辣椒素对大鼠三叉神经节一氧化氮合酶阳性神经元的影响

辣椒素对大鼠三叉神经节一氧化氮合酶阳性神经元的影响

袁野1姚行齐1杨长亮1丁继固2

袁野1姚行齐1杨长亮1丁继固2

（1广州军区武汉总医院耳鼻喉科湖北武汉430070)

(2咸宁学院医学院解剖学教研究室湖北咸宁437100）

【摘要】目的研究辣椒素(capsaicinCAP)对大鼠三叉神经节内一氧化氮合酶（NitricOxideSynthase，NOS）阳性神经元的影响，探讨CAP治疗三叉神经痛的镇痛机制。方法把CAP配成30mmoL浓度溶液备用，按用量分成四组，分别皮下注射处理大鼠三叉神经眶下支，24h取材，切片，免疫组化染色，镜检，计算机图像分析。结果经方差分析,各组之间有显著性差异。并且随着用药量的增加其差值也更大。结论CAP对大鼠三叉神经节内NOS阳性神经元有明显的影响，NOS参与口面部的痛与镇痛。

【关键词】辣椒素大鼠三叉神经节一氧化氮合酶

本文采用皮下注射CAP造成急性脱敏，观察CAP对大鼠三叉神经节中NOS阳性神经元的影响，探讨辣椒素治疗三叉神经的镇痛机制。

1材料和方法

1.1设计随机对照性实验研究。

1.2地点和材料实验地点：华中科技大学同济医学院神经生物学研究室。随机选取华中科技大学同济医学院动物室养殖的健康Wistar大鼠20只，雌雄不拘，重120-170g。CAP和NADPH-d（typeI）为美国SIGMA公司产品。

1.3参与者设计、实验为第一作者，干预实施者为第二、三、四作者。

1.4干预措施CAP用950mL/L乙醇、Tween—80、生理盐水按1:1:8配成30mmoL浓度的CAP溶液备用；按用量将动物分为A（20μL）、B（30μL）、C（50μL）、D（100μL）4组，每组5只。大鼠左侧面区为对照侧，不作任何药物处理；大鼠右侧面区为实验侧；按分组的用药剂量在三叉神经眶下支处皮下注射CAP溶液脱敏；并观察动物的行为变化。实验动物存活24h后，用100g/L的水合氯醛麻醉动物，开胸灌注、固定、取材（左右侧三叉神经节）、后固定、浸糖、脱水。恒冷箱连续切片，片厚40μm，标本片隔2取1，每只动物每侧取10张，作NOS组化染色。每只动物每侧随机选取染色标本2张，每组10张标本，每张标本选取1个视野，共10个视野，先进行光镜观察，然后用图像分析仪对NOS的平均光密度进行统计学分析。

1.5主要结局观察指标注射CAP溶液后观察大鼠的特征性行为和体征改变；镜检各实验组染色标本中NOS阳性神经元及神经纤维的变化；图像分析NOS的平均光密度；方差分析组间差异。

1.6统计学分析图像分析仪采用华中科技大学同济医学院神经生物学研究室的HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统，SPSS10.0分析软件，计量指标用χ±s表示，方差分析组间差异。

2结果

2.1实验动物数量分析注射CAP溶液后的20只大鼠，在正常室内温度、湿度、饲料和饮水情况下，24h内除了出现特征性行为和体征改变外，无一例死亡。

2.2行为变化皮下注射CAP溶液数分钟后，大鼠出现一系列特征性的行为改变，持续约2-5min；继之表现为精神抑制；数小时后大多数动物实验侧出现肿胀、潮红等；随着用药次数的增加，其特征性的行为变化逐渐减轻或消失。

2.3光镜观察

正常侧（对照组）半月节NOS阳性神经元呈黑色，它们不甚均匀地分布于三叉神经节和三突中，并与三突的长轴一致，直径从8μm-40μm不等，主要为中小型细胞，阳性胞体胞浆染色致密均匀，部分深浅不一，染色深浅与胞体大小无关；核仁多居细胞中心部位或偏向一侧，着色浅或不着色（图1）。

实验侧A组（20μl组）三叉神经节NOS神经元着色情况与正常侧所见情况基本相同,但着色的神经元及神经纤维的数量相对减少（图2）；B组（30μl组）中着色神经元及神经纤维较稀散而浅淡，其分布没有规律性（图3）；C组（50μl组）中着色的神经元及神经纤维更稀散而浅淡；（图4）；D组（100μl组）中未见或仅见极少着色的神经元及神经纤维（图5）。

2.4图像分析经方差分析（F值为149.136）及q检验,各组之间比较,P小于0.01，说明各组之间大鼠三叉神经节NOS平均光度有显著性差异。

3讨论

本文正常组三叉神节内NOS阳神经元不甚均匀地分布三叉神节内；而实验组随着CAP用药量的增加NOS阳神经元也随着明显地减少；三叉神节内NOS平均光密度的比较及q检验,各组之间P小于0.01，有显著性差异。上述结果一方面说明NOS确实参与了伤害性信息处理和调控及痛与镇痛的过程，同时也说明CAP确实有明显的镇疼作用，并且是通过耗竭大量的神经递质而发挥镇痛作用的。

目前认为传导口面部伤害性信息的纤维主要终止于三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)。CGRP、NOS细胞几乎都是中小型细胞，多数共存，与我们目前所做的结果相同，其纤维投射于VcI层（待发表），而VcI层被认为是痛觉调控的关键部位。因为中、小节细胞发出的无髓C纤维或有髓AS纤维，这两类纤维主要与伤害性信息的传入有关。因此，这些向Vc浅层投射的NOS与CGRP共存的细胞很可能在面口部伤害性信息的传递和调控中起重要作用。

参考文献

[1]关春保,丁继固,茹立强等.辣椒素急性脱敏治疗三叉神经痛的实验研究[J].临床神经病学杂志2002；15（2）91-93.