结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达关系的研究

结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达关系的研究

王继栓1金湘辉1张宝军1申兴斌2

王继栓1金湘辉1张宝军1申兴斌2

（1河北承德医学院附属医院承钢分院河北承德067102）

（2河北承德医学院附属医院河北承德067102）

【摘要】目的：检测结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的特点，关注三者表达的关系及对预后的判断价值，以期为临床工作提供理论帮助。方法：收集经病理学确诊为结直肠腺癌的标本87例作为观察组，收集正常结肠粘膜组织80例作为对照组，采用免疫组织化学技术检测二组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3的表达特点，关注三者在不同临床特征中的表达不同及对预后的判断价值。结果：结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的阳性率明显高于对照组，结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达均与肿瘤淋巴结转移、淋巴结转移个数、Dukes分期及Ki67的表达密切相关。线性相关分析显示结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达之间具有正相关性。生存分析显示Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3的表达均与结直肠腺癌的预后相关。结论：结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3高表达，三者可能具有协同作用，共同促进肿瘤的发生和进展，术后联合检测Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3的表达对判断预后有一定帮助。

【关键词】结直肠腺癌；Tiam1；VEGF-C；VEGFR-3；免疫组织化学技术

【中图分类号】R735.3+7【文献标识码】B【文章编号】1003-5028（2015）5-0165-02

血管内皮生长因子-C（VEGF-C）是最早人们发现的淋巴管生成因子，也是作用最强的因子，调节过程中其主要通过其血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）发挥作用，二者具有通路作用，有效着调节着肿瘤中淋巴管的生成。T淋巴瘤侵袭转移诱导基因1（Tiam1）是一种鸟苷酸转换因子，可以特异的激活与Rac相关的通路，改变肿瘤细胞形态和功能，对肿瘤的分化、侵袭及转移有重要作用，近来相关研究认为其与肿瘤的脉管生成有关[1,2]，但是其与VEGF-C的作用尚未见报道。本研究应用免疫组织化学技术，检测结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表达，分析其在不同临床特征中的表达差别，探讨Tiam1对淋巴管生成的作用，以期为研究肿瘤的淋巴管生成提供理论支持。

1材料和方法

1.1临床材料

收集2007年1月至2010年12月我院病理科确诊的结直肠腺癌的标本作为观察组。纳入均符合WHO关于结直肠腺癌的诊断标准，患者术前均未进行任何放、化疗。本组共观察87例，其中男性47例，女性40例，年龄35-69岁，中位年龄56岁。选取距结肠腺癌边缘超过10厘米正常结肠粘膜组织作为对照组，共80例，其中男性50例，女性30例，年龄36-68岁，中位年龄55岁。二组在相关临床资料的比较中，无明显差别，具有可比性。

1.2免疫组化检测Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表达

Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3试剂的浓缩液均购自北京中杉金桥生物技术有限责任公司，实验前均进行预实验，选择最理想稀释深度用于正式实验。Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的检测采用免疫组化二步法完成，由经验丰富的病理主管技师进行操作，严格质控，减少误差。

1.3Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3染色结果的判读方法

Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白阳性染色部位为细胞质中，切片中显示为均匀的棕黄色细颗粒，选取有代表性的10个400倍显微镜视野，计算每个视野中阳性细胞的百分率后取平均值。以阳性细胞≥25%为阳性，以阳性细胞<25%为阴性。

1.4统计学处理措施

采用SAS6.12进行分析，组间的比较采用X2检验，并进行线性相关分析和生存分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在观察组与对照组中的表达比较

观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的阳性率明显高于对照组，见表1。

2.2观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的相关性关系

对观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的阳性率进行线性相关性分析，结果显示Tiam1和VEGF-C(r=0.44,P=0.0231)、VEGF-C和VEGFR-3(r=0.49,P=0.0035)、Tiam1和VEGFR-3(r=0.40,P=0.0369)的表达均呈正相关性。

3讨论

结直肠腺癌临床常见，其作为实体肿瘤，浸润、生长及转移是其重要的生物学行为，临床中发现影响结直肠腺癌预后最关键的淋巴道转移，至今人们尚未确定淋巴道转移的机制[3]。近来人们发现了以VEGF-C为代表的淋巴生成促进因子。VEGF-C是基因定位于染色体4q34，其长度为40kB，含有7个外显子，其中外显子3和4编码VEGF的同源区，外显子5和7编码富含半胱氨酸的C6XC10XCRC型的基序，外显子6编码丝蛋白典型的C10XCXC基序。VEGF-C基因表达VEGF-C蛋白，其具有419个氨基酸残基，在酶的作用下，位于227位的精氨酸和228位的丝氨酸之间发生水解，形成31000/29000的异二聚体而发挥生物学作用，VEGF-C在作用过程中，主要通过其受体VEGFR-3协同发挥淋巴管新生的作用，但是有关此通路的影响因素研究较少。

本实验对87例结直肠腺癌采用免疫组化技术进行Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的检测，结果显示三种蛋白阳性染色均定位于肿瘤细胞的细胞质中，呈均匀一致的棕黄色颗粒，其阳性率与对照组比较后发现观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的阳性率均明显高于对照组，提示Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在肿瘤进展中具有重要促进作用，即三者可以促进肿瘤的发生，并具有与癌基因类似的作用效果。实验结果显示观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3的阳性率均与肿瘤淋巴结转移、淋巴结转移个数、Dukes分期、Ki67的表达密切相关，提示Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3参与到肿瘤的淋巴道转移及细胞增殖等进展中。

综上所述，结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3具有协同作用，三者对肿瘤的进展具有促进作用，术后联合检测Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白高表达时，临床提示预后不良。

参考文献：

[1]ChenB,DingY,LiuF,etal.Tiam1,overexpressedinmostmalignancies,isanoveltumorbiomarker[J].MolMedReport,2012,5(1):48-53.

[2]DesoukiMM,LiaoS,ConroyJ,etal.Thegenomicrelationshipbetweenprimarybreastcarcinomasandtheirnodalmetastases[J].CancerInvest,2011,29(4):300-307.

[3]张志勇,姜丽,高艳敏,等.大肠癌中VEGF-D、VEGFR-3表达及淋巴管生成关系的研究[J].中国老年学杂志,2006,26(7):867-869.