新型AT1受体拮抗剂的降压活性研究

新型AT1受体拮抗剂的降压活性研究

达雅静吴丹郑慧玲袁伟东陈志龙(通讯作者)

达雅静吴丹郑慧玲袁伟东陈志龙(通讯作者)

（上海东华大学化学与生物学院生物医药研究室201620）

【摘要】目的研究新型化合物WD59作为AT1受体拮抗剂的降压活性。方法利用放射性受体结合实验，评价化合物对AT1受体亲和力大小；以自发性高血压大鼠（SHR）为模型，测定化合物的体内降压活性。结果与阳性对照洛沙坦相比，WD59号化合物有更好的AT1受体亲和力。结论化合物WD59作为一种新的抗高血压化合物具有很好的应用前景。

【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）20-0143-01

肾素一血管紧张素系统(renin—angiotensinsystem，RAS)在高血压发生和发展过程中起着重要的作用。因此合成新型的血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对治疗高血压具有重要的意义[1-3]。

本课题组以BMS-180560为先导化合物，通过构效分析、生物电子等排和结构拼合等药物设计基本方法，设计合成了化合物WD59：2-（5-（（2-正戊基-4-甲基-6（-1-甲基苯并咪唑-2-基）苯并咪唑）甲基）-1H-吲哚-1-基）苯甲酸，并进行了活性评价。

1.材料

1.1受试物与仪器

新型化合物：东华大学生物医药研究组；EP214C型电子分析天平：OHAUSCORP；SW-CJ-1FD型超净工作台：苏州净化；SN—682型γ计数器：上海日环厂；DZF-6020型真空干燥箱：上海一恒科学仪器有限公司；二氧化碳细胞培养箱：ThermoScientific；ZH-HX-Z无创尾动脉血压测量分析系统：淮北正和生物公司。

2.实验动物

雄性SHR，来自于中国科学院斯莱科上海实验动物中心。

3.实验方法

3.1放射性受体结合实验

原代培养大鼠的血管平滑肌细胞细胞，取第3-6代用于实验。取一定量的化合物溶于1mL的DMSO溶液，浓度为10-2M，再10倍稀释成不同浓度的溶液（1×10-10M～1×10-4M）。细胞铺板（1×105/孔）后，每孔加入0.1nM125I-AngII以及不同浓度的新化合物（终浓度1×10-6～1×10-12mol/L），总体积为1000μL，4℃反应150min，反应结束后去除游离的125I-AngII，用PBS洗涤3次，加入0.1mol/LNaOH溶液消化10min，将细胞液移入塑料管，用γ计数器测量每管内溶液的γ计数。经GraphPadPrism4竞争结合曲线拟合程序处理即可得出新型化合物抑制与膜蛋白结合的半抑制常数和IC50值[4-8]。

3.2体内降压实验

化合物剂量：分成低剂量组（5mg/kg，n=6）和高剂量组（10mg/kg，n=6）

血压测量：（1）大鼠加温和固定：加温采用全身加温或尾部局部加温。固定采用有机玻璃固定器。加温和固定可分开进行或同时进行。（2）确定起始脉搏水平：将鼠尾依次穿过尾套和脉搏换能器，调整尾巴位置和仪器增益，使尾动脉脉搏信号足够大。（3）测定血压：用橡皮球充气加压，使尾套内压力升高至脉搏完全消失，再加压20-30mmHg（2.66～3.99），然后缓慢放气减压直至脉搏信号恢复起始水平，这时从测压仪的显示屏上就可读取收缩压、舒张压、平均动脉压和心率，连续测3次，取其平均值作为测定值[9]。

4.统计学处理

数据采用GraphPadPrism4作图软件和Excel2007软件作统计学分析，并制作图表，组间差异比较采用方差分析，数据采用x-±s表示。

5.实验结果

5.1WD59化合物对AT1受体的亲和力

化合物WD59和洛沙坦浓度依赖性抑制125I-AngII与血管平滑肌细胞细胞膜AT1受体的结合（图1），IC50值分别为0.49±0.09nmol/L和1.49±0.17nmol/L。两者相互比较，差异具有极显著性意义（P<0.01）

图1.WD59对125I-AngII与AT1受体结合的抑制曲线

5.2不同剂量的WD59对SHR的体内降压结果

（1）低剂量的化合物对SHR血压的影响：

低剂量的化合物在给药后对平均动脉压的作用已经是比较显著的，给药后1小时血压就有很大下降，3小时达到峰值，最大降压值为25mmHg，随后血压保持平稳，没有明显的回复，直至24小时后低剂量组与阴性对照相比仍有显著性差异。

（2）高剂量的化合物对SHR血压的影响：

高剂量的化合物对血压的下降作用比低剂量组更加明显，给药后第1小时，血压即下降35mmHg，基本恢复正常水平，最大降压值出现在给药后的第4小时，血压下降39mmHg。随后血压保持稳定，至24小时后，血压仍可下降30mmHg。

6.讨论

WD59号化合物剂量相关的抑制AngII与血管平滑肌细胞膜AT1受体的结合，IC50值为0.49nmol/L，大于洛沙坦，表明WD59对AT1受体的亲和力强于洛沙坦。

自发性高血压大鼠的体内降压实验结果表明，WD59号化合物有很好的降压活性，降压幅度大，降压时间持久，且稳定性好，具备成为新一代降压候选新药的资格，值得进一步研究。