HPLC法测定阿莫西林克拉维酸钾颗粒的含量

HPLC法测定阿莫西林克拉维酸钾颗粒的含量

张璐王金红

黑龙江乌苏里江制药有限公司158100

黑龙江珍宝岛药业股份有限公司158100

【摘要】目的:使用高效液相色谱法对阿莫西林克拉维酸钾颗粒进行检测,测定其成分组成的含量｡方法:采用PhenomenexC18(2)色谱柱(4.6mm15mm,5μm),岛津LC-10A高效液相色谱仪,以0.78%的磷酸二氢钠水溶液(pH值为4.4)一甲醇(95:5)为流动相,流速0.8mL/min,柱温30℃,检测波长220nm,进样体积为10μL,分析时间为10min,外标法定量｡结果:阿莫西林在质量浓度为0.60~1.20mg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.9999,平均回收率(n=9)为99.32%,RSD为O.29%｡克拉维酸在O.10~0.30mg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数为O.9999,平均回收率(n=9)为99.08%,RSD为0.28%｡克拉维酸钾与阿莫西林标示量分别为90.0%一110.0%｡结论:此种测定方法操作较为简便,且测量效果好,准确灵敏度高,在质量测定工作中可大范围使用｡

【关键词】阿莫西林；克拉维酸钾；HPLC含量测定

作为阿莫西林与克拉维酸钾的复方制剂,阿莫西林克拉维酸钾的体内外抗菌活性与临床试验研究发现克拉维酸钾能提高阿莫西林的药品可以有效对耐药菌活性进行抑制,可以获得更为稳定且确切的疗效,同时对革兰阳性以及革兰阴性细菌均可产生疗效｡本文采用HPLC法对阿莫西林克拉维酸钾颗粒的含量进行测定,并在色谱柱､流速以及样品选择上进行了改进,让分离度､理论塔板数和拖尾因子最终结果均优于USP标准,可以获得较好的结果,且操作方便｡

1仪器与试剂

高效液相色谱仪:岛津LC-10A高效液相色谱仪;SPD-6V紫外检测器;HS色谱工作站;电子天平(赛多利斯BP211D);Millipore超纯水机｡

阿莫西林和克拉维酸钾对照品(中国药品生物制品检定所提供);甲醇为色谱纯(美国TEDLA公司),磷酸二氢钠氢氧化钠均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司);试验用水均为超纯水｡阿莫西林克拉维酸钾颗粒(由先声药业公司提供,产品批号为20060403､20060404､20060405)｡

2方法与结果

2.1色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:PhenomenexC18(2)柱(4.6mmx150mm,5pm);流动相:0.78%的磷酸二氢钠缓冲液[用磷酸或1mol/L的氢氧化钠调pH值至(4.4+0.1)]-甲醇(95:5);检测波长为220nm;流速为0.8mU/min;柱温30C;进样体积10μL;理论塔板数按阿莫西林峰和克拉维酸峰分别计算,应均不低于2000｡阿莫西林和克拉维酸之间的分离度应不小于3.5｡

2.2供试品溶液与对照品溶液的制备

供试品溶液的制备:取阿莫西林克拉维酸钾颗粒10包,混合均匀,精密称取适量,用流动相溶解稀释并过滤｡制成每毫升含克拉维酸和阿莫西林分别为0.25mg和1.0mg的溶液｡

对照品溶液的制备:精密称取克拉维酸钾对照品和阿莫西林对照品适量,用流动相溶解过滤､稀释,制成每毫升含克拉维酸和阿莫西林分别为0.25mg和1.0mg的溶液｡

2.3测定方法

精密量取对照品及供试品溶液各10μL,分别注入高效液相色谱仪,记录色谱图,量取峰面积,按外标法计算供试品中阿莫西林(C16H19N3O5S)及克拉维酸(C8H9NO5)的含量,即得｡

2.4标准曲线

2.4.1精密称取阿莫西林对照品150.08mg,置50mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,精密量取上述溶液2.0､2.5､3.0､3.5和4.0mL,分别置10mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,分别精密量取10μL注入液相色谱仪,结果见表1｡

表明阿莫西林在0.60~1.20mg/mL浓度范围内线性关系良好｡

2.4.2精密称取克拉维酸钾对照品50.09mg,置50mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,精密量取上述溶液1.0､1.5､2.0､2.5､3.0mL｡分别置10mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,分别精密量取10注入液相色谱仪,结果见表2｡

A=4905430C—122744,r=0.9999

表明克拉维酸钾在0.10~0.30mg/mL浓度范围内线性关系良好｡

2.5最小检出限和定量限

2.5.1取阿莫西林对照品适量,加流动相溶解配制成浓度为1.0mg/mL的溶液,然后逐步稀释至原浓度的1/100､1/200､11300､11400､11500,按上述色谱条件进样测定,最小检出限为2μg/mL(SIN=3),最小定量限为10μg/mL(SIN=10)｡

2.5.2取克拉维酸钾对照品适量,加流动相溶解配制成浓度为0.5mg/mL的溶液,然后逐步稀释至原浓度的1/100､11200､11300､1/400､1/500按上述色谱条件进样测定,测得最小检出限为1μg/mL(SIN=3),最小定量限为5μg/mL(S/N=lO)｡

2.6精密度试验

取含量测定项下同一样品液(批号:20060403),按上述色谱条件重复进样6次进样测定,以相应的色谱峰的面积计算RSD,阿莫西林为0.15%､克拉维酸为0.06%(n=6),本方法测定阿莫西林和克拉维酸钾有较好的重现性｡

2.7加样回收率试验

按处方比例称取辅料制成的空白颗粒,分成9等份,3份为一组,分别精密加入一定量的阿莫西林对照品和克拉维酸钾对照品,充分混合均匀,置于50mL量瓶中,并按含量测定方法进行操作｡

2.8稳定性试验

按照含量测定项规定进行对照品溶液制备，制成每毫升含克拉维酸与阿莫西林质量分数为O.25和1.0mg的溶液，并严格按照测定方法上的操作步骤规定进行实验，在1、4、6、的时间段上进样。发现本药品的含量测定方法在6小时以内时结果误差最小，可参考价值最大，并且有足够的时间进行准确测定。

3讨论

3.1在采用此种方法对阿莫西林克拉维酸钾颗粒中的阿莫西林和克拉维酸含量进行测定时,发现操作过程更为简便,且快捷有效,同样可以获得良好的回收率,分离度也符合实验要求,未出现辅料干扰的情况｡

3.2从实验的图谱对照中可以发现克拉维酸钾的降解产物峰面积随着检测时间的延长与扩大,如果放置时间超过20小时,那么克拉维酸钾的测定结果就会受到干扰,出现不准确的问题｡

3.3为了让实验结果的可参考价值更大,实验人员分别使用醋酸一醋酸钠缓冲液(用冰醋酸调至pH6.0)和水溶解对照品或样品进行含量测定,发现阿莫西林和克拉维酸含量会随着放置时间的延长出现下降趋势,无论是在水溶液中或是在醋酸一醋酸钠缓冲液中,都会出现此情况｡但是下降的速率有一定规律可循,两种试剂放置的时间都在8小时之内时,下降的趋势与速率基本一致,也就是说在此时间段内,醋酸一醋酸钠缓冲液和水对主成分降解的影响程度基本趋同｡当时放置了24小时后,阿莫新林与克拉维酸钾在水中的讲解程度要远远大于流动相中的降解程度｡

3.4对照溶液中的2个组分降解速率要高于样品溶液中组分的降解,因此在分析时需要对样品与对照品的操作进行同步处理,防止操作误差导致检测结果准确性出现问题｡

3.5根据药品质量检测规定实验人员需要在样品处理1个小时后进行检测;并依据BP2005规定对克拉维酸钾溶液进行样品处理,处理步骤全部完成以后应立即开展检测步骤｡在本次实验中通过对表5的数据对照,发现对照品与样品溶液静置4小时后克拉维酸钾的含量会降低1%,由此可以得到的结论是为了让检测数据的精确性得到保障,应加快处理样品与检测步骤的开展速度,同时向我国药典中对阿莫西林克拉维酸钾颗粒的含量检测时间进行意见提出,精确划分静置时间段,保证检测结果的可参考性｡

参考文献

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