人类红细胞血型检测方法

人类红细胞血型检测方法

唐银华(黑龙江省农垦总局宝泉岭分局梧桐河农场职工医院

【中图分类号】R446.11【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2009)20-0250-02

自发现人类第一个红细胞血型以来，一个世纪中，人们使用免疫学和生物化学力几乎所有的血液成分中，检出数百种遗传多态性标记。这个领域的成果，已用于输血移植等临床医学，以及免疫学、遗传学、法医学、人类学等许多方面。红细胞血型检查主要用于一般体检，产前检查及输血前检查。临床上最重要的为ABO血型及Rh血型两种，必要时还需检查其他血型。

1常用试剂

血型检查的常用试剂包括抗-A，抗-B，抗-H以及抗-D。这类试剂有来自人血清的、单克隆抗体以及外源凝集素。现在实验室所用的大多为单克隆抗体。根据免疫球蛋白的性质，抗体可分为IgM、IgG两种。前者在盐水介质中与相应的红细胞血型抗原凝集，后者在抗人球蛋白试验、酶试验或其他胶体介质中发生凝集。

血型鉴定常用立刻离心试管法，以肉眼观察凝集反应，根据凝集反应的强度，以4+，3+，2+，1+及±区别。所谓混合外观是指极大多数红细胞不凝集，只有少数红细胞呈凝集现象。如少量的A型红细胞混匀于O型红细胞时，与抗-A血型试验即呈混合外观，原则上与弱凝集有所区别。

单克隆抗-A(B)试剂的研制成功和应用，为临床节省了大批珍贵的人源试剂血清。但近年来，在ABO血型检测过程中，国外已有多篇因单克隆试剂引起假凝集现象的报道，国内孙爱农等亦有类似报道。即单克隆抗-A与B型红细胞反应，单克隆抗-B与A型红细胞反应，这种现象均表明单克隆试剂与人源多克隆试剂存在一定差异鉴于单克隆试剂可造成假阳性结果，因此Butch(1994年)等认为输血前单个标本ABO/Rh血型检测，应该用人源多克隆血清。由于目前国内市场上供应的几乎都是单克隆试剂，所以孙爱农等认为：厂家生产单克隆抗一A(B)成品时，应取不同来源杂交瘤细胞制备的抗-A(B)混匀，并用大批量包括亚型在内的标本验证，对输血前所有病人的检查，必须增加ABO反定型试验，对于有疑问的标本的血型鉴定和吸收放散试验，应该采用人源抗-A(B)，以确保安全输血。

2ABO定型

ABO血型与其他血型不同的是，正常人红细胞上有A，B或A和B抗原者，其血清中必定有与之不同的抗体或没有抗体。例如A型人必定有抗-B，B型人必定有抗-A，O型人有抗-A和抗-B，而AB人没有抗-A和抗-B。因此ABO血型的鉴定，包括正反定型两个方面：正定型是以已知的抗-A，抗-B血清测定未知的抗原；反定型是以已知的A型及B型红细胞测定未知的抗体。两者必须相符，否则应进一步分析研究不符的原因，是技术性还是病理性的。

3Rh定型

常见有抗-D，抗-C，抗-E，抗-c，抗-e用来鉴定Rh血型抗原。因为抗-e来源比较困难，所以临床上通常以抗-D，抗-C，抗-E，抗-c4种抗体来测定。Rh抗体以IgG为常见，所以通常以抗人球蛋白试验测定。现在市售的抗-D为单克隆化学改性抗体，可以用立刻离心凝集试验测定。

4交叉配血试验

交叉配血试验是输血前必须做的试验。交叉配血实验包括主测及次测两部分。主测是受者的血清加上供者红细胞，次测是供者血清加上受者红细胞。理想的配血结果应该是两测都无凝集及溶血现象。在特殊情况下，如自身免疫性溶血性贫血，次测往往可以见到极弱的凝集。检验工作者应特别注意。

第一次输血后，如在两周后再次输血时，仍为同一供血者或亲属，仍应做交叉配血试验，因为该供者如有该受者所缺乏的某种血型抗原，第一次输血后，因免疫而产生抗体，第二次交叉配血时可以产生不相配的现象。

5抗体测定与抗体鉴定

抗体测定与抗体鉴定是血型血清学中十分重要的工作。抗体测定又称抗体筛检，它是一种初步检查血清中有无血型抗体的方法。抗体测定必须应用试剂红细胞(又称筛检红细胞)，一般都推荐用两种不同血型的0型红细胞等量混合，而这种红细胞的抗原组成必须是互补的，所以应包括Rh，Kidd，MNS，Ouffy，Diego，Xg，Kell，Lewis，P及Lutheran等。如果被检血清与筛检红细胞发生凝集，则应用谱细胞进一步加以鉴定。谱细胞一般应用9-11个不同血型互补的红细胞。为了提供Rh系统复合抗体(如抗-ce)与混合抗体(如抗-c+抗-e)的鉴定根据，谱细胞的Rh基因型也应加以标明，这必须通过家系调查来决定，目前有一定的难度。

ABO血型系统中的抗体为最具临床意义的抗体，其他抗体一般认为是具有潜在临床意义的抗体。根据其发生频率排列为：抗-D，抗-K，抗-E，抗-c，抗-Fya，抗-c，抗-Jkb，抗-s，抗-Jkb。我国引起HTR的抗体以抗-E最多，而HDN以抗-D为最多。

如果在交叉配血时测到受者具有针对低频率抗原的抗体，则不必为了确定供者抗原阴性而进一步加以鉴定，只要从贮存的血液中，任取一个供者血液，一般不含此低频率抗原。因此，与该受者血清交叉是相容的。反之，如在产前检查，发现针对罕见抗原的抗体时，抗体鉴定是必不可少的，它可以预测HDN的可能性及其严重程度，供换血用的血液是不难找到的。另一方面，如果病人血清中含有针对高频率抗原的抗体，不必考虑这种研究是为了输血还是预测HDN，必须加以鉴定，对估计临床意义以及确定输血用的血液都有帮助。

6分泌型唾液中血型物质的测定

唾液中HAB血型物质测定可用作ABO。血型鉴定的辅助方法。分泌型唾液中血型物质的强度各人不同，A，B，H物质之间也不一样，唾液中血型物质测定常用凝集抑制试验，所用抗血清的浓度应当适当。分泌型AX及Ael，BX及Bel人唾液中只有H物质而无A或B物质。

7吸收放散试验

血清学方法中，吸收放散试验是确定ABO亚型及目前鉴定Del的惟一方法。这种红细胞与抗-A，抗-B，抗-D不起凝集，但可以吸收抗-A，抗-B及抗-D并放散出来，是血型鉴定中十分重要的方法。

8采用血凝反应的增强剂和改变血凝反应体系

一些血凝反应的增强剂，如凝聚胺(polybrene)、聚乙二醇(PEG)、盐水、牛白蛋白、低离子强度悬液(LISS)、抗人球蛋白试剂、酶试剂等，以及有别于常规试管反应的反应体系，如固相反应、微量板反应和微量试管柱式反应等，已被广泛地使用。但事实上，每项技术都有其各自的优、缺点和局限性。对新的血型血清学技术的应用，有公认的基本要求：在用于抗体检测时，必须优于经典的低离子强度一间接抗球蛋白试验(LISS-IAT)，必须有助于检测灵敏度的提高和节省经费，必须不受无临床意义的抗体的干扰。

9聚合酶链反应(PCR)

聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)是一种在体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术。它以待扩增的两条DNA链为模板，由一对人工合成的寡核苷酸引物介导，通过DNA聚合酶酶促反应，快速体外扩增特异DNA序列。由于PCR技术经过变性、复制、延伸约30个循环就可在2h内将靶DNA扩增数百万倍，具有操作简单、快速、特异和灵敏的特点。

目前，国内已经选用PCR-SSP技术进行了ABO血型基因型检测的研究。另外，RhDDNA定型推知其表型的方法也迅速地建立起来，使对Rh(-)母亲所怀胎儿的RhD基因定型已经成为可能。