关。囊胚移植需要选择优质胚胎从而提高胚胎的种植率和临床妊娠率。

参考资料：

[1]赵芳，吕玉珍，王娟，宋文月.人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻妊娠结局分析[J].中国妇产科临床杂志，2014，06（8）：538-540.

[2]薛林涛，黄莉，何冰，谭卫红，王世凯，成俊萍，覃捷，刘睿智.玻璃化冷冻人活检后不同发育时期胚胎的研究[J].中国妇幼保健，2013，36（11）：6010-6013.

[3]赵芳，吕玉珍，王娟，田可可.激光辅助孵化对冻融卵裂期胚胎和囊胚移植妊娠结局的影响[J].国际生殖健康/计划生育杂志，2015，04（21）：286-289.