志贺氏菌检验

志贺氏菌检验

邹斌

志贺氏菌检验

邹斌

四川省内江市资中县疾病控制中心，641200

志贺氏菌属于肠杆菌科，是一种革兰氏阴性菌，会引起肠道感染，引发肠炎，当人出现连续性腹泻、腹痛等症状的时候，就需要考虑是否感染志贺氏菌。志贺氏菌的传播途径主要是食物和水，比如沙拉、土豆、金枪鱼、虾、奶制品等，在密闭以及不卫生的条件下志贺氏菌会迅速传播，而且经常出现在人员比较密集的地方，比如餐厅、食堂等地。食源性志贺氏菌的传播主要是因为从事食品工作的人员感染了志贺氏菌，并且将其传播到食物上所引起的，另外，保存食物的温度不当，也可能引起志贺氏菌。

志贺氏菌检验是临床上检验肠道感染疾病的一个重要途径，在检测过程中常用的方法有以下几种。

一、生化鉴定法

常规的生化鉴定方法是志贺氏菌检验过程中的常用方法，需要对细菌进行增殖培养、分离、生化试验、血清学检验等步骤来完成，步骤比较繁琐，而且耗时较长，每一次一般只能检验一个样品，但是检测的结果比较准确，检测稳定性较高，假阳性率低。

二、免疫学检验方法

免疫学是检验志贺氏菌最快速、准确的方法，特异性较强，而且灵敏度很高，主要的免疫学检验方法有以下几种：

第一，酶联免疫法。这种方法的灵敏度很高，而且简单快速，检测过程比较稳定，可以进行自动化操作，是志贺氏菌检测过程中最快速的一种方法。但是，使用酶联免疫法进行检验的时候，影响检测结果的因素较多，而且假阳性率高，所以还需要采用其他的方法进行配合检验。

第二，SPA协同凝集法。这种方法是使用已知标准血清吸附到含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌表面之后，让金黄色葡萄球菌成为吸附抗体的载体，再根据吸附的结果来诊断是否感染志贺氏菌的一种方法。

三、分子生物学方法

分子生物学是建立在很多其他的检测技术基础上的，敏感度高、检测快速，而且特意性高，是生物技术革命的一个重要产物，目前在志贺氏菌的检测过程中十分常见。志贺氏菌的分子生物学检测方法有以下几种：

第一，聚合酶链式反应法，比如常规PCR、多重PCR法、实时荧光PCR法和恒温荧光PCR法等。以恒温实时荧光PCR法为例，这种方法的原理是利用环介导等温扩增反应为原理进行测量的方法，灵敏度很高，与传统的荧光测量方法相比，灵敏度高出2～5个数量级，而且测量十分迅速，荧光反应的时间较短，一般30-60分钟就可以完成荧光反应。整个操作也比较简单，不论是DNA还是RNA，检测步骤都是相同的，首先要将反应液、酶和模板等混合起来，放置于PCR管中，然后将PCR管放入到恒温箱中静置30-60分钟左右，恒温箱的温度保持在63℃左右。目前有专门的用于荧光检测的仪器，采用这些一起可以迅速检测到志贺氏菌，方便快捷，而且耗时很短。

多重PCR法在志贺氏菌的检测过程中也十分常见，这种方法又被称为复合PCR，指的是在同一个PCR反应体系里加上两对以上引物，经过反映之后可以同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，对于多种病原微生物的检验都有作用。由于志贺氏菌不止一个种群，一共有四个不同的种群，而且每一个种群都有不同的抗原基因，所以，在检测的时候，如果只针对一种抗原基因进行单一的PCR检验，则可能会出现漏检情况，也不利于对志贺氏菌进行分类。所以，多重PCR法检测志贺氏菌的时候可能会出现漏检与错检的情况。

常规PCR法是根据DNA的模板来模仿体内的基因复制过程，然后在体外的适宜的调价下，以单链DNA为模板，以人人工设计与合成的寡核苷酸为引物，再利用热稳定的DNA聚合酶沿着特定的方向掺入单核苷酸，从而有针对性地扩增DN片段，这种技术可以对已知的DNA进行扩增，一些带有侵袭性质粒抗原可以作为志贺氏菌检测的设计引物。

四、血清凝集法

经过临床研究发现，志贺氏菌的抗原有两种，一种是K抗原，一种是O抗原，但是没有H抗原，K抗原是不耐热的，当温度超过100℃之后，一个小时这种抗原就会被破坏，在血清学分析上，k抗原没有什么意义，但是可以阻止O抗原与相应抗血清的凝集反应。所以，可以利用这一特征进行志贺氏菌检验。当前研究发现的志贺氏菌一共有一个不同的群，根据志贺氏菌的抗原体的构造的差异进行区分，主要有ABCD四个不同的群，其中A群叫做痢疾志贺氏菌，B群叫做福氏志贺氏菌，C群叫做鲍氏志贺氏菌，D群叫做宋内氏志贺氏菌。

结语

志贺氏菌检验是微生物检验的一种重要方法，因为志贺氏菌是引起肠道感染的一种常见细菌，属于革兰氏阴性菌。志贺氏菌的传播主要通过食物这一载体，为了减少志贺氏菌的感染，应该要加强对志贺氏菌的检验，当然出现感染症状的时候，进行检验得出感染源，并且对症下药，减少细菌传播。