顺铂耳毒性豚鼠耳蜗Connexin26的表达

顺铂耳毒性豚鼠耳蜗Connexin26的表达

张翠翠

张翠翠（山东中医药高等专科学校山东烟台264100）

【摘要】目的检测顺铂耳毒性豚鼠耳蜗中Connexin26表达，探讨顺铂耳毒性与Connexin26关系。方法免疫组化法检测对照组和实验组Connexin26表达。结果Connexin26阳性率对照组99.25%,实验组38.12%。结论Connexin26表达减少与顺铂耳毒性相关。

【关键词】顺铂耳毒性Connexin26

【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）29-0206-02

顺铂用于肿瘤化疗，主要副作用是耳毒性。本研究通过免疫组化法检测顺铂耳毒性豚鼠耳蜗Connexin26，探讨顺铂耳毒性与Connexin26关系。

1实验方法

豚鼠30只，随机分成两组，实验组2mg/kg/d顺铂，对照组等量的生理盐水，连续腹腔注射6d。1.1石蜡切片制备断头后取出耳蜗，刺破圆窗膜，从蜗顶注入40g/L多聚甲醛，PBS中固定2h，40g/LEDTA脱钙14天，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，沿蜗轴切片。

1.2免疫组化法切片经PBS冲洗，滴加3%H2O2孵育15min。水洗后滴加5%BSA孵育20min，甩去多余液体，滴加一抗，37℃孵育1h，PBS冲洗。加二抗孵育20min后PBS冲洗，DAB显色，复染、脱水、透明、树胶固定。PBS代替一抗作为阴性对照。每张切片在高倍镜(×400)下数出视野中细胞数及阳性细胞数，计算阳性细胞的百分率。

1.3统计学处理SPSS11.5软件，采用t分析p<0.05有统计学意义。

2结果

Connexin26阳性染色主要位于细胞质（如图1，2）。Connexin26在对照组及实验组阳性表达率为99.25%，38.12%，实验组Connexin26阳性细胞率下降，有显著差异(P<0.05)。

图1对照组Connexin26表达(×400)图2实验组Connexin26表达(×400)

3讨论

缝隙连接是细胞间连接形式，参与细胞间通讯，细胞生长调控。缝隙连接由六个间隙连接蛋白(Connexin)聚合而成[1]。缝隙连接转移细胞间的信号，调节细胞内外液体、离子的分布，对机体的代谢平衡和生长发育起重要作用[2]。Connexin下调或缺失导致细胞间通讯障碍[3]。Connexin26是缝隙连接蛋白家族的一员，Kiluchi等人发现Connexin26在哺乳动物耳蜗高表达，在毛细胞受到外界刺激后钾离子回流至内淋巴液的过程中有重要作用[4]。Connexin26减少，钾离子进入内淋巴液循环受影响，导致耳聋[5]。

Connexin26在实验组中的阳性表达率较对照组明显降低(P<0.05)。Connexin26减少使缝隙连接通透性降低，细胞间信息传递受阻，使细胞内外的离子浓度改变导致听力障碍。

综上，Connexin26减少与顺铂耳毒性有密切关系。Connexin26在顺铂耳毒性的发生、发展过程中所起的作用尚需进一步研究。

参考文献

[1]秦维香,张晓艳,吕振涛.Connexin26在乳腺癌中的表达及意义.实用肿瘤学杂志2008,22(2)140-142.

[2]EVANSWH,MARTINPEM.Gapjunctions:structureandfunction[J].MolecularMembraneBiology,2002,19:121-136.

[3]DmoriY,Duflot2DancerA,MesnilM,YamasakiH1Roleofconnexin(gapjunction)genesincellgrowthcontrol:approachwithsitedirectedmutagenesisanddominantnegativeeffects[J].ToxicolLett,1998,962(97):105-110.

[4]KiluchiT,KimuraRS,PaulDL,etal1Gapjunctionsintheratcochlea:immunohistochemicalandultrastructuralanalysis1AnatEmbryol,1995;191:101.

[5]付四清,胡晓峰,陈观明,董家曙先天性耳聋患儿Connexin26基因235delC突变研究.中国妇幼保健2004,19(2)60-61.