全自动微板检测技术在献血者血型检测工作中的应用

全自动微板检测技术在献血者血型检测工作中的应用

王志文刘莉欧阳飞

王志文刘莉欧阳飞

(江西省吉安市中心血站检验科江西吉安343000)【关键词】全自动；微板；检测；献血者；血型

【中图分类号】R247.4【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)10-0320-02根据GB18467-2001《献血者健康检查要求》4.2.1条款的相关规定［1］，血站必须对献血者的ABO血型和Rh血型进行检测。献血者血型检测以前多数血站是采用手工卡片法或试管法操作，批量检测工作量较大，易因手工机械性重复操作而产生血型差错。本血站自去年4月份开始使用深圳爱康Poseidon数字全自动血型仪结合TECAN全自动样本处理系统对献血者血液标本进行常规检测ABO血型和Rh（D）血型，至今年3月底共检测标本27355人次，检测出Rh（D）阴性献血者58例，阴性率为0.21%，发现外采初筛ABO血型错误8例，在实际工作中取得较好的效果，降低了工作强度，避免了人为因素导致的血型错误。血型检测的操作实现了自动化、标准化，并可将血型检测原始资料归档备份，提高了临床输血的安全性。现将我站全自动微板检测血型技术在实际工作中的应用体会及注意事项总结如下。

1材料与方法

1.1标本来源：2010年4月至2011年3月本站27355名无偿献血者EDTA-K2抗凝血液标本。

1.2仪器与材料：TECANRMP100全自动样本处理系统，爱康Poseidon数字全自动血型仪，新康X96型微量振荡器，奥林巴斯10×12孔V型底梯度微板，8×12孔深孔血球稀释板。

1.3试剂：抗A、抗B血型定型试剂（长春博德），使用前用生理盐水配成1：15的工作液；Rh（D）血型定型试剂（长春博德），使用前用生理盐水配成1：20的工作液；ABO反定型用红细胞（北京金豪）。

1.4应用软件：Poseidon血型分析系统V3.35。

1.5检测方法

1.5.1加样

（1）ABO正、反定型：梯度板第1、2、3列为反定型孔位，第4、5列为正定型孔位。加完标本血浆后直接吸取10ul标本浓缩RBC与300ul生理盐水在血球稀释板上进行混匀配制成稀释后标本RBC。正定型孔：分别加入25ul稀释后标本RBC和25ul正定试剂。反定型孔：分别加入12ul标本血浆和38ul反定型用红细胞。

（2）Rh（D）定型：标本的加样顺序按梯度板的竖列排序。每孔分别加入25ul稀释后标本RBC和25ul抗D试剂。

1.5.2震荡：加样完成后立即将梯度板放在微量振荡器上振荡，振荡频率以液体不溢出为宜，振荡时间为10秒左右，以孔中心无血球团为准。

1.5.3静置：振荡后静置1个小时（最少不得小于40分钟），放置过程中不能振动梯度板。

1.5.4判读：采用Poseidon数字全自动血型仪，利用CCD摄像数码分析技术进行凝集判别，对梯度板上的血型结果进行扫锚判读。结果判断方法：（1）单一孔结果：红细胞均匀分布在V型孔底的为阳性，红细胞沉降集中在孔底中央形成一点的为阴性，如有异常情况打“?”。（2）综合结果：ABO正反定型结果相符在“综合结果”栏给出正确的ABO血型。Rh（D）血型正常在“综合结果”栏给出正确的Rh（D）筛查血型。对ABO正反定型不符或任意单一孔打“?”，则在“综合结果”栏打“?”，此时要采用手工试管法进行结果复查。对复查结果仍为ABO正反定型不符和Rh（D）血型筛查阴性的标本，送我站血型参比室做进一步鉴定，依据鉴定结果对血型结果进行定论。

2结果

2.1对本站27355名无偿献血者标本进行常规检测ABO血型和Rh（D）血型，共筛查出Rh（D）阴性标本58例，阴性率为0.21%。将58例Rh（D）筛查阴性标本送血型参比室进行进一步鉴定，结果均为Rh（D）阴性。

2.2发现外采初筛ABO血型错误8例。

2.3发现ABO正反定型不符5例，其中3例为冷凝集素引起，2例为标本抗凝不全引起。

3讨论

ABO血型系统及Rh血型系统是在输血工作中最为重要的两个血型系统，献血者血型的正确鉴定是保证输血安全的基本前提。本站采用爱康数字全自动血型仪结合全自动样本处理系统对献血者ABO血型及Rh血型进行检测，本次共筛查出58例Rh（D）阴性，经血型参比室鉴定全部为Rh（D）阴性，阴性率为0.21%，符合我国汉族人群RhD阴性者占0.2%～0.5%的特点［2］。

本次共发现外采初筛ABO血型错误8例。我站街头献血是采用手工卡片法对献血者末梢血进行ABO正定型初筛，存在很多导致血型初筛差错的因素，如：工作现场冷热温差大，试剂保存条件差，效价下降并易受污染；献血人员太多时试验反应时间可能得不到保证；献血环境拥挤嘈杂会分散工作人员的注意力导致人为差错等。因此必须对献血后的复检标本进行ABO正反定型和Rh（D）血型复检试验，以确保血型结果正确无误。

本次共发现ABO正反定型不符5例，其中3例为冷凝集素引起，2例为标本抗凝不全引起。正常人血浆中含有少量冷凝集素，效价很低且＜4℃才有活性，一般对ABO定型无影响，但也有冷凝集素增高的个例，可导致室温环境下ABO正反定型不符。当外采人员留取献血者血液标本时如未及时颠倒混匀，会导致标本抗凝不好而引起血浆中纤维蛋白去除不完全，也会造成红细胞假性凝集，导致ABO血型正反定型不符。

我们认为全自动微板检测血型技术有以下优点：（1）采用全自动设备加样，加样量精确、加样速度快，降低了工作强度，避免了手工加样的人为误差和差错；（2）血液样本用量少和试剂用量少，节约试剂成本；（3）通过静置自然沉降的方法，排除由于离心等外力因素所至的假阳性和假阴性结果，提高了检测结果的准确性；（4）采用血型仪自动判读结果，可对血型检测原始记录进行打印和备份，保证了血型检测结果的可追朔性。

注意事项：该方法对梯度板的清洁要求较高，每次使用完梯度板后一定要及时清洗干净，不能有残余的蛋白，否则很容易出现假阳性。通常在2%戊二醛中消毒1小时后再用纯水浸泡过夜，最后甩干后倒扣在通风处自然晾干即可。参考文献

［1］GB18467-2001献血者健康检查要求.

［2］赵桐茂.人类血型遗传学.北京:科学技术出版社，1987：103－109.