辛荑散中阿魏酸含量测定方法研究

辛荑散中阿魏酸含量测定方法研究

俞伟杨海玲周海滨周燕萍丁捷飞

俞伟杨海玲周海滨周燕萍丁捷飞

（宁波立华制药有限公司浙江宁波315174）

【摘要】目的：建立辛荑散中阿魏酸含量的反相高效液相色谱法。方法：色谱柱为依利特HypersilODS2C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：以甲醇-2%冰醋酸溶液（20:80）；柱温为38℃；流速为1.0ml/min；检测波长为323nm。结果：阿魏酸浓度在5.14～164.48μg/ml,范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9999），平均回收率为98.27%，RSD为0.57%（n=6）。结论：该方法简便、灵敏、准确、专属性强、重现性好，为产品的质量标准研究提供了理论依据。

【关键词】辛荑散；阿魏酸；高效液相色谱法；含量测定

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2016）15-0350-02

eterminationofFerulicAcidinxinyipulvisYuWei,YangHailing,ZhouHaibin,ZhouYanping,DingJiefei

Ningboliwahpharmaceuticalco.,ltd.,Ningbo,Zhejiang,China315174

【Abstract】ObjectiveToestablishtheRP-HPLCmethodforFerulicAcidinxinyipulvis.MethodsThedeterminationwascarriedoutusingtheHypersilODS2C18(250mm×4.6mm,5μm),withthemobilephaseofMethanol-2%glacialaceticacidsolution(20:80),Thecolumntemperaturewas38℃,Theflowratewas1.0ml/minandthedetectionwavelengthwasat323nm.ResultsFerulicacidconcentrationin5.14～164.48μg/ml,Thelinearrelationshipbetweentherangeandthepeakareawaslinear(r=0.9999).Averagerecoveryratewas98.27%,RSD=0.57%(n=6).ConclusionThismethodissimple,sensitiveandaccuratewithstrongspecificityandgoodreproducibility,whichprovidesthetheoreticalbasisforthestudyofthequalitystandardofthisproduct.

【Keywords】Xinyipulvis;FerulicAcid;HPLC;Contentdetermination

辛荑散，源于《重订严氏济生方》，由辛夷、白芷、升麻、木通、甘草、槁本、防风、川芎、细辛组成，主治肺虚，风寒湿邪外袭，鼻内壅塞，涕出不已，气息不通，或不闻香臭。有关测定阿魏酸含量的文献很多[2-8]，但测定辛荑散中阿魏酸含量尚未见报道。为此，本试验中采用简捷、方便的前处理方法，以反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定辛荑散中阿魏酸含量，并对测定方法进行方法学考察。现报道如下。

1.仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪、HWS-28双列八孔恒温水浴锅（上海慧泰仪器制造有限公司）；甲醇为色谱纯，冰醋酸、甲酸、乙醇为分析纯，水为超纯水；阿魏酸对照品（批号：110773-201313，中国食品药品检定研究院）；辛荑散（批号：HK140301、HK140302、HK140303）由宁波立华制药有限公司生产。

2.方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：依利特HypersilODS2C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：以甲醇-2%冰醋酸溶液

（20:80）为流动相；波长为323nm；流速为1.0ml/min；柱温为38℃。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加45%乙醇-冰醋酸（20:1）混合溶液制成每1ml含20?g的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备：取样品适量，研细，取约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入45%乙醇-冰醋酸（20:1）混合溶液25mL，密塞，称定重量，超声处理（功率300W,频率50KHZ）30分钟，放冷，再称定重量，用45%乙醇-冰醋酸（20:1）混合溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液，即得。

2.2.3阴性对照品溶液的制备：依据处方比例，按供试品溶液制备方法制备辛荑散缺少川芎、槁本、升麻、羌活的阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

2.3.1专属性试验：精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10?l，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000，分离度在1.5以上，结果阴性对照品溶液色谱中无阿魏酸色谱峰，说明测定无干扰（见图1）。

2.3.2线性关系考察：依法制备对照品溶液，分别配制成浓度为5.14?g/ml、10.28?g/ml、20.56?g/ml、41.12?g/ml、82.24?g/ml、164.48?g/ml的对照品溶液，进量样10μl,测定阿魏酸的峰面积，以峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，计算回归方程Y=37.344X+33.112，R2=0.9999（n=6）。结果表明：阿魏酸浓度在5.14～164.48μg/ml范围内呈良好的线性关系。

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图1高效液相色谱图

2.3.3重复性试验：精密称取样品（批号HK140301）适量，依法制备供试品溶液，按拟定色谱条件

分别进样测定6次。结果平均阿魏酸含量为0.22mg/g，RSD=1.6%(n=6)，表明方法重复性好。

2.3.4稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，6，12，24h进样。结果平均阿魏酸峰面积为809.45，812.63，815.41，820.22，824.63，RSD=0.74%（n=5），表明供试品溶液室温下放置24h以内稳定。

2.3.5回收率试验：取本品（批号为HK140301）约1.0g，精密称定，共6份，各精密加入阿魏酸对照品（20.56?g/ml）10ml，另精密加入45%乙醇-冰醋酸（20:1）混合溶液15ml，混匀后，依法制备供试品溶液，按拟定色谱条件平行测定3次，计算回收率，结果见表。

2.4样品含量测定

取对照品溶液和供试品溶液，按拟定色谱条件进样，按外标法以峰面积计算辛荑散中阿魏酸含量。结果批号为HK140301，HK140302，HK140303的样品中阿魏酸含量分别为0.223,0.236,0.218mg/g(n=3)。

表阿魏酸回收率试验结果（n=6）

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3.讨论

辛荑散以辛夷为本方主药，其余九味辅之，含量测定原则上首选辛夷，测定成分为木兰脂素，而经研究发现阴性对照品在木兰脂素主峰位置有严重干扰峰，经计算，该峰含量为0.0025mg/g，占主峰含量（0.0042mg/g）的59.53%，所以辛夷不适合作为含量测定的定量指标，故选择川芎、槁本、升麻、羌活中共有的有效成分之一阿魏酸作为本方含量测定的定量指标。

参考中华人民共和国药典（一部）2010年版“川芎茶调丸”项下【含量测定】的方法[1]对辛荑散中阿魏酸成分采用高效液相色谱法进行了含量测定方法学研究。在试验的色谱条件下，分别采用0.8ml/min、0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min不同流速，结果表明，流速的改变，对含量无明显变化，说明试验色谱条件因素耐用性良好。

本研究中建立的含量测定方法经方法学考察，方法简便、灵敏、准确、专属性强、重现性好，为辛荑散的质量标准研究提供理论依据。

【参考文献】

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].中国医药科技出版社,2010：472.

[2]叶芳.高效液相色谱法测定补心颗粒中阿魏酸的含量[J].中国实用医药,2009,4（9）:18-19.

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[7]刘雪松.散偏口服液中阿魏酸的含量测定[J].黑龙江科技信息,2014年（29）:96-96.

[8]潘成学,贾欣,申小静.高效液相色谱法测定阿魏酸的含量[J].医药论坛杂志,200526（18）:23-24.