透明质酸治疗老年骨关节创伤及对患者关节软骨细胞凋亡的影响

透明质酸治疗老年骨关节创伤及对患者关节软骨细胞凋亡的影响

李思恩

浏阳市中医医院湖南浏阳410300

【摘要】目的探讨老年骨关节创伤后给予关节腔内注射透明质酸治疗对患者关节软骨细胞凋亡的影响。方法选取我院2014年6月-2016年6月收治的80例老年关节创伤患者，随机分为观察组和对照组各40例，对照组给予常规手术及抗感染治疗，观察组在常规治疗基础上给予关节腔内注射透明质酸治疗，比较两组关节软骨细胞凋亡情况。结果观察组患者软骨细胞凋亡率明显低于对照组，组间比较差异显著（P<0.01）；观察组患者的S、G2M明显高于对照组，G0/G1明显低于对照组，分别比较差异有统计学意义（P<0.01），观察组患者的PI明显高于对照组，组间差异显著（P<0.01）。结论老年骨关节创伤后给予关节腔内注射透明质酸治疗，可显著降低患者关节软骨细胞凋亡率，对预防创伤性关节炎的发生、促进患者康复有积极意义。

【关键词】透明质酸；骨关节创伤；关节腔内注射；细胞凋亡

Abstract：objectivetoexploretheoldjointofintra-articularinjectionofhyaluronicacidofpost-traumaticgivetreatmenteffectsonpatientswitharticularcartilagecellapoptosis.MethodsselectourJune2014-June2016treated80casesofelderlyjointtraumapatients，randomlypidedintoobservationgroupandcontrolgroup，40casesinthecontrolgroupgivenconventionalsurgeryandanti-infectiontreatment，observationgrouponthebasisofconventionaltreatmentofintra-articularinjectionofhyaluronicacidofgivingtreatment，comparedtwogroupsofarticularcartilagecellapoptosis.Resultstheobservationgroupofpatientschondrocytesapoptosisrateissignificantlylowerthanthecontrolgroup，themoresignificantdifferencebetweengroups（P<0.01）；InpatientswithSandG2Mobservationgroupwasobviouslyhigherthanthatofcontrolgroup，theG0/G1significantlylowerthanthecontrolgroup，respectivelytocomparedifferencewasstatisticallysignificant（P<0.01），patientswithPIobservationgroupwasobviouslyhigherthanthatofcontrolgroup，significantdifferencebetweengroups（P<0.01）.Conclusionelderlyjointtraumaofintra-articularinjectionofhyaluronicacidofgivingtreatment，cansignificantlydecreasetherateofpatientswitharticularcartilagecellapoptosis，topreventtheoccurrenceoftraumaticarthritis，promotepatientsrecoveryhasapositivemeaning.

Keywords：hyaluronicacid；Jointtrauma；Articularcavityinjection；Cellapoptosis

研究发现，骨关节创伤后关节软骨细胞会发生大量凋亡，尤其是老年患者，其骨关节创伤后软骨细胞凋亡率可高达35%[1]，而创伤后软骨细胞的过度凋亡与创伤性骨关节炎的发生密切相关。大量研究资料显示，关节腔内注射透明质酸治疗骨关节炎有较好的临床疗效，而骨关节创伤后进行透明质酸治疗是否对关节软骨细胞凋亡产生影响的报道尚不多见，为了探讨老年骨关节创伤后给予关节腔内注射透明质酸治疗对患者关节软骨细胞凋亡的影响，特进行本研究。

1资料与方法

1.1一般资料本组病例为我院2014年6月-2016年6月收治的80例老年骨关节创伤患者，均符合中华医学会下属骨科学分会制定的关节软骨创伤诊断标准（2007年制定）[2]，排除风湿免疫类疾病者及严重脏器疾病患者，入选患者对本研究知情同意并签署知情同意书。按照是否给予透明质酸治疗将患者随机分为观察组和对照组各40例，其中观察组男23例，女17例，年龄55-78岁，平均（63.5±3.1）岁；对照组男21例，女19例，年龄56-76岁，平均（63.3±3.2）岁，两组患者一般资料比较差异无显著性（P>0.05），可比性良好。

1.2方法对照组患者给予常规抗感染及手术治疗，观察组患者在骨关节创伤早期进行缝合皮肤前给予关节腔内注射2.5ml江苏常州药物研究生产的透明质酸（药品批号：091003，规格25mg/2.5ml）。

1.3软骨细胞凋亡的测定

1.3.1提取标本提取两组患者损伤处直径为3mm的软骨，分别进行流式细胞检测和TUNEL检测，测定软骨细胞凋亡情况。

1.3.2流式细胞检测①将上述提取的软骨剪碎，然后置入离心管内，进行PBS冲洗，离心10min（速率为2000r/min），去除上清液。②用胰蛋白酶（0.25%）消化处理半小时，再以2000r/min离心10min，去除上清液。③加入Ⅱ胶原酶（0.2%）并将其置于恒温箱中消化，设定温度为37摄氏度，每隔1h吹打一次，约4h后软骨全部溶解后，进行过滤和漂洗，然后计数和制备细胞悬液（＞1×106/ml）。④用PI进行染液，避光放置20分钟，放入流式细胞仪进行测定。⑤采用Modfit软件进行细胞周期分析。增殖指数（PI）=（S+G2M）/（S+G2M+G0/G1）[3]。

1.3.3TUNEL检测用10%的福尔马林液固定软骨标本48h以上，递增浓度，用乙醇脱水，然后采用石蜡包埋，连续实施5μm切片，用PBS替代一抗，作为阴性对照。凋亡的软骨细胞呈棕黄色。然后采用双盲法计算10个百倍视野每100个细胞中阳性细胞数量，取平均值。

1.4统计学研究数据采用SPSS20.0处理分析。研究中计量资料采用（）描述，比较采用独立样本t检验；计数资料用%表示，组间进行卡方检验，研究结果以P＜0.05为差异具有统计性。

2结果

2.1两组患者软骨细胞凋亡率比较观察组患者采用流式细胞仪检测和TUNEL检测的软骨细胞凋亡率均明显低于对照组，分别比较差异显著（P<0.01），见表1。

3讨论

多数研究者认为，有效抑制或减缓软骨细胞凋亡对骨关节创伤的后续治疗有积极意义。透明质酸是上世纪Meyer和Palmer从牛眼玻璃体中分离而得到的[4]，其作为一种生物活性物质，具有明显的润滑作用，广泛应用于关节炎的治疗，其作用机制为：通过阻止软骨基质蛋白聚糖聚集物，从而发挥促进软骨细胞胞外基质和蛋白聚糖合成的作用，对有效减轻患处炎症、改善关节功能有显著效果，而且能提高软骨存活力，保护软骨组织。

尤建川等[5]研究结果显示，透明质酸在减轻关节疼痛、提高关节功能方面具有显著效果。因此，它是治疗风湿性关节炎的一种安全、有效药物。也有研究者在采取常规关节手术及抗感染治疗的同时，联合关节腔内透明质酸治疗创伤性关节炎患者，结果发现，该治疗方式可显著降低关节软骨细胞凋亡率，对促进患者关节功能恢复有显著效果。本研究结果显示，观察组患者软骨细胞凋亡率明显低于对照组，这进一步证实了上述观点。分析可能的原因为：透明质酸可作为关节滑液和软骨的组成部分而发挥润滑、修复病患关节软骨的作用。研究者认为，发生骨关节创伤后，其患处的透明质酸水平显著降低，软骨完整性遭到损伤，从而出现关节肿胀、疼痛、关节功能障碍等症状，而注射透明质酸则可显著提高其在患处的浓度，从而更好的发挥润滑、修复软骨的作用。

众所周知，细胞周期与细胞生命活动紧密相连，在细胞周期内，Ｇ１/Ｓ和Ｇ２／Ｍ是两个最关键的限制点，而增殖指数（PI）和S期的比例是判断细胞增殖功能的重要指标[6]。本研究结果显示，观察组患者S、G2M明显升高，PI明显高于对照组，这提示观察组患者的软骨细胞增殖活力更加强大。

综上，老年骨关节创伤后给予关节腔内注射透明质酸治疗，可显著降低患者关节软骨细胞凋亡率，对预防创伤性关节炎的发生、促进患者康复有积极意义。

参考文献：

[1]王建航，孙涛.早期关节腔内注射透明质酸对老年关节创伤后患者软骨细胞凋亡的影响.中华老年医学杂志，2015，34（6）：654-655.

[2]宋长志，郑闽前，周晓晔，等.创伤后早期关节腔内注射透明质酸对关节软骨细胞凋亡的影响.实用骨科杂志，2013，19（1）：41-43.

[3]孙玺淳，巩凡，牛东生，等.脂肪间充质干细胞结合透明质酸钠对兔骨性关节炎治疗的实验研究.中国矫形外科杂志，2013，21（19）：1991-1997.

[4]王琮仁，张寿.兔骨髓间充质干细胞与透明质酸钠复合修复软骨的实验研究[J].实用临床医药杂志，2013，17（9）：1-4.

[5]尤建川，张延玖，何青松，等.关节软骨创伤早期关节腔内注射透明质酸对软骨细胞凋亡的影响.西部医学，2014，26（8）：1024-1026.

[6]赵良虎，刘典锋，黄金，等.透明质酸钠与糖皮质激素治疗早期膝关节骨性关节炎患者的临床观察.中国民康医学，2015，32（12）：17-18.