甘露醇联合灯盏花素应用对大鼠视网膜神经细胞的保护作用研究

甘露醇联合灯盏花素应用对大鼠视网膜神经细胞的保护作用研究

黎春连袁华兵邓妹

黎春连1袁华兵2邓妹1

（1广东省湛江市遂溪县人民医院眼科广东湛江524000）（2广东医学院附属医院广东湛江524001）

【摘要】目的：探讨甘露醇联合灯盏花素应用对大鼠视网膜神经细胞的保护作用。方法：实验分为3组，即对照组、模型组及甘露醇联合灯盏花素组（联合组），分别测定SOD、白细胞介素-1（IL-1）、内皮素（ET）水平和细胞凋亡数。结果：神经损伤后24h联合组的视网膜神经IL-1、ET含量和细胞凋亡数高于对照组，低于模型组，差异有显著性（P＜0.05）；血清SOD含量低于对照组，高于模型组，差异有显著性（P＜0.05）。结论：甘露醇联合灯盏花素可通过抑制炎性因子、清楚氧自由基和稳定血管内皮细胞等机制发挥保护视神经细胞的作用。

【关键词】甘露醇联合灯盏花素；视网膜神经细胞；保护作用

ProtectiveeffectofcombinedmannitolandBreviscapineonretinalganglionneuronotrophicinrats

【Abstract】ObjectiveTostudytheProtectiveeffectofcombinedmannitolandBreviscapineonretinalganglionneuronotrophicinrats.MethodsTheexperimentalratswererandomizedto3group,controlgroup、modelgroupandcombinedmannitolandBreviscapinegroup.After24hourinjuryofopticnervetheSOD、IL-1、ETandapoptosisofnervecellsweremeasured.ResultsmannitolgroupIL-1andETandapoptosiswerehigherthancontrolgroupandlowerthanthoseofthemodelgroupThedifferencewassignificantly（P＜0.05）;SODwaslowerthancontrolgroupandhigherthanthoseofmodelgroup.Thedifferencewassignificantly（P＜0.05）.ConclusioncombinedmannitolandBreviscapinelcanprotectingretinalganglionneuronotrophic..

【Keywords】combinedmannitolandBreviscapine;retinalganglionneuronotrophic;protectiveeffect

【中图分类号】R774【文献标识码】B【文章编号】1007-8231（2011）10-1661-02

房水的生产速度、房水的排放速度过快及颅内压增高等疾病可导致视神经损伤，如果患上述疾病时不保护视神经，神经细胞可不可逆损伤而失明。因此，视神经受损时如何保护神经细胞，避免患者失明是眼科医生的研究课题。近年研究发现，神经损伤后白细胞介素-1（IL-1）、内皮素（ET）、SOD的改变细胞凋亡有关。甘露醇为单糖（大分子物质），在体内不能发生分解代谢，利用其高渗脱水作用，促进神经组织内水分回流入血管，使神经组织脱水并有抗氧化作用；灯盏花素有清楚自由基和抗炎作用。笔者视神经动物模型应用甘露醇联合灯盏花素治疗，效果满意报告如下：

1材料

1.1仪器：RECORV6型多导生理记录仪（西门子公司），低温高速离心机（德国SIGMA公司），紫外分光光度仪（宁波欧亿检测仪器有限公司），CK-720电热恒温箱（东莞市宏展仪器有限公司），FSCS流式细胞仪（美国BD公司）。

1.2试药：IL-1试剂盒（美国Biosourrence公司），ET放射试剂盒（上海研晶生化试剂有限公司），SOD试剂盒（武汉博士德生物工程公司），碘化丙啶（IP，美国Sigma公司），甘露醇注射液（广东永康药业有限公司），灯盏花素云南省玉溪制药有限公司产品，批号：253020708）。

1.3动物：10周龄SD大鼠60只，雌雄不限，体重（200±20）g，广东医学院实验动物中心提供。

实验动物分为3组，即对照组、模型组及甘露醇联合灯盏花素组（联合组）

2方法

2.1模型制作及给药：动物麻醉，用微型注射器在前方内持续注射生理盐水，制造眼内压升高的模型。眼内压开始增高后立即给药，给药方法：静脉注射25%甘露醇2g/kg体重和灯盏花素50mg/kg体重。每6h重复注射一次。

2.2IL-1、ED、SOD：给药24h后将各组大鼠断头处死，迅速玻璃视网膜神经，均浆、离心取上清，采用ELISA法测定IL-1，放射免疫法测定ED，黄嘌呤氧化法测定SOD。

2.3细胞凋亡数的检测：取视网膜神经组织，加生理盐水研磨制成单细胞悬液，每组悬液滴入70%冷乙醇固定，BPS离心洗涤2次（1000r/min，5min），去上清液，300目尼龙滤膜过滤，取1×106个细胞，加PI染色液混合均匀，4℃避光30min，流式细胞仪检测，每个样本获取10000个细胞，用Modfit2.0软件分析细胞凋亡数。

2.4统计方法：采用SSPSS13.0统计软件处理结果以X±s表示，多组间计数资料采用方差分析；细胞凋亡率数据采用Kruskal-wallisH检验。P＜0.05为差异有显著意义。

3结果

3.1各组大鼠视网膜神经组织IL-1、ET含量和细胞凋亡数高于对照组，低于模型组，差异有显著性（P＜0.05）；血清SOD含量低于对照组，高于模型组，差异有显著性（P＜0.05），见表1。

表1各组大鼠视网膜神经组织IL-1、ET、SOD含量与细胞凋亡数

4讨论

视神经在视神经管内，一般情况下很少直接损伤，大部分损伤是眼内压或颅内压增高所致。因此，眼内压或颅内压增高时如何保护视神经成为研究热点。IL-1是具有多向性生物功能的炎症介质，对炎症和免疫反应具有调节作用，可参与神经损伤后的病理生理改变并造成神经组织的继发损伤。神经损伤后IL-1的释放可增加黏附分子的表达，促进白细胞黏附于毛细血管或小血管壁，逐渐渗透至神经组织［1]。ET是体内一种由21个氨基酸组成的最强缩血管活性肽，由胶质细胞、血管内皮细胞分泌，与神经元胞膜上受体结合后刺激磷酸肌醇、磷脂酶A2和磷脂酶C循环，加速花生四烯酸代谢致钙超载、氧自由基大量产生，引起神经水肿、变性、坏死［2]。SOD是生物体产生的天然氧化酶，可通过歧氧化反应清楚体内的氧自由基，阻断脂质过氧化连锁反应［3]。自由基损伤在神经缺血疾病中起着至关重要的作用。SOD保护细胞免受损伤，对机体氧化和抗氧化平衡起着关键的作用，但其易受自由基攻击而失活。神经损伤后SOD减少，使氧自由基对神经组织的对神经组织损伤的第一道防线受损。SOD失活后其清楚自由基的能力下降，蓄积过剩的自由基与神经组织生物膜不饱和脂肪酸产生脂质自由基或脂质过氧化物，发生脂质过氧化连锁反应，使神经组织生物膜受到损伤，从而引起细胞水肿、损伤直至死亡。细胞凋亡是神经损伤的形式之一，其发生于多种因素有关，也是一系列有害代谢导致神经元死亡的最后共同通路。

甘露醇为单糖（大分子物质），不能通过血脑屏障，在体内不能发生分解代谢，利用其高渗脱水作用，促进神经组织内水分回流入血管，使神经组织脱水［4]，1g甘露醇可产生渗透浓度5.5mosm，注射100g甘露醇可使2000ml细胞内水分转移至细胞外，尿钠排泄50g。甘露醇也是一种较强的自由基清除剂，特别对羟自由基，两者作用时可形成毒性低的甘露醇自由基，经歧化而解毒；且对氧自由基的生成有抑制作用;能有效地清除神经组织、心肌细胞及肢体肌肉组织内缺氧时产生的自由基;并可降低血液粘度，减少红细胞聚集和脑血管阻力，改善微循环，增加脏器组织的灌注。灯盏花素为菊科植物，性寒、甘、味辛，具有降低血管阻力，抗血小板聚集、降低血浆纤维蛋白原含量和促进纤溶活性等作用和抗炎作用［5]。因此，两者联合应用其作用进一步提高和加强。

本研究甘露醇联合灯盏花素应用于眼内压高所致的视网膜神经损伤中应用后发现，神经组织内的IL-1、ET含量和细胞凋亡数高于对照组，低于模型组，差异有显著性（P＜0.05）；血清SOD含量低于对照组，高于模型组，差异有显著性（P＜0.05）。表明甘露醇联合灯盏花素应用可以保护视网膜神经的损伤。其机理待进一步探讨。

参考文献

［1］ShaftelSS,CriffinWS,BanionMK.Theroleofinterleukin-1inneuroinflammationandalzheimerdisease;anevolvingperspective［J].JNeuroinflammation,2008,26(5):7-10.

［2］FisherM,Injuriestothevascularendothelium:vascularwallandendothelialdysfunction［J].RevNeurolDis,2008,5(Suppl1):4-7.

［3］丁克群.SOD临床研究概况［M].北京：原子能出版社，1992：18.

［4］孙超然，冯俊东.急性脑梗塞甘露醇抗氧化治疗的疗效观察，河南医药信息，2000，2：25-26.

［5］唐省三，马亚珍.灯盏花注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用［J].陕西医学杂志，2004，33（7）：600-603.