蒽酮-硫酸法测定玉竹润肺粥中粗多糖的含量

蒽酮-硫酸法测定玉竹润肺粥中粗多糖的含量

惠秋沙

惠秋沙（山东中医药大学山东济南250355）

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）27-0043-02

【摘要】目的测定玉竹润肺粥中多糖含量。方法采用蒽酮-硫酸法，以葡萄糖为对照品，于625nm波长处测其吸光度，测定总多糖的含量。结果葡萄糖质量浓度在0.02～0.14mg•mL-1范围内与吸收度呈良好的线性关系；平均回收率为99.99%，RSD=0.0623%；测得的总多糖平均含量为103.03mg•g-1。结论采用蒽酮-硫酸法测玉竹润肺粥中总多糖含量，快速准确，稳定性好，可作为该制剂总多糖含量测定方法。

【关键词】玉竹润肺粥蒽酮硫酸法多糖含量测定

ContentdeterminationoftotalpolysaccharidesinYuzhuRunfeigruelbyAnthrone-sulfuricacidmethod

【Abstract】ObjectiveDeterminethecontentsoftotalpolysaccharideinYuzhuRunfeigruel.MethodsThecontentoftotalpolysaccharideswasmeasuredcolorimetricallybytheanthrone-sulfuricacidmethodusingglucoseasthestandardinthe625nmwavelength.ResultsThecalibrationcurvewaslinearwithintherangeof0.02～0.14mg·mL-1forglucose．Theaveragerecoverywas99.99％withRSD0.0623％.Theaveragecontentofpolysaccharideis103.03mg·g-1.ConclusionThemethodwassimple,accurateandstable,whichcouldbeusedfordeterminingthecontentsoftotalpolysaccharideinYuzhuRunfeigruel.

【Keywords】YuzhuRunfeigruelAnthronesulfuricacidmethodContentdeterminationoftotalPolysaccharide

玉竹润肺保健粥含有玉竹、百合等药食两用中药。中药玉竹为百合科植物玉竹Polygonatumodoratum(Mill.)Druce的干燥根茎，具有养阴润燥，生津止渴的功能[1]。其中含有有甾体皂苷、黄酮、生物碱、多糖、甾醇、鞣质、粘液质和强心苷等有效成分。百合也是一种传统的中草药，有润肺止咳，宁心安神，美容养颜之功效。玉竹润肺粥安全无毒副作用，可作为休闲保健的饮品。玉珠润肺粥中的多糖在酸溶液中的最终水解产物为阿拉伯糖、木糖、半乳糖等。本实验采用蒽酮-硫酸法测定产品中总多糖的含量，报告如下。

1仪器与试药

1.1仪器

U-2800紫外-可见分光光度计（上海第五分析仪器厂）；A1004型上皿电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；01-2型电热鼓风干燥箱（上海阳光实验仪器有限公司）；DZ4-0.8型低速自动平衡微型离心机（北京医用离心机厂）

1.2试药

玉竹润肺粥各中药（购于济南市建联中药店），葡萄糖（天津北方天医化学试剂厂，105℃干燥至恒重）；蒽酮（国药集团化学试剂有限公司）；浓硫酸（莱阳经济开发区精细化工厂）；无水乙醇（莱阳康德化工有限公司）；乙醚（天津北方天医化学试剂厂）；丙酮（上海试剂总厂）；蒸馏水，实验所用试剂均为分析纯

2方法与结果

2.1溶液的制备[2-4]

2.1.1对照品溶液的配制

精密称取在105℃下干燥至恒重的葡萄糖0.1003g，置于100mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容，再摇匀，即得1.003mg·mL-1葡萄糖对照溶液。

2.1.2硫酸蒽酮试液的配制

精密称取蒽酮100mg置于烧杯中，加入75%硫酸100mL（75mL浓硫酸加入25mL蒸馏水中）溶解，即得，然后转移至棕色瓶中。临用新配。

2.1.3供试品溶液的制备

玉竹润肺粥中各味中药粉碎后用水提醇沉法得多糖。药品3.0019g加入蒸馏水45mL超声辅助提取，水温80℃，时间100min。然后混悬液置离心管中以3000r·min-1的转速离心10min，取上清液加入无水乙醇使含醇量达到80%，静置过夜。将上述醇沉物依次用乙醚、丙酮、无水乙醇多次洗涤，离心取沉淀真空干燥，得粗多糖0.3784g，干燥后取0.1000g置于60mL蒸馏水中溶解，趁热抽滤，抽滤液冷却后移入100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，即得。

2.2标准曲线的绘制

精密量取葡萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，分别置于10mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液1mL于具塞试管中，另取水1mL置于25mL比色管中作空白对照，置冰水浴中，再精密加入蒽酮-硫酸试剂4mL，然后在沸水浴中加热，自加入沸水中即开始计时15min，之后用自来水冷却。以空白为参比，在625nm波长处测定吸光度。测定结果见表1。

表1标准曲线测定结果

以葡萄糖质量浓度(C)对吸光度(A)进行线性回归，得回归方程：Y=6.2089X-0.0124，r=0.9996。表明葡萄糖的质量浓度在0.02～0.14mg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系，标准曲线见图1。

图1标准曲线

2.3样品含量测定

精密量取2mL供试品溶液5份，分别置于25mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液1mL于具塞试管中，分别加入5个具塞试管中，置冰水浴中，再精密加入蒽酮-硫酸试剂4mL，然后在沸水浴中加热，自加入沸水中即开始计时15min，之后用冰水冷却。以蒸馏水为对照，在625nm波长处测定吸光度。按标准曲线方程计算样品中总多糖的含量。测得数据见表2。

表2样品含量测定结果

2.4精密度试验

精密量取葡萄糖对照品溶液1.0mL于10mL容量瓶中，定容后摇匀。再分别精密量取上述溶液各2mL置5个具塞试管中，余下操作按2.3项下进行，最后于625nm测定吸光度。结果分别为0.635，0.620，0.624，0.617，0.631，求得RSD=1.20%，说明该方法精密度良好。

2.5稳定性试验

精密量取供试品溶液2.0mL于25mL容量瓶中，定容后摇匀。精密量取上述溶液1.0mL于具塞试管中，余下操作按2.3项下进行。50min内每10min测一次吸光度，测定过程中待测溶液始终置于自来水浴中。结果分别为0.400，0.399，0.406，0.398，0.402，求得RSD=0.79%，可见本实验方法稳定性良好。

2.6加样回收率试验

精密吸取已知含量的稀释溶液0.5ml分别置于具塞试管中。配制一系列葡萄糖含量不同的对照品溶液，精密量取0.5mL分别加入上述五个试管中，按样品含量测定的方法测其含量。实验结果见表3。

表3回收率结果表

3讨论

3.1本方法原理是利用多糖在强酸性条件下脱水生成糠醛或其衍生物，然后与蒽酮迅速完全缩合生成有特定吸收波长的有色物质这一性质进行测定，其生成量与多糖含量存在定量关系。本法方便、快速、准确性好，因而可以作为该粥方多糖含量测定的方法。

3.2在制备供试品溶液时，虽然用体积分数为80%的乙醇沉淀除去了单糖和绝大部分低聚糖[4]，以减少水溶性糖类对含量测定的影响，但测定结果与实际接近的程度可能仍受醇沉浓度及次数的影响，所以在实验正交设计中将上述因素进行探讨可能具有一定意义。

3.3测定多糖的含量时，蒽酮-硫酸试剂要临用新配[5]，否则颜色加深影响测定结果；加蒽酮-硫酸试剂时要在冰水浴中滴加,保持混合物冷却,否则会影响测定；加入沸水浴之前要充分振荡，使混合均匀；反应时间要准确控制，自加入水浴开始计时，正负差异不要超过5～8秒。

参考文献

[1]国家药典委员会.中国药典[M].北京：中国科技出版社，2010年版，一部.

[2]黄梦娴,李毅.蒽酮-硫酸法测定山珍血脉康口服液中多糖的含量[J].广西医科大学学报，2001，18(4):506-507.

[3]付志红,谢明勇,聂少平等.彭日煌.车前子中多糖含量的测定[J].南昌大学学报,2003,27(4):349-352.

[4]吴立军,吴继洲.北京:天然药物化学[M].人民卫生出版社,2006年4月第四版:101-102.

[5]王强等.玉竹多糖的提取工艺研究[J].长春师范学院学报(自然科学版),2010,29(6):56.