磁珠浓缩法与酶联免疫法检测HBsAg比较与应用

磁珠浓缩法与酶联免疫法检测HBsAg比较与应用

唐劲松

唐劲松

(东莞市大朗医院检验科523770)

【摘要】目的比较磁珠浓缩法与酶联免疫法（ELISA）检测HBsAg灵敏度和阳性检出率，选用较好的方法用于低浓HBsAg的测定。方法ELISA检测HBsAg为强阳性的血清标本40份，混合为HBsAg强阳性混合血清，用化学发光法检测HBsAg全阴性血清稀释成46例浓度不同的HBsAg阳性血清，然后分别用磁珠浓缩法、酶联免疫法和化学发光法检测。结果磁珠浓缩法检测46份标本阳性例数42例，最低检出浓度0.1IU/mL，ELISA检出阳性标本33例，最低检出浓度0.5IU/mL，磁珠浓缩法灵敏度和检出率明显高于ELISA(P<0.01)。结论磁珠浓缩法可明显提高ELISA检测HBsAg的灵敏度和阳性检出率，具有一定的研究意义。

【关键词】HBsAg灵敏度磁珠浓缩法

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）34-0208-02

乙型肝炎病毒(HBV)感染简称乙肝，是一种严重危害人类健康的疾病，在我国感染率相当高。乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是乙肝诊断及治疗评估中非常重要的血清学标志物。研究表明，低浓度HBsAg人群在我国占有不小比例(占HBsAg阳性人群22.01%)[1]。如果漏检，可能导致HBV通过手术、输血、母婴垂直等途径传播。有效检测低浓度HBsAg，具有重要的临床和流行病学意义。本文采用磁珠浓缩法和酶联免疫法（ELISA）检测不同浓度HBsAg阳性标本，比较两种方法灵敏度和阳性检出率，旨在为低浓度HBsAg血清提供敏感、实用的检测方法。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1标本来源收集2012年期间在本医院接受抗病毒治疗的乙型肝炎患者，经ELISA检测HBsAg为强阳性的血清标本40份，混合为HBsAg强阳性混合血清，用经化学发光法检测乙型肝炎标志物全阴性血清稀释成46例浓度不同的HBsAg阳性血清。

1.1.2仪器和试剂羧基磁珠和磁分离架由上海奥润微纳新材料科技有限公司和无锡中德伯尔生物技术有限公司提供，HBsAgELISA试剂盒由厦门英科（新创）生物有限公司提供。酶标仪为法国Mutiskan-MK3，美国贝克曼DXI-600全自动化学发光免疫分析仪和配套试剂。

1.2方法分别用磁珠浓缩法[2]、酶联免疫法和化学发光法检测46例浓度不同的HBsAg阳性血清，酶标仪测定HBsAg的吸光度值，并计算S/CO值(吸光度值与临界值的比值)。当S/CO值≥l时，结果为阳性；S/CO值<1时，结果为阴性[3]。

1.3统计学分析采用SPSSI3.0统计软件进行统计分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

磁珠浓缩法检测46份标本阳性例数42例，最低检出浓度0.1IU/mL，ELISA检出阳性标本33例，最低检出浓度0.5IU/mL灵敏度和检出率明显高于与ELISA(P<0.01)，见表1。

表1三种方法测定HBsAg结果比较

3讨论

我国是一个乙肝高发国家，HBV感染的诊断工作对乙肝的防治工作有重大意义。目前一般认为HBsAg阳性是HBV感染的标志，乙肝两对半作为HBV感染最常用的检测，在我国各级医院广泛开展。目前我国检测乙肝两对半的方法主要有金标法、酶免法、化学发光法和电化学发光法，其中酶免法应用最广泛。在高浓度HBsAg标本中，上述检测方法区别不大，但是在低浓度HBsAg标本中，各种方法检测结果可能不同。在乙型肝炎病毒感染的“窗口期”、急性期后或恢复期、自限性感染末期的携带者等情况下人体内会出现低浓度的HBsAg。低浓度HBsAg的患者体内可能存在着肝脏的持续性损伤和病毒复制，一旦发生漏检就会严重影响临床诊治和输血安全，应该引起高度重视[4]。采用微粒子酶免疫技术(MEIA)代替传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)，低浓度HBsAg的检出率得到显著提高。MEIA法虽然具有重复性好，安全封闭，操作不易被污染的优点，但由于需要大型仪器，成本较高，基层医院很难普及，检测费用也比较高，不为大多数患者承受，有一定的局限性。ELISA法操作简便快速，试剂成本低，适用于大批量人群的筛查试验，对高浓度HBsAg检测可与某些先进技术相媲美，但是灵敏度比较低，对低浓度HBsA易漏诊。如何比较有效和经济的提高ELISA检测HBsAg的灵敏度是研究的重点。

磁珠(MagneticBeads)是一种由磁性材料和非磁性聚合物材料复合而成的新型功能微球。磁珠已广泛应用于蛋白质的分离提纯、细胞分离、酶的固定以及免疫分析等多个领域。磁珠提取蛋白质与磁珠表面基团有关，在特定的盐离子和pH环境下，可以与蛋白质进行结合与解离[5]。Satoh等[3]使用磁珠浓缩处理标本后，其HBsAg浓缩水平提高了4～7倍。本文采用市场上广泛生产的羧基磁珠吸附血源性HBsAg样品。发现磁珠能吸附HbsAg，在一定浓度范围内，吸附能力随着HBsAg浓度的增高而增强。浓缩法有较高的灵敏度(最低检测限为0.1IU/mL)，高于ELISA，其相应的线性范围也较宽，定量的结果相对准确。磁珠浓缩HBsAg弱阳性标本，阳性检出率比ELISA高(P<0.01)。磁珠浓缩法运用于低浓度HBsAg检测，具有操作简单，快速准确，使用方便，不需要大型的仪器设备，成本低的优点。通过磁珠浓缩法能有效提高低浓度HBsAg的检出率，具有一定的研究意义。

参考文献

[1]顾晓东,俞碧霞,黄海龙.低浓度HBsAg人群乙肝标志物检测及其临床意义[J].中国卫生检验杂志.2006,16(12):1515-1516.

[2]林梅双,吴晓蔓磁珠.浓缩法在低浓度HBsAg检测中的应用[J].实用医学杂志2012,28(2):307-309

[3]SatohK,Iwata-TakakuraA,YoshikawaA,eta1.AnewmethodofconcentratinghepatitisBvirus(HBV)DNAandHBVsurfaceantigen:allapplicationofthemethodtothedetectionofoccuhHBVinfection[J].VoxSang,2008,95(3):l74-180.

[4]任建新.36例低水平HBsAg的临床检测与评估[J].中外医疗,2010,29(11):45.

[5]盖青青,屈锋,梅芳,等.磁性粒子在蛋白质分离纯化中的应用[J].化学通报,2010,73(2):99-105.