窒息死大鼠心肌热休克蛋白免疫组化研究

窒息死大鼠心肌热休克蛋白免疫组化研究

王培1程言博2

王培1程言博2

（1徐州市公安局刑警支队江苏徐州221001；2徐州医学院江苏徐州221002）

【摘要】利用免疫组织化学的方法，通过对窒息死亡组与对照组大鼠心肌细胞热休克蛋白（HSPs）表达的定量分析，表明窒息死心肌呈现出HSP60的强表达，为认定窒息死亡提供依据。

【关键词】窒息热休克蛋白免疫组化

【中图分类号】R392【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）26-0199-02

医界对认定窒息死亡，主要是依据死亡过程及尸体征象，但尸体征象大多缺乏特异性。本实验选取窒息组与对照组两组SD大鼠对心室肌细胞热休克蛋白表达情况进行免疫组织化学对照研究。

一、材料和方法

（一）试剂。MouseAnti-Mouse，HSP60抗体，Sigma公司；SABC免疫组化试剂盒，博士德公司；H、E常规染色试剂及免疫组织化学常规试剂。

（二）动物实验。

1.实验动物。SD大鼠20只，体重200g左右，性别不限。

2.动物模型的建立。将实验动物分成两组，每组10只，对照组乙醚深度麻醉下断头处死。实验组密封于塑料瓶中窒息死亡。塑料瓶容积约相当于大鼠自身体积的2倍，两组均留取心脏备检。

（三）方法。

1.制片。备检心脏中性甲醛固定后心室肌取材切片进行常规HE染色及HSP60SABC免疫组化染色，（依试剂盒说明书推荐方法进行）。

2.检测指标和分析方法。镜下观察HE染色切片中的一般病理变化。对免疫组化染色切片，每个样本选取5个视野记数HSP60染色阳性心肌细胞的个数，记取平均数，对数据资料进行统计学分析。

二、结果

（一）窒息死大鼠的死亡过程。窒息死大鼠死亡过程3～5分钟不等，均出现躁动、呼吸深快，进而抽搐、大小便失禁、呼吸浅弱，直到呼吸停止而死亡。

（二）大体所见。窒息死亡组大鼠心脏多出现收缩相，室壁坚厚，心室空虚。心肺外膜可见点状、小片状出血。对照组心脏大体未见异常，心脏多停滞于舒张期，室壁薄。

（三）常规HE染色观察。窒息死亡组大鼠心肌间质偶见点状出血，并可见大量裂隙状心肌收缩带形成。对照组未见异常。

（四）免疫组织化学染色所见。免疫组化染色发现，HSP60阳性心肌细胞呈棕黄色，阳性染色分布于胞浆中，呈细颗粒状，窒息死亡组大鼠心肌细胞阳性表达明显强于对照组。各组阳性细胞记数统计资料见表1。

表1窒息组与对照组大鼠心肌HEP60的表达

编号窒息组对照组

16.905.40

25.604.80

37.406.20

48.706.40

57.307.20

66.305.50

77.605.80

87.305.70

96.505.00

106.106.40

X6.975.74

S0.8880.724

V=18α=0.05水平t=2.9050.01＞P＞0.005

三、讨论

热休克蛋白（HeatShockProteins，HSPs）是一组细胞应激反应蛋白，该蛋白基因组在进化上有着高度保守性，哺乳动物与单细胞生物HSPs表达方式和种类有很大相似性。最初研究发现在细胞所处环境温度骤然升高时，HSPs大量表达。后来人们发现在操作、缺氧等条件下HSPs也会在很短时间内出现强烈表达。本研究正着眼于大鼠心肌细胞对窒息缺氧产生的应激反应，探讨窒息死心肌所发生的内在病理变化，结果表明窒息死心肌呈现出HSP60的强表达。有人将热休克蛋白称为细胞的分子伴侣，意指此组应激蛋白具有稳定细胞蛋白质结构，维持细胞恶劣环境下生理功能之作用。HSP60更是充当着单体蛋白的装配和折叠等任务。有研究表明热休克蛋白可在受到刺激后几分钟内发生强烈表达，这为医学及法医学研究某些应激性损伤和应激性死亡提供了线索。应激反应是细胞的基本防御反应，热休克蛋白可作为细胞损伤的标志。窒息死亡在法医学刑事日常检案工作中较为常见，包括缢死、闷死、勒死、扼死等方式，死亡过程中缺氧是最主要的直接致死原因。本实验动物模型揽制了闷死这一典型机械性窒息死亡全过程，缺氧必然引起动物机体有关的应激反应，心肌细胞的应激性损害在动物死亡过程中居于重要地位。从实验结果不难看出，机构性窒息死亡过程中心肌功能首先表现出异常进而在短时间内功能衰竭引起死亡，心肌细胞必然发生一些内在病理变化，HSP60的强表达证明了这一点。同时这一发现也可应用于医学及法医学窒息死的推定和死后诊断等领域。